【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂及其应用，属于微生物检测。
技术介绍
1、支气管败血性波氏杆菌(bordetella bronchiseptica，b.b)是家猫的主要病原体之一，在高养殖密度条件下，如救援收容所和多猫家庭，发病率更高。也有过偶发的人畜共患病例。波氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，定植于哺乳动物的呼吸道，可在受感染猫的口腔和鼻腔分泌物中传播并在宿主呼吸道的纤毛上皮上定植，可能导致慢性感染。患有呼吸道疾病的狗对猫来说也是一种感染风险。b.b从感染的猫的口腔和鼻腔分泌物中脱落，故直接或间接接触可能导致其传播。与猫杯状病毒(fcv)和猫疱疹病毒(fhv)一样，过度拥挤和管理不善容易导致感染和患病。在一项研究中，对多猫(＞5只猫)家庭与呼吸道疾病相关的病原体进行了流行性病学调查，pcr检测结果表明有症状的猫中b.b有5％阳性率，而无症状的猫中有1.3％阳性率。一般认为，养殖群体越大，阳性率有可能越高。另外，某些救援避难所的卫生条件较差，也可能导致较高的血清阳性率。
2、b.b引起的临床症状包括发烧、咳嗽、打喷嚏、眼部分泌物和淋巴结病，轻症一般在10天后消失。从上述轻度感染到伴有呼吸困难、发绀和死亡的严重肺炎。肺炎通常见于10周以下的小猫，但年长的猫也会受到影响。咳嗽猫(急性和慢性)应考虑支气管败血性波氏杆菌感染。针对b.b感染，即使只有轻微的症状，也有必要进行抗菌治疗。因为其可能发展到下呼吸道定植。而严重感染的猫则需要支持性治疗，以解决脱水和电解质、酸碱紊乱，病症最为严重的猫还可能需要重
3、目前，针对支气管败血性波氏杆菌的检测方法主要有病毒分离培养、血清学诊断方法，分子生物学检测方法等。其中，由于鼻腔中还存在其他的常见菌，可能会干扰b.b的分离，导致检出概率大大降低。另外，病毒分离培养和血清学诊断的方法在临床上适用性不高，是更适用于实验室检验的两种方法。免疫层析法可快速检测b.b，但由于其灵敏度不够，该法只能用于猫发病后机体排毒期间。
4、分子生物学诊断方法中最常见的是是聚合酶链式反应技术(pcr)，pcr是目前大多数病原体检测的金标准，但是其扩增必须的pcr仪较昂贵，反应时间较长，一般需要1-2个小时或更长，故pcr技术在兽医基层实验室推广应用较难。而对于企业来说，仪器维护及回收成本偏高。因此，根据兽医基层检验室的需求，急需开发了一种灵敏度特异性好，操作方便且能够迅速获取检测结果的支气管败血性波氏杆菌检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂及其应用，可以有效解决上述问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂，包括引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探针p-1，所述引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的碱基序列分别如seq id no:2-7所示，所述探针p-1的碱基序列分别如seq id no:8所示；还包括缓冲液体系、dntps、酶体系。
4、在一些实施例中，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的终浓度分别为0.2μm、0.2μm、1.6μm、1.6μm、0.8μm、0.8μm、0.2μm。
5、在一些实施例中，所述lamp引物探针组检测的靶基因为flaa基因的1140-1465bp段，其碱基序列分别如seq id no:1所示。
6、在一些实施例中，所述缓冲液体系包括mgso4、kcl、tris-hcl。
7、在一些实施例中，所述缓冲液体系的ph为7.5～8.5。
8、在一些实施例中，所述缓冲液体系中mgso4的终浓度为1mm～20mm。
9、在一些实施例中，所述缓冲液体系中kcl的终浓度为10mm～200mm。
10、在一些实施例中，所述dntps的终浓度为0.1mm～10mm。
11、在一些实施例中，所述酶体系包括内切酶和聚合酶。
12、一种上述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂在制备检测支气管败血性波氏杆菌的lamp试剂盒中的应用。
13、本专利技术的有益效果是：
14、本专利技术的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂，可以用于检测支气管败血性波氏杆菌，检测灵敏度高，特异性强。
15、本专利技术lamp探针法试剂应用lamp探针法，相较于传统的lamp染料法和比色法具有以下优势：更有效的减少了非特异性扩增的干扰；可以通过对不同病原体的特异探针标记不同的荧光基团，实现单管多重的检测。
16、本专利技术lamp探针相较于普通探针序列更短，荧光基团淬灭更加完全，从而降低荧光背景，提高信噪比，同时，探针序列短也使得pcr过程中更容易被完全水解，pcr效率高，荧光信号释放充分。
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1.一种检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，包括引物组F3-1、B3-1、FIP-1、BIP-1、LF-1、LB-1及探针P-1，所述引物组F3-1、B3-1、FIP-1、BIP-1、LF-1、LB-1的碱基序列分别如SEQ ID NO:2-7所示，所述探针P-1的碱基序列分别如SEQ ID NO:8所示；还包括缓冲液体系、dNTPs、酶体系。
2.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述F3-1、B3-1、FIP-1、BIP-1、LF-1、LB-1及P-1的终浓度分别为0.2μM、0.2μM、1.6μM、1.6μM、0.8μM、0.8μM、0.2μM。
3.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述LAMP引物探针组检测的靶基因为flaA基因的1140-1465bp段，其碱基序列分别如SEQID NO:1所示。
4.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述缓冲液体系包括MgSO4、KCl、Tris-
5.根据权利要求4所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述缓冲液体系的pH为7.5～8.5。
6.根据权利要求4所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述缓冲液体系中MgSO4的终浓度为1mM～20mM。
7.根据权利要求4所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述缓冲液体系中KCl的终浓度为10mM～200mM。
8.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述dNTPs的终浓度为0.1mM～10mM。
9.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂，其特征在于，所述酶体系包括内切酶和聚合酶。
10.一种权利要求1至9任一项所述的检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP探针法试剂在制备检测支气管败血性波氏杆菌的LAMP试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂，其特征在于，包括引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及探针p-1，所述引物组f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1的碱基序列分别如seq id no:2-7所示，所述探针p-1的碱基序列分别如seq id no:8所示；还包括缓冲液体系、dntps、酶体系。
2.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂，其特征在于，所述f3-1、b3-1、fip-1、bip-1、lf-1、lb-1及p-1的终浓度分别为0.2μm、0.2μm、1.6μm、1.6μm、0.8μm、0.8μm、0.2μm。
3.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法试剂，其特征在于，所述lamp引物探针组检测的靶基因为flaa基因的1140-1465bp段，其碱基序列分别如seqid no:1所示。
4.根据权利要求1所述的检测支气管败血性波氏杆菌的lamp探针法...
【专利技术属性】
技术研发人员：段雪昆，王露，何燕华，江贤华，
申请(专利权)人：厦门宝太生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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