菊芋中二咖啡酰奎尼酸组分的分离提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种菊芋中二咖啡酰奎尼酸组分的提取纯化方法，属于有效成分开发利用领域。菊芋中该类化合物提取分离的主要工艺步骤为：将干燥菊芋药材粉碎后，以１０～２０倍量５０～８０％乙醇超声或回流提取，石油醚脱脂后，以乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩至浸膏状。所得浸膏通过树脂或者硅胶柱层析初步纯化，再以ＳｅｐｈｄｅｘＬＨ２０进一步纯化，即可得含量８５％以上的二咖啡酰奎尼酸组分。本发明专利技术采用多种柱色谱分离纯化菊芋中二咖啡酰奎尼酸类化合物，工艺简单，易操作，制成品中二咖啡酰奎尼酸类含量高且原药材来源丰富，所用树脂及ＳｅｐｈｄｅｘＬＨ２０可回收利用，易于工业化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及二咖啡酰奎尼酸，具体地说是。
技术介绍
二咖啡酰奎尼酸(Dicaffeoylquinic acid)，为奎尼酸与二分子咖啡酸通过酯化反应縮合而成的酚酸类天然化合物，根据取代位置不同，主要可分为1，3_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸，1，4_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸，1，5_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸，3，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸，3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸，4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸6种。二咖啡酰奎尼酸作为一种药理活性成分，作用范围广泛，具有抗氧化、抗炎、抗肝损伤、抗微生物、抗诱变、提高免疫力等作用，在病毒感染、心血管疾病等方面有一定疗效。近年来研究表明，二咖啡酰奎尼酸对乙肝病毒、爱滋病毒(CN1087608 ;EP1008344 ;US6331565)、冠状病毒感染(CN1449751)有特殊的治疗作用，是我国首个既抗艾滋病毒又抗乙肝病毒的新药。二咖啡酰奎尼酸类化合物在多数植物中含量较低且未有成熟的提取纯化方法，目前主要依靠化学方法合成制得，化学方法合成化合物药用时存在较强的毒副作用，因此寻找二咖啡酰奎尼酸类化合物含量丰富的植物原材料并建立从天然植物中提取纯化该类化合物的方法有重大的现实意义。 菊芋(Helianthus tuberosus Li皿)俗称洋姜，鬼子姜，为菊科(Compositae)向日葵属(Helianthus L.)多年生草本植物，具有耐旱、耐寒、耐盐碱等特点，在我国西北、东北等荒漠地区及沿海滩涂广泛种植。菊芋药材中含有丰富的咖啡酰奎尼酸类化合物，其中二咖啡酰奎尼酸类化合物含量较高，从菊芋中提取分离二咖啡酰奎尼酸具有较高的经济价值。
技术实现思路
本专利技术提供一种从菊芋中提取二咖啡酰奎尼酸类化合物的方法，以满足化合物标准品制备，药理活性进一步研究及工业应用的需求；专利技术首先优化了菊芋药材中二咖啡酰奎尼酸类化合物的提取方法，通过树脂及硅胶柱层析法分离纯化及S印hdexLH20脱色，得到纯度较高的二咖啡酰奎尼酸类化合物。 为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为 ，以菊芋为原料，依次经醇水提取、乙酸乙酯萃取富集、柱色谱纯化及S印hdexLH20脱色，提取分离得到二咖啡酰奎尼酸组分，经HPLC检测组分含量达85%以上；提取二咖啡酰奎尼酸类化合物结构式如下，4OR2 QCOOHOHC-ORicaffeoyl= ^_^ _^OR3OR4 其中，R R2， R3， R4可以相同也可以不同，分别为H或咖啡酰基caffeoyl ;当R2， R4为H时，R R3为咖啡酰基;当R3， R4为H时，&， R2为咖啡酰基;当R2， R4为H时，R R3为咖啡酰基;当&， R4为H时，R2， R3为咖啡酰基;当Rn R3为H时，R2， R4为咖啡酰基；当R R2为H时，R3，I^为咖啡酰基。 具体操作过程为 (1)菊芋中二咖啡酰奎尼酸类化合物的提取 A.