【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及本专利技术涉及甘蓝型油菜基因育种，尤其涉及甘蓝型油菜影响千粒重基因bnadof4.4分子标记的开发与应用。
技术介绍
1、油脂是人体必需脂肪酸的来源和油溶性营养素的介质，同时也是人体约30％的日常所需能量的来源。我国植物油的食用消费量占到其总消费量的90％以上，因此，植物油作为中国百姓每餐必备的大宗农产品，有着仅次于粮食的重要地位。尽管我国国产油料压榨的植物油产量不断增加，但作为世界植物油消费大国，我国植物油自给率低的状况长期未能妥善解决。主要原因在于植物油食用消费需求旺盛，消费增速远高于国产供给增速。解决中国植物油供给问题的首要任务是提升我国油料产能，根本出路在于大力发展油菜生产。
2、千粒重作为油菜产量性状之一，在国内油菜高密度种植条件下，提高千粒重是提高油菜产量的有效方法。近年来中国油菜片区资料汇总信息显示，油菜产量的增加主要归功于千粒重的增加，因此提高油菜种子千粒重对于甘蓝型油菜产量的提高具有重要的意义。随着分子标记、snp芯片等技术的发展，越来越多调控甘蓝型油菜千粒重的基因被定位与克隆。liu等(2015)成功克隆了第一个影响千粒重的基因bnaarf18。shi等(2019)利用图位克隆得到1个影响千粒重的基因bnacyp78a9d。
3、近年来，随着生物技术的发展，分子标记辅助育种技术成为育种领域的重要手段。通过分子标记，能够快速、准确地筛选出具有优良性状的育种材料，从而加快优良品种的培育进程。dna分子标记，如简单重复序列(ssr)、单核苷酸多态性(snp)、插入/缺失(ind
4、申请人申请的中国专利技术专利申请(公开号：cn118048470a，公开日：2024-05-17)公开了甘蓝型油菜调控含油量积累基因bnlec1分子标记的开发与应用。发现bnlec1-a07启动子区域16626069位碱基处出现265bp的插入片段，该位点的变异导致1.3-2.0百分点的含油量差异。这种基于重测序挖掘的indel可以在分子水平准确的鉴定品种间的含油量差异。
5、以及，申请人申请的中国专利技术专利申请(公开号：cn118600073a，公开日：2024-09-06)公开了甘蓝型油菜调控含油量积累相关的indel位点基因及其在遗传育种中应用。该申请indel位点基因为bnfus3-a06启动子区域44856229位碱基处出现273bp的片段缺失，该位点的变异导致1.0-1.4百分点的含油量差异。这种基于重测序挖掘的indel可以在分子水平准确的鉴定品种间的含油量差异。
6、现有的油菜育种技术在提高千粒重方面依赖于传统的表型选择方法，效率较低且周期较长。如何利用分子标记辅助选择技术，实现对千粒重性状的快速筛选和精准育种，是当前油菜育种领域亟待解决的技术问题。因此，开发能够有效提高油菜千粒重的分子标记，成为提高油菜产量和育种效率的关键。
技术实现思路
1、为了解决上述的技术问题，本专利技术的目的是提供一种影响甘蓝型油菜千粒重的indel位点基因，indel位点基因位于bnadof4.4-a01启动子区域6549636位碱基处出现29bp的缺失片段，该位点的变异导致0.30-0.56(g)千粒重差异。通过对该基因的深入研究，可以设计特异性引物，利用pcr技术进行基因分型，快速、准确地筛选出优良品种。基于此分子标记的应用，可以显著加快油菜育种的进程，提升油菜的生产效率，满足市场对高产优质油菜品种的需求。
2、为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：
3、一种影响甘蓝型油菜千粒重的indel位点基因，该indel位点基因包括核苷酸序列如seq id no:1所示的参照基因组和如seq id no:2所示的缺失基因组。indel位点基因位于bnadof4.4-a01启动子区域6549636位碱基处出现29bp的缺失片段，该位点的变异导致0.30-0.56(g)千粒重差异。
4、进一步，本专利技术还公开了所述的indel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜千粒重的检测试剂中的应用。
5、进一步，本专利技术还公开了一种检测所述的indel位点基因的引物对。
6、作为优选，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-atctttgacatgtttggcc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-cattcagttgagtgtgtcc-3’。
7、进一步，本专利技术还公开了一种包含所述的引物对的试剂盒。
8、进一步，本专利技术还公开了所述的indel位点基因、所述的引物对或所述的试剂盒在提高甘蓝型油菜千粒重遗传育种中应用，参照基因组与缺失基因组位点变异导致千粒重差异。
9、进一步，本专利技术还公开了一种筛选提高千粒重甘蓝型油菜的方法，该方法包括以下的步骤：
10、1)提取甘蓝型油菜dna；
11、2)利用所述的引物对进行pcr扩增，对扩增产物中的所述的indel位点基因进行检测，参照基因组与缺失基因组位点变异导致千粒重差异；从而筛选筛选甘蓝型油菜千粒重性状。
