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【技术实现步骤摘要】
本申请涉及pcr检测,尤其涉及一种pcr曲线的拟合方法、装置、存储介质及计算机设备。
技术介绍
1、在实时荧光定量pcr(聚合酶链式反应)技术中,ct值是指每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。起始模板量越多,ct值越小;起始模板量越少,ct值越大。
2、目前,在传统的实时荧光定量pcr技术中,ct值常采用阈值设置方法、辅助基线方法、最大二阶导数法等进行检测。传统的方法可用于常规的检测,但在荧光信号低或者低深度样本环境下,传统方法存在动力学不匹配或保真度较差等问题。另外,传统方法在曲线的显示修饰方面也存在不美观或过度修饰的问题。
技术实现思路
1、本申请的目的旨在至少能解决上述的技术缺陷之一,特别是现有技术中的pcr曲线拟合方法中ct值检测精度较低,且拟合曲线保真度较差、美观度不够的技术缺陷。
2、本申请提供了一种pcr曲线的拟合方法,所述方法包括:
3、获取原始pcr曲线,并确定所述原始pcr曲线的背景期;
4、在根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线有扩增现象时,对所述原始pcr曲线进行预处理,并计算预处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值;
5、基于所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期、线性增长区和平台期,并利用所述背景期、指数增长期、线性增长区以及平台期的数据点进行曲线拟合,以及计算拟合后的pcr曲线对应的第二ct值;
6、根据所述第一ct值和所述第二ct值之间的差
7、可选地,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线有无扩增现象,包括:
8、将所述背景期中每两个循环数下的荧光值进行作差,并根据作差结果确定所述背景期的最大荧光差值;
9、确定所述原始pcr曲线的最大荧光值;
10、根据所述背景期的最大荧光差值以及所述最大荧光值确定所述原始pcr曲线有无扩增现象。
11、可选地,所述对所述原始pcr曲线进行预处理,并计算预处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值,包括:
12、对所述原始pcr曲线进行插值滤波,并对滤波后的原始pcr曲线进行平滑处理;
13、计算平滑处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值。
14、可选地,所述计算平滑处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值,包括:
15、计算平滑处理后的原始pcr曲线的平台值;
16、基于所述平滑处理后的原始pcr曲线及对应的平台值,对所述平滑处理后的原始pcr曲线进行归一化处理,得到归一化曲线;
17、将所述归一化曲线与预设阈值线的交点处的循环数作为第一ct值。
18、可选地,所述基于所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期、线性增长区和平台期,包括:
19、根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期及对应的基线值;
20、对所述原始pcr曲线进行插值,并基于所述基线值确定插值后的原始pcr曲线对应的线性增长区;
21、根据所述线性增长区的循环区间确定所述原始pcr曲线的平台期。
22、可选地,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期及对应的基线值,包括:
23、确定所述背景期的最大荧光差值和最大荧光值;
24、根据所述背景期的最大荧光差值和最大荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期的起始点,以及,根据所述原始pcr曲线中每一循环数对应的荧光值确定所述指数增长期的终止点;
25、根据所述起始点和所述终止点,确定所述原始pcr曲线的指数增长期的循环区间,并将所述指数增长期的循环区间等分为两个子区间;
26、以所述背景期的最大荧光值为初始基线值,以所述背景期的最大荧光差值为初始步长,对所述初始基线值进行迭代计算,直到两个子区间的斜率差值不再减小或者达到最大迭代次数为止,得到最终的基线值。
27、可选地,所述基于所述基线值确定插值后的原始pcr曲线对应的线性增长区,包括:
28、使用所述基线值对插值后的原始pcr曲线进行校正,得到校正后的原始pcr曲线;
29、根据所述原始pcr曲线中每一循环数对应的荧光值确定校正后的原始pcr曲线的线性增长区的上限值;
30、确定所述线性增长区的pcr效率和迭代次数,并将所述pcr效率作为所述线性增长区的门限值;
31、以所述上限值为初始上限值,对所述校正后的原始pcr曲线中pcr效率不大于所述门限值的采样点对应的pcr效率方差进行迭代计算,直到达到所述迭代次数时为止,选取迭代过程中pcr效率方差最小的一组采样点对应的循环区间作为最终的线性增长区。
32、可选地,所述利用所述背景期、指数增长期、线性增长区以及平台期的数据点进行曲线拟合,包括:
