【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及小干扰rna(sirna)分子以及含有所述sirna分子的组合物，所述sirna分子靶向钠活化钾通道亚家族t成员1(kcnt1)基因的rna转录物(例如，mrna)。本公开进一步描述了通过将靶向kcnt1的sirna分子递送到有需要的受试者的中枢神经系统来治疗癫痫综合征的方法。
技术介绍
1、癫痫是一种由神经元兴奋性异常和神经元放电同步性异常引起的异质性病症。癫痫在机制和症状上有多种不同的形式。遗传性癫痫综合征可使儿童使丧失能力或甚至致死，而现有的一线抗惊厥药治疗，诸如唑尼沙胺(zonisamide)、苯妥英(phenytoin)、美西律(mexiletine)、拉莫三嗪(lamotrigine)和卡马西平(carbamazepine)，对最严重的综合征几乎没有功效。
2、癫痫的一个单基因驱动因素是钠活化钾通道亚家族t成员1(kcnt1)基因(也称为slack、kna1.1和slo2.2)，是编码电压门控钾离子(k+)通道家族成员的八十多个同源基因之一。完整的钾通道蛋白是四聚体，该四聚体可以是单聚的或是异聚的。kcnt1形成的通道由去极化电压和细胞内的钙或钠离子打开。kcnt1驱动的癫痫是多等位基因的，因为kcnt1中的许多不同个体突变都可驱动癫痫，没有单一变体会导致该疾病的大多数病例。
3、制备通过靶向kcnt1蛋白来降低kcnt1功能的治疗性抑制剂仍然存在挑战。首先，kcnt1变体的病理效应可能不仅仅通过单聚kcnt1通道发挥，还可能通过掺入其他k+通道基因(特别是kca家族的其他成员)编码
4、因此，仍然需要能够以对癫痫提供有效治疗的方式选择性地削弱在编码其他k+通道中的基因中的kcnt1活性的治疗剂。
技术实现思路
1、本公开提供了通过小干扰rna(sirna)介导的钠活化钾通道亚家族t成员1(kcnt1)转录物的沉默来降低钠活化钾通道亚家族t成员1(kcnt1)表达的组合物和方法。所述组合物和方法提供了对kcnt1表现出高于其他中枢神经系统(cns)基因(包括编码其他k+通道的基因)的选择性的益处。
2、本公开的sirna分子可用于沉默kcnt1基因，从而阻止相应mrna转录物的翻译并降低kcnt1表达。因此kcnt1水平的这种降低可防止疾病的发作或进展。本公开的sirna分子可以施用于被鉴定为具有功能获得性kcnt1突变的症状前个体。本公开的sirna分子可以通过例如鞘内注射、脑室内注射、纹状体内注射、实质内注射、小脑延髓池内注射(诸如通过导管插入)、静脉注射、皮下注射或肌肉注射直接递送至需要kcnt1沉默的受试者的cns。
3、在一个方面，本公开提供了含有反义链和与所述反义链具有互补性的有义链的sirna分子。反义链具有足够的互补性以与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内的区域杂交。在一些实施方案中，反义链具有足够的互补性以与具有seq id no:437-654中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内的区域杂交。反义链可以例如长度为10至50个核苷酸(例如，长度为10至45个核苷酸、长度为10至40个核苷酸、长度为10至35个核苷酸、长度为10至30个核苷酸、长度为10至29个核苷酸、长度为10至28个核苷酸、长度为10至27个核苷酸、长度为10至26个核苷酸、长度为10至25个核苷酸、长度为10至24个核苷酸、长度为10至23个核苷酸、长度为10至22个核苷酸、长度为10至21个核苷酸、或长度为10至20个核苷酸)。在一些实施方案中，反义链的长度为10个核苷酸、长度为11个核苷酸、长度为12个核苷酸、长度为13个核苷酸、长度为14个核苷酸、长度为15个核苷酸、长度为16个核苷酸、长度为17个核苷酸、长度为18个核苷酸、长度为19个核苷酸、长度为20个核苷酸、长度为21个核苷酸、长度为22个核苷酸、长度为23个核苷酸、长度为24个核苷酸、长度为25个核苷酸、长度为26个核苷酸、长度为27个核苷酸、长度为28个核苷酸、长度为29个核苷酸、长度为30个核苷酸或更长。
4、在任一前述方面的一些实施方案中，反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内15个连续核碱基的区域具有至少70％(例如，至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)互补性。在一些实施方案中，反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内16个连续核碱基的区域具有至少70％(例如，至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)互补性。在一些实施方案中，反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内17个连续核碱基的区域具有至少70％(例如，至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)互补性。在一些实施方案中，反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的kcnt1 mrna转录物内18个连续核碱基的区域具有至少70％(例如，至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种小干扰RNA(siRNA)分子，其包含反义链和与所述反义链具有互补性的有义链，其中所述反义链具有足够的互补性以与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的钠活化钾通道亚家族T成员1(KCNT1)mRNA转录物内的区域杂交。
2.如权利要求1所述的siRNA分子，其中所述反义链与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1mRNA转录物内具有19、20、21个或更多个连续核碱基的区域具有至少70％的互补性，任选地其中所述反义链与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 mRNA转录物具有至少70％的互补性。
3.如权利要求2所述的siRNA分子，其中所述反义链与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1mRNA转录物内的所述区域具有至少75％的互补性，任选地其中所述反义链与具有SEQ ID No:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 m
4.如权利要求1-3中任一项所述的siRNA分子，其中所述反义链包含至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少26个、至少27个、至少28个、至少29个或30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
5.如权利要求4所述的siRNA分子，其中所述反义链包含10至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
6.如权利要求5所述的siRNA分子，其中所述反义链包含12至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
7.如权利要求6所述的siRNA分子，其中所述反义链包含15至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
8.如权利要求7所述的siRNA分子，其中所述反义链包含18至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
9.如权利要求8所述的siRNA分子，其中所述反义链包含18至25个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID No:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
10.如权利要求1-9中任一项所述的siRNA分子，其中所述反义链包含18至21个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
