【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体、表达该突变体的重组大肠杆菌及其应用，属于异构酶。
技术介绍
1、阿洛酮糖是一种功能性的稀有糖，甜度为蔗糖的70%，其口感与蔗糖类似或接近，但其热量却远低于蔗糖，因此国内外专家预测阿洛酮糖将成为新一代健康、功能性甜味剂。除可作为蔗糖替代品外，阿洛酮糖具有独特的生理功能特性，阿洛酮糖有抑制血糖升高、降血脂、抑制腹部脂肪堆积的保健特性，其潜在的保健价值逐渐被挖掘。
2、然而，d-阿洛酮糖在自然界中的存在量极其稀少，仅在部分植物（如小麦和鼠刺属植物）中有发现，直接提取导致资源浪费和环境破坏。化学合成d-阿洛酮糖的方法困难，且存在一些弊端，例如复杂的纯化过程、化学废弃物污染、生成副产物且价格昂贵等。生物转化法具有选择性好、反应条件温和的优点，且合成速度快、反应专一性强、对环境友好、产物纯化过程简单、底物廉价易得，因此d-阿洛酮糖的生物合成法成为了研究的热点。
3、d-阿洛酮糖-3-差向异构酶（简称为dpe酶）可以催化d-果糖和d-阿洛酮糖之间的相互转化，dpe酶催化d-果糖和d-阿洛酮糖之间的相互转化时，在反应过程中无需添加其他物质，由于其只有一步反应，反应后副产物少，有利于降低生产成本，使后续d-阿洛酮糖的分离更加方便，是目前最理想的大规模工业化生产d-阿洛酮糖的方法。
4、但来源于野生菌株未经改造的dpe酶，酶活不高，催化活性较低，用于d-果糖和d-阿洛酮糖的转化时，果糖的转化率较低，工业应用存在一定的局限性，限制了d-阿洛酮糖的大规模工业化生
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体、表达该突变体的重组大肠杆菌及其应用，实现以下专利技术目的：对d-阿洛酮糖-3-差向异构酶进行突变，获得d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，提高d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的酶活和催化活性。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采取以下技术方案：
3、一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的氨基酸序列如序列表中seq id no.10所示。
4、所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体相较于野生型d-阿洛酮糖-3-差向异构酶，共有3个氨基酸突变位点，分别为：第146位丝胺酸突变成苏氨酸、第177位的甘氨酸突变成丙氨酸、第205位的酪氨酸突变成组氨酸。
5、所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的核苷酸序列如序列表中seq id no.9所示。
6、表达所述突变体的重组大肠杆菌。
7、所述的d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体在合成d-阿洛酮糖中的应用。
8、与现有技术相比，本专利技术取得以下有益效果：
9、本专利技术所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，含有s146t、g177a、y205h突变位点，酶活相对于野生型d-阿洛酮糖-3-差向异构酶明显提高。本专利技术所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的酶活为同等条件下的野生型d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的2.04倍。
10、本专利技术所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，用于果糖和阿洛酮糖之间的转化时，提高果糖的转化率，降低了酶的用量，具有重要的工业应用价值。
11、本专利技术的d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的核苷酸序列，在大肠杆菌中表达量高，表达稳定，能够显著降低制备dpe酶的成本。
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1.一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，其特征在于：所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.10所示。
2.根据权利要求1所述的一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，其特征在于：所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.9所示。
3.表达权利要求1所述突变体的重组大肠杆菌。
4.权利要求1-2任一项所述的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体在合成D-阿洛酮糖中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，其特征在于：所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体的氨基酸序列如序列表中seq id no.10所示。
2.根据权利要求1所述的一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体，其特征在于：所述d-...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐春晖，付吉明，周晓琳，赵培培，柴光臻，张彩云，刘敏，丁立平，
申请(专利权)人：山东天力药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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