将干燥的菊芋花、叶和/或茎秆粉碎得菊芋原料； B.按菊芋原料与乙醇水溶液为lg : 10 20ml的比例混合浸泡，乙醇水溶液的体积浓度为50 80%，超声提取0. 5-1小时或回流提取1-2小时，过滤； C.重复B的提取过程2 3次，合并滤液，减压浓縮除去乙醇，得到菊芋粗提液； (2)萃取富集菊芋叶中二咖啡酰奎尼酸类化合物将步骤(1)得到的菊芋粗提液以石油醚脱脂萃取3 4次后，再以乙酸乙酯萃取3 4次，菊芋提取物中的二咖啡酰奎尼酸类化合物主要富集于乙酸乙酯萃取部位，将乙酸乙酯萃取部位减压浓縮至浸膏状； (3)树脂或硅胶柱分离二咖啡酰奎尼酸类化合物将步骤(2)所得浸膏，以体积浓度20-30%乙醇溶解后，过滤，以大孔吸附树脂为填料装柱分离，依次以5 10倍柱体积的体积浓度20-30% 、60-70%乙醇溶液进行洗脱，收集60-70%部位的流份，浓縮至浸膏状，高效液相色谱检测二咖啡酰奎尼酸含量达70%以上； 或将步骤(2)所得浸膏以体积浓度20-30%乙醇溶解后，过滤，以聚酰胺为填料装柱进行分离，依次以5 10倍柱体积的体积浓度30-40%、70-80%的乙醇洗脱，收集70-80%部位的流份，浓縮至浸膏状，高效液相检测二咖啡酰奎尼酸类化合物含量达55%以上； 或将步骤(2)所得浸膏以乙醇溶解后，加入与浸膏相同质量的硅胶减压浓縮至干得样品，干法上样，以硅胶为填料装柱进行分离，样品与硅胶填料的质量比为1 : 10 1 : 20，依次以不同比例5 10倍柱体积石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，不同比例的石油醚与乙酸乙酯混合溶液中石油醚的体积含量分别为80-100% 、70-50% 、30-20% ， 0% ;收集纯乙酸乙酯洗脱部位；该部位减压浓縮至浸膏状，高效液相色谱检测二咖啡酰奎尼酸类化合物含量达65% ; (4) S印hdexLH20纯化样品将步骤(3)中所获得的二咖啡酰奎尼酸组分浸膏分别以体积浓度30-40%乙醇溶解后，以S印hdexLH20进一步纯化，依次以5 10倍柱体积的体积浓度30-40% 、80-95%的乙醇进行洗脱，收集80-95%乙醇洗脱部位，减压浓縮除去乙醇后，冷冻干燥得淡黄色干粉，高效液相检测二咖啡酰奎尼酸类化合物含量可达85%以上，整个工艺流程见图1。萃取操作时，菊芋粗提液与石油醚的体积比为1 : l-2，菊芋粗提液与乙酸乙酯的5体积比为l : 1-2 ;所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂；所用的聚酰胺树脂为30-60目或60-100目聚酰胺树脂。 本专利技术具有以下优点 1菊芋中二咖啡酰奎尼酸类化合物含量丰富，且组分易于富集，产率高，且容易分 离操作，工艺简单，生产成本低。 2通过多种柱色谱均能达到对二咖啡酰奎尼酸类化合物的初步纯化，S印hdexLH20脱色后，可得纯度达85%以上的二咖啡酰奎尼酸组分，产品纯度高，品质好。 3使用的大孔吸附树脂、聚酰胺树脂及s印hedexLH20均可反复再生使用，适于工业应用。附图说明 图1为本专利技术的工艺流程图。 具体实施例方式现结合实例，对本专利技术做进一步说明。实例仅限于说明本专利技术，而非对本专利技术的限定。 实施例1 菊芋叶烘干后粉碎，称取40g，以600ml量体积浓度70 %的乙醇浸泡12h，超声 45min后，过滤，滤液保存备用；滤渣再加入520ml量体积浓度70%的乙醇浸泡约6h，超声 45min，过滤；合并滤液，滤渣弃去。将滤液减压浓縮除去乙醇，得粗提液，以与粗提液同体 积的石油醚萃取，共萃取4次，除去脂溶性成分后，以与粗提液同体积的乙酸乙酯萃取，共 萃取4次，乙酸乙酯萃取液减压浓縮得浸膏，将浸膏以体积浓度20%乙醇溶解后，以聚酰胺 (30-60目)装柱进行色谱分离，依次以IO倍柱体积的体积浓度30%、80%的乙醇洗脱，收 集体积浓度80%乙醇洗脱部位，浓縮得浸膏，高效液相色谱检测二咖啡酰奎尼酸类化合物 含量达55% 。得到的浸膏再以体积浓度40%乙醇溶解，滤过，以S印hdexLH20进一步分离 纯化，分别以10倍柱体积的体积浓度40%、95%的乙醇进行洗脱，收集体积浓度95%乙醇 洗脱部位，减压浓縮除去乙醇后，冷冻干燥得淡黄色干粉，粉末质量为O. 07923g，高效液相 色谱检测二咖啡酰奎尼酸类化合物含量可达93% 。 实施例2 菊芋叶烘干后粉碎，称取40本文档来自技高网...

