【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物模型的构建及验证，更具体地，涉及一种老年脾肾阳虚证泄泻动物模型的构建方法。
技术介绍
1、泄泻是指以排便次数增多，粪质溏薄或完谷不化，甚至泻出如水样为主症的病证。
2、现代医学中慢性肠炎、腹泻型肠易激综合征、功能性腹泻、炎症性肠病等均有此表现。泄泻中医诊疗专家共识意见(2017)将泄泻进行辨证分型，包括寒湿困脾、肠道湿热、食滞肠胃、脾肾阳虚及肝气乘脾证。其中，脾肾阳虚证为主要证型，而脾肾阳虚证泄泻多表现为五更泄泻，常见于中老年人，由于其发病率高，久泻，病情反复发作，较难治愈，给患者工作生活造成很大的负担。因此，老年脾肾阳虚证泄泻值得临床及科研工作者的深入研究。
3、构建与临床病证相符的病理模型是探讨疾病发病机制、揭示药物药效和研发新药的关键所在。目前关于老年性脾肾阳虚证泄泻动物模型的研究几乎空白，现有针对老年性脾肾阳虚证泄泻动物模型的研究建立在老年鼠的基础之上采用注射氢化可的松或灌胃腺嘌呤致肾阳虚；番泻叶泻下、饮食失节、劳倦过度等方法致脾阳虚，但采用老年鼠存在价格昂贵的弊端。
4、建立科学可靠的老年性脾肾阳虚证泄泻动物模型是进行其机理研究的基础。为进一步深入探究老年性脾肾阳虚证泄泻的本质、研发其有效治疗药物，很有必要进行老年性脾肾阳虚证泄泻动物模型的研究。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，本专利技术在d-半乳糖诱导衰老模型的基础上，复合脾肾阳虚证泄泻因素，构建了一种老年脾肾阳虚证
2、为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种老年脾肾阳虚证泄泻动物模型的构建方法，包括如下步骤：
3、(1)自建模开始每日使用d-半乳糖诱导大鼠，连续作用8-9周，此时，通过morris水迷宫可验证大鼠出现衰老症状；
4、(2)然后开始对大鼠灌胃腺嘌呤混悬液，连续作用3-4周，同时，对大鼠单双日交换进食精制猪油和甘蓝菜，连续作用3-4周，此时大鼠出现肾虚症状；
5、(3)从第11～13周对大鼠灌胃给予番泻叶水煎液连续两周，得到老年脾肾阳虚证泄泻动物模型。优选地，可以使用冰番泻叶水煎液进行灌胃，冰番泻叶目的是以伤脾阳，致脾阳虚泻下；制备水煎液后放在4-6℃冰箱，直接取出用。
6、具体地，所述大鼠为sd大鼠。
7、其中，步骤(1)中，使用d-半乳糖注射液进行诱导，d-半乳糖注射液质量浓度为40mg/ml，每日以d-半乳糖含量计按照400mg/kg的剂量通过皮下注射将d-半乳糖作用于大鼠。
8、优选地，所述腺嘌呤混悬液通过如下方法制备得到：将腺嘌呤溶解在0.5％羧甲基纤维素钠溶液中得到。由于腺嘌呤难溶于水，所以使用0.5％羧甲基纤维素钠溶液制备混悬液便于溶解，也可以使用无菌水替代。
9、步骤(2)中，腺嘌呤混悬液质量浓度为0.25-0.5mg/ml，按照腺嘌呤的量计使用剂量为25-50mg/kg/d。
10、优选地，精制猪油的剂量为1-2ml/只/天。
11、优选地，甘蓝菜的剂量为5-10g/只/天。
12、所述番泻叶水煎液通过如下方法制备得到：将番泻叶置于8～10倍番泻叶质量的蒸馏水中浸泡30～40min，煎煮8-10min，共2次，合并药液，浓缩得到番泻叶水煎液。
13、优选地，浓缩至含生药0.25g/ml-1g/ml的番泻叶水煎液，番泻叶水煎液按照生药量计给药剂量为2.5g-10g/kg/d。
14、本专利技术进一步提出了通过上述构建方法构建得到的老年脾肾阳虚证泄泻动物模型在研究老年脾肾阳虚证泄泻机理上的应用。
15、本专利技术还提出了通过上述构建方法构建得到的老年脾肾阳虚证泄泻动物模型在筛选靶向治疗老年脾肾阳虚证泄泻的药物中的应用。
16、有益效果：本专利技术的构建方法中，向动物皮下注射d-半乳糖可诱导衰老，灌胃腺嘌呤混悬液诱导肾阳虚，单双日交换进食精制猪油和甘蓝菜致饮食失节达到伤脾气，灌胃番泻叶水煎液导致脾阳虚泄泻，多因素复合获得老年性脾肾阳虚型泄泻动物模型，所构建的动物成功诱导出记忆衰退，反应迟钝、活动明显减少、毛发逐渐枯萎，大便稀软，便溏饮食量减少、体重逐渐下降，肛温、体温降低、粪便指数增加，粪便含水量升高，皮质酮、促肾上皮质素和丙二醛含量升高，d-木糖含量降低等生理生化指标的改变。通过本专利技术的方法可有效制备符合老年性脾肾阳虚证泄泻症状的动物模型。
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1.一种老年脾肾阳虚证泄泻动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述大鼠为SD大鼠。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中，使用D-半乳糖注射液进行诱导，D-半乳糖注射液质量浓度为30-40 mg/mL，每日以D-半乳糖含量计按照300-400 mg/kg的剂量通过皮下注射将D-半乳糖作用于大鼠。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述腺嘌呤混悬液通过如下方法制备得到：将腺嘌呤溶解在0.5%羧甲基纤维素钠溶液中得到；腺嘌呤混悬液质量浓度为0.25-0.5 mg/mL，按照腺嘌呤的量计使用剂量为25-50 mg/kg/d。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，精制猪油的剂量为1-2 mL/只/天。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，甘蓝菜的剂量为5-10 g/只/天。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述番泻叶水煎液通过如下方法制备得到：将番泻叶置于8~10倍番泻叶质量的蒸馏水中浸泡30
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，浓缩至含生药0.25 g/mL-1 g/mL的番泻叶水煎液，番泻叶水煎液按照生药量计给药剂量为2.5 g-10 g/kg/d。
9.权利要求1-8任一项所述的构建方法构建得到的老年脾肾阳虚证泄泻动物模型在研究老年脾肾阳虚证泄泻机理上的应用。
10.权利要求1-8任一项所述的构建方法构建得到的老年脾肾阳虚证泄泻动物模型在筛选靶向治疗老年脾肾阳虚证泄泻的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种老年脾肾阳虚证泄泻动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述大鼠为sd大鼠。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中，使用d-半乳糖注射液进行诱导，d-半乳糖注射液质量浓度为30-40 mg/ml，每日以d-半乳糖含量计按照300-400 mg/kg的剂量通过皮下注射将d-半乳糖作用于大鼠。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述腺嘌呤混悬液通过如下方法制备得到：将腺嘌呤溶解在0.5%羧甲基纤维素钠溶液中得到；腺嘌呤混悬液质量浓度为0.25-0.5 mg/ml，按照腺嘌呤的量计使用剂量为25-50 mg/kg/d。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，精制猪油的剂量为1-2 ml/只/天。
【专利技术属性】
技术研发人员：于舒婷，叶桂芳，秦雪梅，胡英还，史静超，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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