【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，尤其是涉及一种硫化氢递送体系及其构建方法与应用。
技术介绍
1、肿瘤内促血管生成和抗血管生成失衡，导致肿瘤血管功能异常，继而形成缺氧及免疫抑制等肿瘤微环境，是化疗、免疫治疗等疗效差的关键因素。研究证明低剂量抗血管生成药物能调控这种平衡，使肿瘤血管正常化，重塑肿瘤微环境，有效提升化疗、免疫疗法敏感性。复旦大学附属肿瘤医院邵志敏教授团队针对三阴性乳腺癌(triple negativebreast cancer,tnbc)的future系列研究结果表明，低剂量抗血管生成联合免疫治疗使超50％tnbc患者中位pfs达到8.2个月，远优于化疗的1.7-5.6个月。但该类药物血管正常化时间窗口窄，且需长期使用，导致全身性抗血管生成毒性，如静脉血栓和高血压等。因此，迫切需要开发精准调控肿瘤血管正常化的药物和策略。
2、h2s是继no和co之后，被发现的第三种气体信号传导物质，且被证明能调控血管生成、免疫细胞浸润等功能，均与肿瘤血管正常化调控相关。尽管h2s能用于调控肿瘤血管正常化，但还存在一些问题亟需解决：(1)如何降低h2s全身抗血管毒性，并延长血管正常化窗口；(2)h2s调控抗血管生成和促血管生成平衡的规律及机制仍需要进一步探究；(3)延长肿瘤血管正常化时间窗口能否影响肿瘤进展和转移。因此，构建靶向肿瘤的h2s精准递送体系，并探索其对肿瘤血管正常化的调变规律和作用机制，有望降低全身抗血管毒性，延长血管正常化时间窗口，增敏肿瘤化疗、免疫治疗效果，不仅有重要的科学意义，还有广阔临床应用前景。
>技术实现思路
1、本专利技术的目的就是为了基于现有技术缺乏硫化氢的精准递送的现状而提供一种硫化氢递送体系及其构建方法与应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术的技术方案之一为提供一种硫化氢递送体系的构建方法，包括如下步骤：
4、s1、将2-硝基咪唑溶解于n,n-二甲基甲酰胺中，然后加入碳酸钾和n-(叔丁氧基羰基-氨基)-溴己烷进行反应，得到boc基团(t-butyloxy carbonyl，叔丁氧羰基)保护的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺；
5、s2、将s1步骤得到2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺溶解于二氯甲烷中，然后加入三氟乙酸进行反应，脱去boc基团，得到2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺；
6、s3、在透明质酸水溶液中加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺进行反应，激活透明质酸上的羧基，再加入s2步骤得到的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺进行反应，得到透明质酸-硝基咪唑递送体系；
7、s4、将硫化氢供体分散于二甲基亚砜中，作为有机相并滴入到搅拌状态的由s3步骤得到的透明质酸-硝基咪唑递送体系水溶液中，再滴入到搅拌状态的水中，得到硫化氢递送体系。
8、在一些具体实施方式中，于s1步骤，所述的2-硝基咪唑、碳酸钾、n-(叔丁氧基羰基-氨基)-溴己烷的摩尔比为1：2：1。
9、在一些具体实施方式中，于s1步骤，所述的反应中，反应温度为80～85℃，搅拌反应8～12h。
10、在一些具体实施方式中，于s1步骤，在反应结束后，用蒸馏水和乙酸乙酯萃取并收集有机层，干燥蒸发得到boc基团保护的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺。
11、在一些具体实施方式中，于s2步骤，所述的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺在二氯甲烷中的浓度为80mg/ml，二氯甲烷、三氟乙酸的体积比为2：1。
12、在一些具体实施方式中，于s2步骤，所述的反应中，反应温度为20～25℃，搅拌反应3～6h。
13、在一些具体实施方式中，于s2步骤，在反应结束后，用饱和碳酸氢钠调节溶液为碱性，用蒸馏水和乙酸乙酯萃取并收集有机层，干燥蒸发得到2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺。
14、在一些具体实施方式中，于s3步骤，所述的透明质酸水溶液中透明质酸的浓度为20mg/ml；透明质酸、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、n-羟基琥珀酰亚胺、2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺的摩尔比为1：4：4：2。
15、在一些具体实施方式中，于s3步骤，所述的加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺进行反应的条件为：在0～5℃条件下搅拌1～2h；
16、加入s2步骤得到的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺进行反应的条件为：在20～25℃下搅拌12～24h。