33、根据所述背景期、指数增长期、线性增长区以及平台期的数据点确定所述原始pcr曲线的中心点值;
34、将所述背景期的最小荧光值作为所述原始pcr曲线的背景荧光强度值;
35、根据所述中心点值以及所述背景荧光强度值计算所述指数增长期的陡峭程度值、所述线性增长区的陡峭程度值以及所述平台期的最大荧光强度值;
36、将所述中心点值、所述背景荧光强度值、所述指数增长期的陡峭程度值、所述线性增长区的陡峭程度值以及所述平台期的最大荧光强度值输入至richard函数中,以对所述原始pcr曲线进行拟合。
37、可选地,所述根据所述第一ct值和所述第二ct值之间的差值,确定最终的拟合曲线,包括:
38、将所述第一ct值和所述第二ct值之间的差值与预设差值阈值进行比对;
39、若所述差值小于所述预设差值阈值,则直接将拟合后的pcr曲线作为最终的pcr曲线;
40、若所述差值不小于所述预设差值阈值,则重新对所述原始pcr曲线进行拟合,直到所述第一ct值与拟合后的pcr曲线对应的第二ct值之间的差值小于所述预设差值阈值时为止,得到最终的拟合曲线。
41、本申请还提供了一种pcr曲线的拟合装置,包括:
42、pcr曲线获取模块,用于获取原始pcr曲线,并确定所述原始pcr曲线的背景期;
43、第一ct值确定模块,用于在根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线有扩增现象时,对所述原始pcr曲线进行预处理,并计算预处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值;
44、第二ct值确定模块,用于基于所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期、线性增长区和平台期,并利用所述背景期、指数增长期、线性增长区以及平台期的数据点进行曲线拟合,以及计算拟合后的pcr曲线对应的第二ct值;
45、拟合曲线确定模块,用于根据所述第一ct值和所述第二ct值之间的差值,确定最终的拟合曲线本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始PCR曲线有无扩增现象,包括:
3.根据权利要求1所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述对所述原始PCR曲线进行预处理,并计算预处理后的原始PCR曲线对应的第一Ct值,包括:
4.根据权利要求3所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述计算平滑处理后的原始PCR曲线对应的第一Ct值,包括:
5.根据权利要求1-4中任一项所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述基于所述背景期的荧光值确定所述原始PCR曲线的指数增长期、线性增长区和平台期,包括:
6.根据权利要求5所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始PCR曲线的指数增长期及对应的基线值,包括:
7.根据权利要求5所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述基于所述基线值确定插值后的原始PCR曲线对应的线性增长区,包括:
8.根据权利要求1-4中任
9.根据权利要求1-4中任一项所述的PCR曲线的拟合方法,其特征在于,所述根据所述第一Ct值和所述第二Ct值之间的差值,确定最终的拟合曲线,包括:
10.一种PCR曲线的拟合装置,其特征在于,包括:
11.一种计算机可读存储介质,其特征在于:所述计算机可读存储介质中存储有计算机可读指令,所述计算机可读指令被一个或多个处理器执行时,使得一个或多个处理器执行如权利要求1至9中任一项所述PCR曲线的拟合方法的步骤。
12.一种计算机设备,其特征在于,包括:一个或多个处理器,以及存储器;
...【技术特征摘要】
1.一种pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线有无扩增现象,包括:
3.根据权利要求1所述的pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述对所述原始pcr曲线进行预处理,并计算预处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值,包括:
4.根据权利要求3所述的pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述计算平滑处理后的原始pcr曲线对应的第一ct值,包括:
5.根据权利要求1-4中任一项所述的pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述基于所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期、线性增长区和平台期,包括:
6.根据权利要求5所述的pcr曲线的拟合方法,其特征在于,所述根据所述背景期的荧光值确定所述原始pcr曲线的指数增长期及对应的基线值,包括:
【专利技术属性】
技术研发人员:蔡树衡,张伟,廖辉,郑镇钦,王栋斌,
申请(专利权)人:广东凯普科技智造有限公司,
类型:发明
国别省市:
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