【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及由cd4+t淋巴细胞识别的组合使用的新表位。此外，本专利技术涉及此类表位及其组合的用途，特别是用于治疗或预防sars-cov-2病毒引起的疾病。此外，本专利技术涉及用于鉴定组合中使用的表位的方法和用于预防sars-cov-2引起的感染的方法。具体而言，本专利技术涉及在具有sars-cov-2刺突蛋白受体结合域(rbd)单体或二聚体的构建体中，包含至少8个来自sars-cov-2的t细胞表位的组合。此外，本专利技术可用于诱导对covid-19疫苗抗原和突破性感染的增强t细胞应答。因此，本专利技术还描述了所述组合用于生产疫苗的用途。
技术介绍
1、尽管针对covid-19的疫苗已被用作应对covid-19大流行的重要措施，但全世界社会都普遍认识到，目前使用的疫苗不足以根除病毒，甚至不足以防止再次感染或传播。
2、此外，自2021年底开始接种疫苗以来，世界在covid-19大流行方面面临着进一步的挑战。制造、购买和分发以实现全球覆盖仍然是一项艰巨的物流和财务任务，尤其是在中低收入国家和偏远地区。因此，各国之间疫苗分配不均导致疫苗接种覆盖率低，远远达不到控制大流行所需的免疫人群比例，这也助长了新变种的出现。
3、因此，仍然迫切需要能够诱导针对sars-cov-2病毒的更好的免疫反应的疫苗，这些疫苗可靠、成本低、易于处理和储存，但最重要的是，具有高度抗原性/免疫原性，包括更好的细胞(t细胞介导的)免疫反应，其比冠状病毒感染中的抗体更持久。
4、现有技术中已经公开的文献试图在免疫反应方面提供
5、文献wo2021195286公开了使用rbd多肽治疗和预防冠状病毒的组合物和方法。
6、文献in202011018845公开了设计用于表达sars-cov-2刺突蛋白的rbd的密码子优化的核苷酸序列。该文献描述的技术方案旨在鉴定具有抗病毒潜力的小分子或肽，以开发基于抗原抗体的诊断测试，并发现和验证针对sars-cov-2rbd的抗体。
7、这些文献均未提供所述技术方案。
8、因此，本专利技术的目的是提供一种诱导更好的细胞免疫反应的疫苗构建体。
9、为了实现所述目的，有必要鉴定一组具有广泛人群覆盖率的sars-cov-2t细胞表位，其与sars-cov-2病毒的刺突蛋白的单体或二聚体rbd结合能够在所有暴露于病毒的人群中诱导更高的细胞免疫反应。
10、此类免疫优势肽的鉴定并不是显而易见的。此外，鉴于t细胞表位识别的性质，单个t细胞表位不太可能被所有个体识别。因此，有必要使用免疫优势t细胞表位的组合来最大化疫苗的覆盖范围。
11、根据计算机模拟分析，表位数量的增加将允许每个hla-drb1和每个个体识别更多数量的肽，当使用seq id no:1至19的完整肽组时，每个hla-drb1可达到最少10个肽。每个个体识别的表位数量增加会增加疫苗接种的幅度和覆盖范围。每个接种者识别的肽越多，突变就越难以危及疫苗诱导的对新突变病毒的保护。具有足够广度(每个个体识别的t细胞表位数量)的完全覆盖是混杂hla结合表位的组合的预期新兴特性。在遗传异质的群体中，每个表位单独地永远不会像混杂的多个hla-dr结合单个表位的组合那样具有抗原性/免疫原性。
12、因此，本专利技术公开了一种技术方案，即鉴定一组能够结合多个hla ii类分子的sars-cov-2肽并用在针对sars-cov-2病毒的疫苗构建体中。
13、因此，每个个体都会携带能够向t细胞呈递多个此类sars-cov2肽的hla。这将允许绝大多数接种疫苗的人群对多个表位产生t细胞反应。
14、此外，在疫苗中，cd8+t细胞表位对于破坏病毒感染的细胞至关重要，并且有助于控制后续感染或再感染。鉴定具有广泛人群覆盖范围的cd8+t细胞表位的方法是寻找与覆盖绝大多数人群的hla i类分子/等位基因稳定结合的肽。
15、根据本专利技术的鉴定方法，可以鉴定出数种肽，这些肽的识别相当于现有技术中教导的数百种肽，但是由于本专利技术采用少量肽而不是数百种肽，因此所需的资源要少得多。
16、序列表的简要描述
17、阅读以下非限制性的详细描述和本文提供的序列表后，将更清楚地理解本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术涉及一种包含至少8个来自sars-cov-2的t细胞表位的表位组合，以及所述组合(“表位组”)的用途。所述表位被绝大多数covid-19恢复期个体的cd4+t淋巴细胞广泛识别。
2、本专利技术的另一个目的是包含单个多肽的氨基酸序列的疫苗构建体。
3、此外，本专利技术还体现了一种诱导免疫反应的方法，包括施用所述疫苗构建体。
