【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物，尤其涉及一种固定化的核酸错配识别蛋白及其固定方法和应用。
技术介绍
1、dna从头合成技术作为合成生物学的底层技术具有设计灵活、不受天然模板限制、可规模化生产等显著优势。然而，在人工合成及组装基因片段的过程中经常会引入错误的碱基，使得dna产物保真度较差，进而增大正确产物的获取难度及增加测序成本，合成效率受到严重影响。
2、错配识别蛋白(mismatch binding protein，muts)作为生物体dna修复系统中的启动子，能够识别结合错配碱基并引发后续的修复过程，在dna修复系统中起关键作用。合成生物学中，基于muts的dna纠错技术可有效降低序列合成错误率、降低人力、时间及经济成本。固定化的muts纠错具有高通量、易于自动化、成本低的优势。但是，目前已有的dna合成纠错技术存在成本较高、操作较为繁琐、纠错效果不稳定且纠错体系不完善等问题。因此，开发一种基于固定化muts的dna纠错方法具有重要意义。
技术实现思路
1、本公开提供了一种固定化的核酸错配识别蛋白及其固定方法和应用，以至少解决现有技术中存在的以上技术问题。
2、根据本公开的第一方面，提供了一种核酸错配识别蛋白的固定方法，包括以下步骤：
3、s1：将所述核酸错配识别蛋白(muts)与生物素混合，得生物素修饰的核酸错配识别蛋白；
4、s2：将所述生物素修饰的核酸错配识别蛋白与修饰有链霉亲和素的磁珠共孵育，得固定化的核酸错配识别蛋白。
5、
6、在一可实施方式中，所述核酸错配识别蛋白与所述修饰有链霉亲和素的磁珠的质量比为1：50～150。
7、在一优选的实施方式中，所述核酸错配识别蛋白与所述修饰有链霉亲和素的磁珠的质量比为1：150。
8、在一可实施方式中，步骤s2中，所述修饰有链霉亲和素的磁珠在与所述生物素修饰的核酸错配识别蛋白共孵育之前，还包括清洗步骤：将所述修饰有链霉亲和素的磁珠置于磁力架上分离1～1.5min，去除上清液；随后加入1×tbs重悬洗涤所述磁珠，置于磁力架上分离10～15s，重复清洗4次；最后取washing buffer重悬所述磁珠。
9、具体地，washing buffer包括pbs(ph为7.4)和0.05％的tween-20。
10、在一可实施方式中，步骤s2所述共孵育的条件为：温度25～28℃，转速300～350rpm，时间1～1.5h。
11、在一优选的实施方式中，步骤s2所述共孵育的条件为：温度25℃，转速300rpm，时间1h。
12、根据本公开的第二方面，提供了根据上述固定方法得到的固定化的核酸错配识别蛋白。
13、根据本公开的第三方面，提供了上述固定化的核酸错配识别蛋白在dna纠错中的应用。
14、根据本公开的第四方面，提供了一种dna纠错的方法，包括以下步骤：将上述固定化的核酸错配识别蛋白与待纠错的dna分子混合，使所述固定化的核酸错配识别蛋白识别并结合所述dna分子中的错配碱基，以启动dna错配修复。
15、在一可实施方式中，所述固定化的核酸错配识别蛋白与所述待纠错的dna分子的质量比为2～6：1。
16、根据本公开的第五方面，提供了一种用于dna纠错的产品，所述产品包括上述固定化的核酸错配识别蛋白。
17、根据本公开的一种可实施方式，至少具有以下有益效果：
18、本公开制备的固定化的核酸错配识别蛋白的稳定性高，可在温和条件下捕获异源双链dna，显著提高了对异源双链dna的纠错效率。
19、应当理解，本部分所描述的内容并非旨在标识本公开的实施例的关键或重要特征，也不用于限制本公开的范围。本公开的其它特征将通过以下的说明书而变得容易理解。
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1.一种核酸错配识别蛋白的固定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，步骤S1将所述核酸错配识别蛋白、所述生物素和生物素偶联液混合，反应2～2.5h后得所述生物素修饰的核酸错配识别蛋白。
3.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，所述核酸错配识别蛋白与所述修饰有链霉亲和素的磁珠的质量比为1：50～150。
4.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，步骤S2所述共孵育的条件为：温度25～28℃，转速300～350rpm，时间1～1.5h。
5.根据权利要求1～4任一项所述固定方法得到的固定化的核酸错配识别蛋白。
6.权利要求5所述固定化的核酸错配识别蛋白在DNA纠错中的应用。
7.一种DNA纠错的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求5所述固定化的核酸错配识别蛋白与待纠错的DNA分子混合，使所述固定化的核酸错配识别蛋白识别并结合所述DNA分子中的错配碱基，以启动DNA错配修复。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述固定化的核酸错配识别蛋白
9.一种用于DNA纠错的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求5所述固定化的核酸错配识别蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸错配识别蛋白的固定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，步骤s1将所述核酸错配识别蛋白、所述生物素和生物素偶联液混合，反应2～2.5h后得所述生物素修饰的核酸错配识别蛋白。
3.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，所述核酸错配识别蛋白与所述修饰有链霉亲和素的磁珠的质量比为1：50～150。
4.根据权利要求1所述的固定方法，其特征在于，步骤s2所述共孵育的条件为：温度25～28℃，转速300～350rpm，时间1～1.5h。
5.根据权利要求1～4任一项所述固定...
【专利技术属性】
技术研发人员：仰大勇，姚池，谭维，贾雪梅，李帅，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：
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