12、作为优选，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-atctttgacatgtttggcc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-cattcagttgagtgtgtcc-3’。
13、作为优选，pcr扩增体系如下：
14、2×taqplusmastermixⅱ12.5μl；
15、上游引物1μl；
16、下游引物1μl；
17、ddh2o定容到25μl。
18、作为优选，pcr程序如下:
19、1)95℃预变性3分钟；
20、2)95℃变性15秒，50℃退火15秒，72℃延伸30秒，共28个循环；
21、3)72℃最终延伸5分钟。
22、进一步，本专利技术还公开了一种提高千粒重的甘蓝型油菜，该甘蓝型油菜的基因中含有核苷酸序列如seq id no:1所示的参照基因组。
23、本专利技术由于采用了上述的技术方案，提供了一种基于甘蓝型油菜bnadof4.4基因启动子区域的indel分子标记，该标记能够有效区分千粒重差异显著的油菜品种，进而在分子育种中加快高产油菜品种的选育过程。通过应用该分子标记进行分子标记辅助选择(mas)，能够快速、准确地筛选出具有较大千粒重的油菜材料。与传统的表型选择方法相比，本专利技术具有以下技术效果：
24、1、提高选择效率：利用本专利技术的indel分子标记，育种者可以在早期阶段通过pcr扩增和基因分型快速筛选出具有较大千粒重的油菜材料，避免了繁琐且周期长的田间考种过程本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种影响甘蓝型油菜千粒重的InDel位点基因，该InDel位点基因包括核苷酸序列如SEQID NO:1所示的参照基因组和如SEQID NO:2所示的缺失基因组。
2.权利要求1所述的InDel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜千粒重的检测试剂中的应用。
3.一种检测权利要求1所述的InDel位点基因的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-ATCTTTGACATGTTTGGCC-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-CATTCAGTTGAGTGTGTCC-3’。
5.一种包含权利要求3或4所述的引物对的试剂盒。
6.权利要求1所述的InDel位点基因、权利要求3或4所述的引物对或权利要求6所述的试剂盒在提高甘蓝型油菜千粒重遗传育种中应用，参照基因组与缺失基因组位点变异导致0.30-0.56g的千粒重差异。
7.一种筛选提高千粒重甘蓝型油菜的方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤： 1）提取甘蓝型油菜DNA； 2）利用权利要求3或4所述的引物对进行PCR扩
8.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-ATCTTTGACATGTTTGGCC-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-CATTCAGTTGAGTGTGTCC-3’。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，PCR扩增体系如下： 2 × Taq PlusMaster Mix Ⅱ 12.5μL；
10.一种提高千粒重的甘蓝型油菜，其特征在于，该甘蓝型油菜的基因中含有核苷酸序列如SEQID NO:1所示的参照基因组。
...【技术特征摘要】
1.一种影响甘蓝型油菜千粒重的indel位点基因，该indel位点基因包括核苷酸序列如seqid no:1所示的参照基因组和如seqid no:2所示的缺失基因组。
2.权利要求1所述的indel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜千粒重的检测试剂中的应用。
3.一种检测权利要求1所述的indel位点基因的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-atctttgacatgtttggcc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-cattcagttgagtgtgtcc-3’。
5.一种包含权利要求3或4所述的引物对的试剂盒。
6.权利要求1所述的indel位点基因、权利要求3或4所述的引物对或权利要求6所述的试剂盒在提高甘蓝型油菜千粒重遗传育种中应用，参照基因组与缺失基因组位点变异导致0.30-0.56g的...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱论文，李文，姚敏，邱萍，何昕，蓝星杰，李果，熊兴华，刘忠松，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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