【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种基于短梯度液相质谱联用的代谢组学检测方法。
技术介绍
1、液相色谱和质谱联用技术，即将液相色谱和质谱结合起来的技术，利用此技术检测目标物质，可以获得目标物质的色谱保留时间、母离子质量数和强度、二级子离子的质量数和强度信息。此联用技术通过液相色谱对多种物理化学性质不同的物质进行分离，利用质谱对质量电荷比不同的多种物质进一步的分离，并记录多种物质各自的强度。液相质谱联用技术关键点在色谱柱类型，流动相种类、液相梯度、质谱仪器类型和质谱采集模式。
2、亲水物质是指物质具有极性结构，可以与水分子形成氢键等其他相互作用，在水溶液中的溶解度高于在乙腈或异丙醇等有机试剂的溶解度。用于检测亲水物质的液相色谱体系也称亲水体系。
3、疏水物质是指物质具有非极性结构，在水溶液中溶解度低甚至不溶，在乙腈、甲醇或异丙醇等有机试剂的溶解度高于水溶液。用于检测疏水物质的液相色谱体系也称疏水体系。
4、现有方法使用c18填料色谱柱检测所有亲水和疏水物质，由于亲水物质与c18的亲和力偏弱，大量亲水物质在色谱柱上不保留，即在死时间出峰，死时间出峰物质定量不准确，数据质量低，一次上机既检测亲水物质又检测疏水物质，会导致同分异构体分离度差，物质的鉴定不准确。
5、此外现有技术液相色谱中的梯度设置需要花费较长的时间才能实现色谱分离，样本采集一针一般需要15分钟，1000例人群队列样本上机至少需要11天，采集时间长会导致数据存在批次效应，影响数据采集的准确性。
1、针对现有技术的不足，本专利技术通过使用创新的短时间色谱梯度，缩短单个样本采集时间，降低因采集时间过长导致的批次效应。
2、为了实现上述目的，本专利技术第一个方面公开了用于液相色谱的短时间梯度，在配置的亲水和/或疏水液相体系中，设置适应的短时间梯度，实现色谱分离；
3、亲水体系中：梯度设置为0–0.25 min: 95% b，0.25–3.5min: 95% b to 65% b，3.5–4 min: 65% b to 40% b，4–4.5 min: 40% b，4.5–4.55 min: 40% b to 95% b，4.55–6 min: 95% b；
4、疏水体系中：梯度设置为0–0.5 min: 1% b，0.5–4min: 1% b to 99% b，4–4.5min: 99% b，4.5–4.55 min: 99% b-1% b，4.55–6 min: 1% b。
5、其中在亲水体系中，液相色谱a相为水相，含25-35 mmol/l乙酸铵和15-25 mmol/l氨水，b相为乙腈；流速0.3-0.5 ml/min，柱温：30 ℃，样品盘温度：4 ℃。亲水体系中使用的色谱柱为waters acquity uplc beh amide。
6、在疏水体系中：液相色谱a相为水相，含0.01%-1% 乙酸，b相为体积比为50%-63%的异丙醇和乙腈，流速0.3-0.5 ml/min，柱温：25 ℃，样品盘温度：4 ℃。疏水体系中使用的色谱柱为phenomenex kinetex c18。
7、本专利技术第二个方面公开了一种采用上述短时间梯度的高效液相色谱。采用上述短时间色谱梯度，单个样本采集时间短。
8、本专利技术第三个方面公开了上述基于短时间梯度的高效液相色谱与质谱联用的代谢组学检测方法，其中所述质谱使用orbitrap exploris 120 高分辨质谱；
9、离子源参数如下：sheath gas flow rate: 50 arb；
10、aux gas flow rate: 15 arb；
11、capillary temperature: 320℃；
12、sweep gas：1 arb；
13、vaporizer temp：300 ℃；
14、正离子喷雾针电压3.2 kv，负离子喷雾针电压3.2 kv；
15、一级质谱参数，采集模式full scan，分辨率60000，二级质谱参数，采集模式dda，分辨率15000。
16、相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
17、（1）本专利技术使用氨基填料色谱柱检测亲水物质，使用c18填料色谱柱检测疏水物质，提高亲水和疏水物质的色谱表现、同分异构分离度和鉴定准确度。
18、（2）通过使用高分辨质谱和优化的参数，提高物质定性的数目和准确度。
19、（3）通过使用创新的短时间色谱梯度，缩短单个样本采集时间，降低因采集时间过长导致的批次效应
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1.用于液相色谱的短时间梯度，其特征在于，在配置的亲水和/或疏水液相体系中，设置适应的短时间梯度，实现色谱分离；
2.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，在亲水体系中，液相色谱A相为水相，含25-35 mmol/L乙酸铵和15-25 mmol/L氨水，B相为乙腈；流速0.3-0.5 mL/min，柱温：30 ℃，样品盘温度：4 ℃。
3.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，亲水体系中使用的色谱柱为WatersACQUITY UPLC BEH Amide。
4.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，在疏水体系中：液相色谱A相为水相，含0.01%-1% 乙酸，B相为体积比为50%-63%的异丙醇和乙腈，流速0.3-0.5 mL/min，柱温：25 ℃，样品盘温度：4 ℃。
5.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，疏水体系中使用的色谱柱为Phenomenex Kinetex C18。
6.一种采用如权利要求1-5任一项所述的短时间梯度的高效液相色谱。
7.如权利要求6所述的高效液相色谱
...【技术特征摘要】
1.用于液相色谱的短时间梯度，其特征在于，在配置的亲水和/或疏水液相体系中，设置适应的短时间梯度，实现色谱分离；
2.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，在亲水体系中，液相色谱a相为水相，含25-35 mmol/l乙酸铵和15-25 mmol/l氨水，b相为乙腈；流速0.3-0.5 ml/min，柱温：30 ℃，样品盘温度：4 ℃。
3.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特征在于，亲水体系中使用的色谱柱为watersacquity uplc beh amide。
4.根据权利要求1所述的短时间梯度，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴洪强，李彤洲，杜杰，
申请(专利权)人：上海百趣生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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