【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白冻干粉制备领域，具体涉及一种重组巯基链霉亲和素冻干粉、溶液制备方法及其制备方法与其在生物分子的分离、检测和标记中的应用。
技术介绍
1、链霉亲和素（streptavidin）是一种与生物素具有高度亲和力的蛋白质，通常用于生物分子的分离、检测和标记。重组巯基链霉亲和素是一种经过基因工程改造的链霉亲和素，在蛋白c端添加了半胱氨酸，不仅保留了与生物素之间极高的亲和力，而且巯基功能团可以特异性地与载体上的反应性基团（如马来酰亚胺基团）形成共价键。这种定向偶联确保了链霉亲和素的活性位点暴露在外，能够与生物素高效结合，从而提高了偶联反应的结合效率和稳定性，避免了随机偶联带来的副反应和产物异质性问题。
2、链霉亲和素本身是一种四聚体结构蛋白。由于巯基是高度反应性的基团，容易与其他巯基发生氧化还原反应形成二硫键，因此在实际生产与使用过程中，重组巯基链霉亲和素容易形成八聚体甚至更高的聚体，从而导致生物素结合位点的空间位置被遮蔽、蛋白质表面非特异性结合位点增加、长期保存的稳定性下降以及偶联效率下降等一系列问题。在使用重组巯基链霉亲和素之前，一般需要用高浓度的还原剂例如二硫苏糖醇（dtt）或三(2-羧乙基)膦盐酸盐（tcep）处理，使其恢复四聚体形式。然而，这样处理后需要通过透析或凝胶过滤等手段去除还原剂，以避免其对偶联反应的干扰。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种重组巯基链霉亲和素的制备方法，该制备方法所制备的重组巯基链霉亲和素冻干粉能够保证蛋白的巯基稳定，便于储存
2、作为本专利技术第一方面，本专利技术提供一种重组巯基链霉亲和素冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
3、1）在重组巯基链霉亲和素原液、tcep、hepes的混合溶液中加入海藻糖，并控制混合后溶液的ph值为6.5-7.5；所述重组巯基链霉亲和素的浓度为5-10mg/ml，tcep的浓度为20 mm，hepes的浓度为20 mm，海藻糖的质量分数为1.5%；其中，现有的磷酸盐缓冲体系会与tcep发生相互作用，形成磷酸-tcep复合物，从而降低tcep的有效浓度，而本专利技术的hepes缓冲体系可以确保tcep的还原能力和稳定性。重组巯基链霉亲和素原液的ph值控制在6.5-7.5之间，可保证其与下游偶联基团的最佳反应性。
4、2）将混合后的液体冷冻干燥；冷冻干燥包括预冻、升华干燥和解析干燥三个阶段，具体操作条件分别为：预冻阶段温度设定在-50~-20℃，保持时间为60至300分钟；升华干燥阶段温度设定在-40~10℃，保持时间为300至1500分钟，真空度为0至0.5 mbar；解析干燥阶段温度设定在-20~20℃，保持时间为60至600分钟，真空度为0至0.01 mbar。
5、在本专利技术的某些实施例中，用20~60分钟从室温调整到预冻阶段的目标温度，用20~60分钟调整到升华干燥阶段的目标温度，用30至300分钟调整到解析干燥阶段的目标温度。
6、作为本专利技术第二方面，本专利技术提供上述方法制备得到的重组巯基链霉亲和素冻干粉。
7、作为本专利技术第三方面，本专利技术还提供一种基于重组巯基链霉亲和素冻干粉的溶液，其包括上述重组巯基链霉亲和素冻干粉和溶剂。
8、进一步地，上述溶液中的溶剂为纯水，纯水与所述重组巯基链霉亲和素冻干粉的用量比为1ml:10mg；
9、最后，本专利技术还提供重组巯基链霉亲和素冻干粉在生物分子的分离、检测、标记中的应用，具体的，上述该冻干粉及其溶液可广泛应用于生物传感器、蛋白质纯化、免疫检测、分子生物学、细胞生物学、纳米技术、药物递送和材料科学等领域。
10、本专利技术的有益效果在于：本专利技术利用真空冷冻干燥技术，经过对技术参数的实验摸索，成功将重组巯基链霉亲和素制备成冻干粉剂型，提高了该蛋白的复溶性和稳定性。同时本专利技术提供的冻干工艺和制备方法简单可行，条件温和，重现性好，可控性强，适合大规模生产。
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1.一种重组巯基链霉亲和素冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中pH值为7.0。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用20~60分钟从室温调整到预冻阶段的目标温度，然后用20~60分钟调整到升华干燥阶段的目标温度，最后用30至300分钟调整到解析干燥阶段的目标温度。
4.如权利要求1-3任一项所述方法制备得到的重组巯基链霉亲和素冻干粉。
5.一种基于重组巯基链霉亲和素冻干粉的溶液，其包括权利要求4所述的重组巯基链霉亲和素冻干粉和溶剂。
6.根据权利要求5所述的溶液，其特征在于，溶剂为纯水，纯水与所述重组巯基链霉亲和素冻干粉的用量比为1mL:10mg。
7.如权利要求4所述的重组巯基链霉亲和素冻干粉在生物分子的分离、检测、标记中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种重组巯基链霉亲和素冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中ph值为7.0。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用20~60分钟从室温调整到预冻阶段的目标温度，然后用20~60分钟调整到升华干燥阶段的目标温度，最后用30至300分钟调整到解析干燥阶段的目标温度。
4.如权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：高振飞，钱永常，邵冯金，来灿钢，
申请(专利权)人：杭州纽龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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