4、此外，本专利技术涉及一种用于鉴定疫苗的sars-cov-2t细胞表位最佳组合的方法，以实现对世界人群的高覆盖，其包括以下步骤：
5、a)从整个sars-cov-2蛋白质组序列中选择肽，其中所述肽与生物信息学服务器https://webs.iiitd.edu.in/raghava/propred/中至少50％的hla-dr分子结合；
6、b)扩展选择的所述肽在n末端和c末端的序列；
7、c)基于iedb.org网站上预测与肽结合的hla分子频率进行世界人群覆盖率研究；
8、d)合成相应的肽；
9、e)确认并测试患有轻度covid-19疾病(未住院)且恢复良好的敏感个体的sars-cov-2特异性反应。
10、本专利技术的另一个目的是表位组/表位组合用于生产使用sars-cov-2病毒刺突蛋白的二聚体或单体rbd的疫苗构建体的用途。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.表位组合，其中，所述组合包含至少8个来自SARS-CoV-2的T细胞表位。
2.根据权利要求1所述的表位组合，其中，所述表位被CD4+T淋巴细胞广泛识别。
3.根据权利要求1至2所述的表位组合，其中，所述T细胞表位选自SEQ ID NO:1至SEQID NO:19。
4.根据权利要求3所述的表位组合，其中，所述T细胞表位选自：SEQ ID NO:4；SEQ IDNO:5；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16。
5.疫苗构建体，其包含如下所示的单个多肽链的氨基酸序列
6.根据权利要求5所述的疫苗构建体，其中，所述新型乙型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突(S)蛋白受体结合域(RBD)和所述肽串通过EAAAKEAAAKEAAAK(SEQ ID NO：58至67)、KPKPKP(SEQ ID NO：70、72、74和75)、GGGGS(SEQ ID NO：71和73)或PKPK(SEQ ID NO：68、69、76和77)序列连接
7.根据权利要求5所述的疫苗构建体，其中，第(2)项的RBD1、RBD2和RBD3代表来自任何新关注变体的乙型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突(S)蛋白受体结合域(RBD)的氨基酸序列。
8.疫苗构建体，其包含与RBD单体或二聚体组合的以合成肽形式的CD4+T细胞表位。
9.根据权利要求6所述的疫苗构建体，其中，所述组合的肽如SEQ ID NO:46至53所示。
10.疫苗构建体，其中，其包括：
11.根据权利要求5至10所述的疫苗构建体，其中，所述疫苗构建体还包含一种或多种药学上可接受的佐剂、媒介物、赋形剂、粘合剂、载体或防腐剂。
12.诱导免疫反应的方法，包括施用根据权利要求5至11中任一项所定义的疫苗构建体。
13.用于鉴定疫苗的SARS-CoV-2T细胞表位的方法，包括以下步骤：
14.如权利要求1至4中定义的组合用于生产如权利要求5至11中任一项所述的疫苗构建体的用途。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.表位组合，其中，所述组合包含至少8个来自sars-cov-2的t细胞表位。
2.根据权利要求1所述的表位组合，其中，所述表位被cd4+t淋巴细胞广泛识别。
3.根据权利要求1至2所述的表位组合，其中，所述t细胞表位选自seq id no:1至seqid no:19。
4.根据权利要求3所述的表位组合，其中，所述t细胞表位选自：seq id no:4；seq idno:5；seq id no:11；seq id no:12；seq id no:13；seq id no:14和seq id no:16。
5.疫苗构建体，其包含如下所示的单个多肽链的氨基酸序列
6.根据权利要求5所述的疫苗构建体，其中，所述新型乙型冠状病毒(sars-cov-2)刺突(s)蛋白受体结合域(rbd)和所述肽串通过eaaakeaaakeaaak(seq id no：58至67)、kpkpkp(seq id no：70、72、74和75)、ggggs(seq id no：71和73)或pkpk(s...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·E·卡利尔·菲洛，埃迪西奥·C·内图，丹妮拉·S·罗莎，凯迪·S·桑托斯，西尔维亚·B·博斯卡丁，马可·A·斯特凡诺，
申请(专利权)人：泽比尼基金会，
类型：发明
国别省市：
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