11.如权利要求9所述的siRNA分子，其中所述反义链包含21个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
12.如权利要求1-11中任一项所述的siRNA分子，其中所述反义链相对于具有SEQ IDNO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域包含9个或更少的核苷酸错配，任选地其中所述反义链相对于具有SEQ ID NO:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述KCNT1 RNA转录物的所述区域包含8个或更少、7...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种小干扰rna(sirna)分子，其包含反义链和与所述反义链具有互补性的有义链，其中所述反义链具有足够的互补性以与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的钠活化钾通道亚家族t成员1(kcnt1)mrna转录物内的区域杂交。
2.如权利要求1所述的sirna分子，其中所述反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1mrna转录物内具有19、20、21个或更多个连续核碱基的区域具有至少70％的互补性，任选地其中所述反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 mrna转录物具有至少70％的互补性。
3.如权利要求2所述的sirna分子，其中所述反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1mrna转录物内的所述区域具有至少75％的互补性，任选地其中所述反义链与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 mrna转录物内的所述区域具有至少76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的互补性。
4.如权利要求1-3中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链包含至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少26个、至少27个、至少28个、至少29个或30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
5.如权利要求4所述的sirna分子，其中所述反义链包含10至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
6.如权利要求5所述的sirna分子，其中所述反义链包含12至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
7.如权利要求6所述的sirna分子，其中所述反义链包含15至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
8.如权利要求7所述的sirna分子，其中所述反义链包含18至30个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
9.如权利要求8所述的sirna分子，其中所述反义链包含18至25个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
10.如权利要求1-9中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链包含18至21个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
11.如权利要求9所述的sirna分子，其中所述反义链包含21个连续核苷酸，所述连续核苷酸与具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域内相等长度的连续多核苷酸区段完全互补。
12.如权利要求1-11中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链相对于具有seq idno:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域包含9个或更少的核苷酸错配，任选地其中所述反义链相对于具有seq id no:437-654和1035-1224中任一个的核酸序列的所述kcnt1 rna转录物的所述区域包含8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少或仅1个错配。
13.如权利要求1-12中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链具有与seq id no:1-218和655-844中任一个的核酸序列至少85％同一的核酸序列。
14.如权利要求13所述的sirna分子，其中所述反义链具有与seq id no:1-218和655-844中任一个的核酸序列至少90％同一的核酸序列。
15.如权利要求14所述的sirna分子，其中所述反义链具有与seq id no:1-218和655-844的核酸序列至少95％同一的核酸序列，任选地其中所述反义链具有与seq id no:1-218和655-844中任一个的核酸序列至少96％、97％、98％或99％同一的核酸序列。
16.如权利要求15所述的sirna分子，其中所述反义链具有seq id no:1-218和655-844中任一个的核酸序列。
17.如权利要求1-16中任一项所述的sirna分子，其中所述有义链具有与seq id no:219-436和845-1034中任一个的核酸序列至少85％同一的核酸序列。
18.如权利要求17所述的sirna分子，其中所述有义链具有与seq id no:219-436和845-1034中任一个的核酸序列至少90％同一的核酸序列。
19.如权利要求18所述的sirna分子，其中所述有义链具有与seq id no:219-436和845-1034的核酸序列至少95％同一的核酸序列，任选地其中所述有义链具有与seq id no:219-436和845-1034中任一个的核酸序列至少96％、97％、98％或99％同一的核酸序列。
20.如权利要求19所述的sirna分子，其中所述有义链具有seq id no:219-436和845-1034中任一个的核酸序列。
21.如权利要求1-20中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链包含式i表示的结构，其中式i按5'至3'方向是：
22.如权利要求21所述的sirna分子，其中所述反义链包含式a1表示的结构，其中式a1按5'至3'方向是：
23.如权利要求1-20中任一项所述的sirna分子，其中所述反义链包含式ii表示的结构，其中式ii按5'至3'方向是：
24.如权利要求23所述的sirna分子，其中所述反义链包含式a2表示的结构，其中式a2按5'至3'方向是：
25.如权利要求1-24中任一项所述的sirna分子，其中所述有义链包含式iii表示的结构，其中式iii按5'至3'方向是：
26.如权利要求25所述的sirna分子，其中所述有义链包含式s1表示的结构，其中式s1按5'至3'方向是：
27.如权利要求25所述的sirna分子，其中所述有义链包含式s2表示的结构，其中式s2按5'至3'方向是：
28.如权利要求25所述的sirna分子，其中所述有义链包含式s3表示的结构，其中式s3按5'至3'方向是：
29.如权利要求25所述的sirna分子，其中所述有义链包含式s4表示的结构，其中式s4按5'至3'方向是：
30.如权利要求1-20和25-29中任一项所述的s...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·I·麦克多诺，C·加伦特贝赫姆，B·安德昂，M·哈斯勒，D·库蒂斯，B·M·D·C·戈丁霍，
申请(专利权)人：阿塔兰塔治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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