【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学，具体而言，涉及一种关节液α防御素核酸适配体及其检测产品。
技术介绍
1、临床上诊断关节假体周围感染(periprosthetic joint infections，pji)主要是根据患者关节局部症状、临床表现，但是关节假体周围感染常常表现为低毒性感染，单纯依靠症状诊断关节假体周围感染并不可靠；再者低毒性感染的微生物培养阳性率不高，血清学炎性指标容易受全身疾病的影响。
2、由于上述局限，越来越多的学者致力于寻找新的关节液生物标记物，其中以α防御素最为被临床医生关注，有证据表明在关节假体周围感染的患者中，不论病原体的毒力如何，都将释放α防御素到关节液。目前常用的α防御素定量检测是通过elisa法，缺点是需要将样品送到实验室进行检测，而且检测过程复杂、耗时较长；也有商品化试纸可以定性检测α防御素，虽然使用简便，但是α防御素检测准确性明显降低，最终影响到临床判断。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种关节液α防御素核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如seq id no:6所示。
2、具体的，所述关节液α防御素核酸适配体还可以是由前述的核酸适配体进行核苷酸删减、增加或置换后获得的与核苷酸序列为seq id no:6所示的核酸适配体具有相同特异性识别功能的单链dna分子。
3、优选的，所述的关节液α防御素核酸适配体由前述的核酸适配体进行核苷酸删减得到的，其核苷酸序列如seq id no:7所示。
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5、本专利技术还提供一种前述的关节液α防御素核酸适配体在制备诊断关节假体周围感染的产品中的应用。
6、具体的，本专利技术提供一种诊断关节假体周围感染的试剂盒，所述试剂盒包括前述的关节液α防御素核酸适配体。
7、进一步的，所述试剂盒还包括淬灭链，所述淬灭链为一段与所述关节液α防御素核酸适配体的核苷酸序列碱基互补配对的核酸片段。
8、更进一步的，所述淬灭链的核苷酸序列如seq id no:5所示。所述试剂盒还包括含1mg/ml bsa的pbs+mg2+缓冲液和α防御素标准品，所述缓冲液用于溶解所述α防御素标准品，所述pbs+mg2+缓冲液为含1mm mg2+的pbs溶液。所述试剂盒还包括含1mm mg2+的pbs溶液，所述1mm mg2+的pbs溶液用于配制适配体-淬灭链孵育体系溶液和溶解待测样品。
9、本专利技术的有益效果包括：
10、1.本专利技术筛选得到的核酸适配体s9-60与α防御素的亲和力高，kd值为0.928μm，在10-7数量级已可媲美蛋白质抗体(蛋白质抗体kd值一般在10-6-10-9数量级)。s9-60作为核酸适配体可用于定量检测关节液α防御素，其化学特性决定了其在热稳定性、经济性、批次间一致性等方面全面优于目前通用的蛋白质抗体。
11、2.采用本专利技术适配体s9-60定量检测关节液α防御素的方法在测定关节样本α防御素用于pji诊断的试验中，auc、灵敏度、特异度分别为0.882、90.6％、80.9％，全面优于采用蛋白质抗体的商品试剂盒(厂商r&d，auc、灵敏度、特异度分别为0.763、73.4％、70.8％)。
12、3.本专利技术适配体s9-60定量检测关节液α防御素的方法在时间成本和经济成本两方面显著优于采用蛋白质抗体的商品试剂盒(r&d)：两者耗时分别约为75～90分钟和20～22个小时；每份次样本的测定成本分别约为7～15cny、120～160cny。
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1.一种关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQID NO:6所示。
2.一种关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，由权利要求1所述的核酸适配体进行核苷酸删减、增加或置换后获得的与权利要求1所述的核酸适配体具有相同特异性识别功能的单链DNA分子。
3.根据权利要求2所述的关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，由权利要求1所述的核酸适配体进行核苷酸删减得到的，其核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。
4.权利要求1-3任一项所述的关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上偶联有荧光基团、淬灭基团、生物素、纳米材料、巯基、氨基或酶。
5.权利要求1-4任一项所述的关节液α防御素核酸适配体在制备诊断关节假体周围感染的产品中的应用。
6.一种诊断关节假体周围感染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-4任一项所述的关节液α防御素核酸适配体。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括淬灭链，所述淬灭链为一段与所述关节液α防御素核酸适配
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述淬灭链的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括含1mg/mL BSA的PBS+Mg2+缓冲液和α防御素标准品，所述缓冲液用于溶解所述α防御素标准品，所述PBS+Mg2+缓冲液为含1mM Mg2+的PBS溶液。
10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括含1mM Mg2+的PBS溶液，所述1mM Mg2+的PBS溶液用于配制适配体-淬灭链孵育体系溶液和溶解待测样品。
...【技术特征摘要】
1.一种关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列如seqid no:6所示。
2.一种关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，由权利要求1所述的核酸适配体进行核苷酸删减、增加或置换后获得的与权利要求1所述的核酸适配体具有相同特异性识别功能的单链dna分子。
3.根据权利要求2所述的关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，由权利要求1所述的核酸适配体进行核苷酸删减得到的，其核苷酸序列如seq id no:7所示。
4.权利要求1-3任一项所述的关节液α防御素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上偶联有荧光基团、淬灭基团、生物素、纳米材料、巯基、氨基或酶。
5.权利要求1-4任一项所述的关节液α防御素核酸适配体在制备诊断关节假体周围感染的产品中的应用。
6.一种诊断关节假体周围感染的试...
【专利技术属性】
技术研发人员：付君，崔廷润，盛景，上官棣华，徐驰，郝立波，陈继营，张国强，柴伟，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第四医学中心，
类型：发明
国别省市：
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