17、在一些具体实施方式中，于s3步骤，反应结束后，在蒸馏水中透析24～48h，再经冷冻干燥后得到透明质酸-硝基咪唑递送体系。
18、在一些具体实施方式中，于s3步骤，所述的冷冻干燥的条件为：真空度为1pa，温度为-70～-50℃，时间为48～96h。
19、在一些具体实施方式中，于s4步骤，所述的透明质酸-硝基咪唑递送体系水溶液的浓度为1-25mg/ml，硫化氢供体和透明质酸-硝基咪唑递送体系的质量比为1：10，二甲基亚砜和水的体积比为1：4。
20、在一些具体实施方式中，于s4步骤，所述的滴加到透明质酸-硝基咪唑递送体系水溶液的流速为1～10ml/h，滴加到水中的流速为4～6ml/h，并在20～25℃下搅拌12～24h。
21、在一些具体实施方式中，于s4步骤，滴加结束后，在蒸馏水中透析，再经冷冻干燥后得到硫化氢递送体系。
22、在一些具体实施方式中，于s4步骤，所述的透析使用透析分子量2000da的透析袋。
23、在一些具体实施方式中，于s4步骤，所述的冷冻干燥的条件为：真空度为1pa，温度为-70～-50℃，时间为48～96h。
24、本专利技术的技术方案之二为提供一种硫化氢递送体系，基于上述技术方案之一所述的构建方法得到。
25、本专利技术的技术方案之三为提供一种如上述技术方案之二所述的硫化氢递送体系的应用，所述硫化氢递送体系用于制备调变肿瘤血管正常化药物上的应用。
26、本专利技术所采用的硫化氢富集于肿瘤的乏氧区时，具有调控血管正常化的特性，但对促和抗肿瘤血管生成平衡以及免疫细胞浸润的调控具有浓度依赖性，因此选择长效缓释的h2s供体并将其精准递送，是降低全身毒性，并延长肿瘤血管正常化时间窗口的关键。
27、本专利技术所采用的透明质酸是一种广泛存在于人体中的高分子多糖，是一种安全的生物大分子，靶向于肿瘤细胞cd44受体，具有良好的生物相容性和靶向性；硝基咪唑是一种乏氧响应基团。因此本专利技术首先通过霍夫曼烷基化反应和脱叔丁氧基羰基反应将2-硝基咪唑转换为2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺，通过酰胺合成反应将其接枝到透明质酸上，再通过乳液扩散法制备负载硫化氢供体，生成硫化氢精准递送体系，实现将硫化氢精准递送至肿瘤乏氧区，调控肿瘤血管正常化。
28、本专利技术制备得到的硫化氢递送体系在体内中的作用机理为：
29、硫化氢递送体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步骤，所述的2-硝基咪唑、碳酸钾、N-(叔丁氧基羰基-氨基)-溴己烷的摩尔比为1：2：1。
3.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步骤，于S1步骤，所述的反应中，反应温度为80～85℃，搅拌反应8～12h。
4.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步骤，于S2步骤，所述的2-(2-硝基-1H-咪唑)己胺在二氯甲烷中的浓度为80mg/mL，二氯甲烷、三氟乙酸的体积比为2：1。
5.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步骤，于S2步骤，所述的反应中，反应温度为20～25℃，搅拌反应3～6h。
6.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步骤，于S3步骤，所述的透明质酸水溶液中透明质酸的浓度为20mg/mL；
7.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S1步
8.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于S4步骤，所述的透明质酸-硝基咪唑递送体系水溶液的浓度为1-25mg/mL，硫化氢供体和透明质酸-硝基咪唑递送体系的质量比为1：10，二甲基亚砜和水的体积比为1：4；
9.一种硫化氢递送体系，其特征在于，基于权利要求1-8任一所述的构建方法得到。
10.根据权利要求9所述的硫化氢递送体系的应用，其特征在于，所述硫化氢递送体系用于制备调变肿瘤血管正常化药物上的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于s1步骤，所述的2-硝基咪唑、碳酸钾、n-(叔丁氧基羰基-氨基)-溴己烷的摩尔比为1：2：1。
3.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于s1步骤，于s1步骤，所述的反应中，反应温度为80～85℃，搅拌反应8～12h。
4.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于s1步骤，于s2步骤，所述的2-(2-硝基-1h-咪唑)己胺在二氯甲烷中的浓度为80mg/ml，二氯甲烷、三氟乙酸的体积比为2：1。
5.根据权利要求1所述的硫化氢递送体系的构建方法，其特征在于，于s1步骤，于s2步骤，所述的反应中，反应温度为20～25℃，搅拌反应3～6h。
6.根据权利要求1所述的硫化氢...
【专利技术属性】
技术研发人员：田启威，王梦新，黄钢，吴丹，沙爽，
申请(专利权)人：上海健康医学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。