【技术保护点】
菊芋中二咖啡酰奎尼酸组分的分离提纯方法，其特征在于：以菊芋为原料，依次经醇水提取、乙酸乙酯萃取富集、柱色谱纯化及ＳｅｐｈｄｅｘＬＨ２０脱色，提取分离得到二咖啡酰奎尼酸组分，经ＨＰＬＣ检测组分含量达８５％以上；提取二咖啡酰奎尼酸类化合物结构式如下，　　＊＊＊　　其中，Ｒ↓［１］，Ｒ↓［２］，Ｒ↓［３］，Ｒ↓［４］可以相同也可以不同，分别为Ｈ或咖啡酰基ｃａｆｆｅｏｙｌ；当Ｒ↓［２］，Ｒ↓［４］为Ｈ时，Ｒ↓［１］，Ｒ↓［３］为咖啡酰基；当Ｒ↓［３］，Ｒ↓［４］为Ｈ时，Ｒ↓［１］，Ｒ↓［２］为咖啡酰基；当Ｒ↓［２］，Ｒ↓［４］为Ｈ时，Ｒ↓［１］，Ｒ↓［３］为咖啡酰基；当Ｒ↓［１］，Ｒ↓［４］为Ｈ时，Ｒ↓［２］，Ｒ↓［３］为咖啡酰基；当Ｒ↓［１］，Ｒ↓［３］为Ｈ时，Ｒ↓［２］，Ｒ↓［４］为咖啡酰基；当Ｒ↓［１］，Ｒ↓［２］为Ｈ时，Ｒ↓［３］，Ｒ↓［４］为咖啡酰基。

【技术特征摘要】
菊芋中二咖啡酰奎尼酸组分的分离提纯方法，其特征在于以菊芋为原料，依次经醇水提取、乙酸乙酯萃取富集、柱色谱纯化及SephdexLH20脱色，提取分离得到二咖啡酰奎尼酸组分，经HPLC检测组分含量达85％以上；提取二咖啡酰奎尼酸类化合物结构式如下，其中，R1，R2，R3，R4可以相同也可以不同，分别为H或咖啡酰基caffeoyl；当R2，R4为H时，R1，R3为咖啡酰基；当R3，R4为H时，R1，R2为咖啡酰基；当R2，R4为H时，R1，R3为咖啡酰基；当R1，R4为H时，R2，R3为咖啡酰基；当R1，R3为H时，R2，R4为咖啡酰基；当R1，R2为H时，R3，R4为咖啡酰基。F2008102298908C0000011.tif2. 根据权利要求1所述的分离提纯方法，其特征在于具体操作过程为，(1) 菊芋中二咖啡酰奎尼酸类化合物的提取A. 将干燥的菊芋花、叶或茎秆粉碎得菊芋原料；B. 按菊芋原料与乙醇水溶液为lg : 10 20ml的比例混合浸泡，乙醇水溶液的体积浓 度为50 80%，超声提取0. 5-1小时或回流提取1-2小时，过滤；C. 重复B的提取过程2 3次，合并滤液，减压浓縮除去乙醇，得到菊芋粗提液；(2) 萃取富集菊芋叶中二咖啡酰奎尼酸类化合物将步骤(1)得到的菊芋粗提液以石油醚脱脂萃取3 4次后，再以乙酸乙酯萃取3 4次，菊芋提取物中的二咖啡酰奎尼酸类 化合物主要富集于乙酸乙酯萃取部位，将乙酸乙酯萃取部位减压浓縮至浸膏状；(3) 树脂或硅胶柱分离二咖啡酰奎尼酸类化合物将步骤(2)所得浸膏，以体积浓度 20-30%乙醇溶解后，过滤，以大孔吸附树脂为填料装柱分离，依次以5 10倍柱体积的体 积浓度20-30 % 、60-70%乙醇溶液进行洗脱，收集60-70%...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖红斌，袁晓艳，高明哲，杜昱光，程受衍，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]