具有NAMPT活性的蛋白质和NMN的制造方法技术

技术编号：43404902 阅读：12 留言：0更新日期：2024-11-22 17:44

本发明专利技术的蛋白质为具有烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的、下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质。[1]由序列号3或5所示的氨基酸序列构成的蛋白质；[2]由在序列号3或5所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入或添加1～20个氨基酸而成的氨基酸序列构成的突变蛋白；[3]由与序列号3或5所示的氨基酸序列具有90%以上的一致性的氨基酸序列构成的同源蛋白。

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)活性的蛋白质和使用该蛋白质的烟酰胺单核苷酸(nmn)的制造方法。

技术介绍

1、烟酰胺单核苷酸(nmn)为哺乳类中用作电子传递体的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的前体，已知有线粒体的活化、sirtuin基因的活化等多种功能，作为补充剂而受到期待(非专利文献1、非专利文献2)。

2、作为nmn的制造方法，已知有化学合成法(专利文献1)、nad的酶解法(非专利文献3)、从酵母提取的方法(专利文献2)等。但是，这些制法存在生产率低、制备成本高的课题，需要更廉价、高效的制造方法。

3、作为更高效的制造方法，已知通过使烟酰胺(nam)与通过酶法或生物学方法生成的磷酸核糖焦磷酸(prpp)在菌体内缩合而制造nmn的方法(非专利文献4、5、6和专利文献3)。在该烟酰胺与prpp的缩合反应中，使用烟酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)。已知nampt在人体内也参与nmn合成(非专利文献7)，认为是nmn合成的关键酶。

4、作为nampt，可列举例如非专利文献4中公开的来自杜克雷嗜血杆菌(haemophilusducreyi)的nampt。另外，非专利文献5公开了来自奥奈达希瓦氏菌(shewanellaoneidensis)、鞘氨醇盒菌(sphingopyxis sp.)c-1、松树噬几丁质菌(chitinophagapinensis)、智人(homo sapiens)、野猪(sus scrofa)、小家鼠(mus musculus)、大弹涂鱼(boleophth

5、现有技术文献

6、专利文献

7、专利文献1：国际公开第2016/160524号

8、专利文献2：国际公开第2017/022768号

9、专利文献3：国际公开第2019/065876号

10、非专利文献

11、非专利文献1：kim baumann, “counteracting toxic protein aggregation”,nature reviews molecular cell biology 17 (2016) 679-690

12、非专利文献2：rui-xiong huang et al., “nicotinamide mononucleotideattenuates glucocorticoid-induced osteogenic inhibition by regulating thesirt1/pgc-1α signaling pathway”, molecular medicine reports 22 (2020) 145-154

13、非专利文献3：e. harth et al., “control of photosynthetic oxygenevolution by the internal ph of the chloroplast thylakoid inhibition ofphotosynthetic oxygen evolution by uncouplers at high ph and restoration ofelectron flow by an artificial electron donor for photosystem ii”, febsletters 42 (1974) 161-164

14、非专利文献4：g. c. marinescu, “β-nicotinamide mononucleotide (nmn)production in escherichia coli”, scientific reports 8(2018) 12278

15、非专利文献5：shinichiro shoji et al., “metabolic design for selectiveproduction of nicotinamide mononucleotide from glucose and nicotinamide”,metabolic engineering 65 (2021)167-177

16、非专利文献6：kazane sugiyama et al., “nicotinamide mononucleotideproduction by fructophilic lactic acid bacteria”, scientific reports 11(2021) 7662

17、非专利文献7：antje garten et al. “nampt: linking nad biology,metabolism and cancer”, trends in endocrinology & metabolism 20 (2009) 130-138

技术实现思路

1、专利技术所要解决的问题

2、如上所述，虽然已知多种通过在大肠杆菌等微生物中表达来自异种生物的nampt而由烟酰胺生产nmn的方法，但是其生产率不能说充分。为了更高效地生产nmn，需要探索活性高且能够高效地生产nmn的nampt。

3、本专利技术的目的在于，提供烟酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)活性提高的蛋白质和使用该蛋白质的烟酰胺单核苷酸的制造方法。

4、用于解决问题的方法

5、本专利技术人们为了提供新的具有nampt活性的蛋白质进行了深入研究，结果发现，来自bisgaardia hudsonensis和chitinophaga rupis的nampt与此前已知的来自杜克雷嗜血杆菌(haemophilus ducreyi)和奥奈达希瓦氏菌(shewanella oneidensis)的nampt相比，nmn生产活性高，从而完成了本专利技术。

6、本专利技术涉及以下的1～8。

7、1. 一种蛋白质，其为具有烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质。

8、[1]由序列号3或5所示的氨基酸序列构成的蛋白质

9、[2]由在序列号3或5所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入或添加1～20个氨基酸而成的氨基酸序列构成的突变蛋白

10、[3]由与序列号3或5所示的氨基酸序列具有90%以上的一致性的氨基酸序列构成的同源蛋白

11、2. 一种dna，其编码上述1所述的蛋白质。

12、3. 根据上述2所述的dna，其为下述[4]～[6]中任一项记载的dna。

13、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白质，其为具有烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的、下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质，

2.一种DNA，其编码权利要求1所述的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的DNA，其为下述[4]～[6]中任一项记载的DNA，

4.一种重组体DNA，其含有权利要求2或3所述的DNA。

5.一种转化体，其是用权利要求4所述的重组体DNA转化宿主细胞而得到的转化体。

6.根据权利要求5所述的转化体，其为与宿主细胞相比烟酰胺单核苷酸(NMN)的生产率得到了增强的转化体。

7.根据权利要求5所述的转化体，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌。

8.一种烟酰胺单核苷酸(NMN)的制造方法，其使用权利要求5所述的转化体生产NMN。

9.一种烟酰胺单核苷酸(NMN)的制造方法，其使用权利要求1所述的蛋白质生产NMN。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种蛋白质，其为具有烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的、下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质，

2.一种dna，其编码权利要求1所述的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的dna，其为下述[4]～[6]中任一项记载的dna，

4.一种重组体dna，其含有权利要求2或3所述的dna。

5.一种转化体，其是用权利要求4所述的重组体dna转化宿主细胞而得到的...

【专利技术属性】
技术研发人员：窟一将，氏原哲朗，安宅祐辅，
申请(专利权)人：协和发酵生化株式会社，
类型：发明
国别省市：

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