【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗研究，尤其涉及一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法及应用。
技术介绍
1、多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，pcos)是育龄期妇女常见的一种内分泌代谢性疾病。在世界范围内，其发病率约为8％～13％。pcos的临床症状主要表现为高雄激素血症、排卵功能障碍、胰岛素抵抗、血脂异常、慢性炎症、肥胖等，其病理生理学基础主要与激素失衡、慢性低度炎症、胰岛素抵抗和高雄激素水平有关。有研究也提示，pcos患者卵泡液和血清中氧化应激水平过高是导致pcos的潜在原因之一。
2、二甲双胍(metformin，met)是一种胰岛素增敏剂，主要通过抑制过多的雄激素分泌改善月经、高雄激素血症以及脂代谢异常等症状，被广泛应用于pcos的临床治疗。然而，二甲双胍可能引起恶心、呕吐、腹泻、胸闷、头痛、低血糖等副作用，长期服用甚至可能导致乳酸中毒。因此，寻找一种高效、低副作用的天然产物来改善pcos的症状具有十分重要的意义。
3、南山楂，又称“野山楂”，为蔷薇科植物野山楂(crataegus cuneata sieb.&zucc.)的干燥成熟果实，是广西民间广泛使用的药食同源类壮药材。北山楂果大，味酸甜；而南山楂果小，味酸涩。现代研究结果提示南山楂富含黄酮类化合物，且较北山楂含量高，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗病毒以及免疫调节等活性。南山楂因其具有较强的抗心肌缺血及降血脂功效，故被认为是防治心血管疾病的天然药材。此外，南山楂还有改善心脑血管、糖尿病及其并发症、促进肝细
4、为此本专利技术提出一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，旨在探索南山楂总黄酮(total flavonoids from crataegus cuneata，tfcc)对pcos大鼠性激素、脂代谢及氧化应激水平的改善作用，以期为pcos的防治提供一定的理论依据。
技术实现思路
1、基于上述技术问题，本专利技术提供一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法及应用。
2、本专利技术提供的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，所述方法包括步骤：
3、s1、从南山楂果实中提取总黄酮(tfcc)；
4、s2、利用雌性sd大鼠建立pcos动物模型并分组，模拟pcos患者的生理状态，分别灌喂总黄酮(tfcc)、二甲双胍(met)和生理盐水进行对照；
5、s3、测定各组动物的体重、体长、动情周期、脂肪组织质量，进行卵巢病理学观察和血清生化指标的检测，并检测卵巢组织中纤维化因子的表达；
6、s4、通过统计学分析，评估tfcc对pcos动物模型症状的改善效果。
7、优选的，所述步骤s1中，从南山楂果实中提取总黄酮(tfcc)的工艺为：
8、a1、将南山楂果实置于70℃烘箱中烘干后粉碎，过60目网筛，保存备用；
9、a2、取适量粉末，用50％乙醇按料液比1：25，提取温度60℃、超声功率250w、超声时间40min，超声提取，减压抽滤，除渣后取滤液；
10、a3、滤液经旋转蒸发仪在50℃真空减压蒸发后，冷冻干燥成tfcc，-20℃储藏备用；
11、a4、以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线为：y＝7.056x+0.0015，r2＝0.9998，并计算得到tfcc含量为73.2±4.88mg/g。
12、优选的，所述步骤s2的具体操作为：
13、选取spf级雌性sd大鼠40只，随机分为control组、pcos组、met组、tfcc-l组和tfcc-h组，每组8只，适应性饲养1周后，control组每日灌胃生理盐水，pcos组每日灌胃来曲唑-cmc混悬液(以1wt％cmc配置，来曲唑1mg/kg)，met组每日分别灌胃来曲唑-cmc混悬液(以1wt％cmc配置，来曲唑1mg/kg)和met(265mg/kg)，tfcc-l组每日分别灌胃来曲唑-cmc混悬液(以1wt％cmc配置，来曲唑1mg/kg)和tfcc(140mg/kg)，tfcc-h组每日分别灌胃来曲唑-cmc混悬液(以1wt％cmc配置，来曲唑1mg/kg)和tfcc(280mg/kg)，连续28天；
14、tfcc给药剂量通过下述公式(1)折算得出：
15、
16、优选的，所述步骤s3具体操作为：
17、b1、测定大鼠动情周期：实验结束前最后10天每天对所有大鼠进行阴道涂片检查，观察其发情周期，用生理盐水浸润的无菌棉签插入大鼠阴道壁内，顺时针旋转1周后取出，沿同一方向将细胞涂抹于载玻片上，晾至半干，95％乙醇固定15min，通过巴氏染色判断动情周期；
18、b2、测定大鼠体长、脂肪组织质量和进行和卵巢病理学观察：
19、末次给药后，禁水禁食12h，2％三溴乙醇(10ml/kg)麻醉大鼠，量取体长，计算lee’s指数(公式2)；
20、腹主动脉取血，静置30min，于4℃、1000×g条件下离心10min，收集血清；
21、分离左右侧卵巢和内脏脂肪，计算内脏脂肪相对质量(公式3)；
22、使用10％福尔马林溶液固定一侧卵巢和子宫周脂肪，石蜡包埋，切片后进行h&e和masson染色，显微镜下观察卵巢、脂肪组织病理学变化，并使用imagej软件分析纤维化和脂肪细胞面积；
23、
24、b3、检测血清生化指标：按照相应elisa试剂盒说明书检测血清中t、e2、amh、lh、fsh水平，并计算lh/fsh比值；使用微板法检测血清中tg、tc、ldl-c、hdl-c、mda、sod、gsh-px及cat水平；
25、b4、western blot法检测卵巢组织中纤维化因子的表达：剪取卵巢组织30mg，ripa裂解液裂解后采用bca试剂盒测定蛋白浓度，取蛋白质样品(40μg)于sds-page凝胶进行电泳，转至pvdf膜，5％脱脂奶粉封闭2h，4℃孵育一抗过夜：α-sma(1：7000)、ctgf(1：500)、collagenⅰ(1：2000)、gapdh(1：1000)，tbst洗膜，二抗(1：20000)孵育1h，使用ecl发光液曝光，imagej软件计算灰度值。
26、优选的，所述步骤s4具体操作为：
27、c1、通过统计软件spss26.0进行分析，以均值±标准差()表示所有实验数据；
28、c2、使用单因素方差分析(one-wayanova)进行多组数据分析，采用lsd进行组间比较显著性差异检验，方差不齐用tamhane t2检验，以p<0.05为差异有统计学意义；
29、c3、使用graphpad prism 8.3.0软件进行作图。
30、本专利技术还提出一种利用南山本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
2.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤S1中，从南山楂果实中提取总黄酮(TFCC)的工艺为：
3.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为：
4.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤S3具体操作为：
5.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤S4具体操作为：
6.一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的应用，其特征在于，通过上述权利要求1-5所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法探究南山楂总黄酮在治疗育龄期妇女多囊卵巢综合征方面的应用。
【技术特征摘要】
1.一种利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
2.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤s1中，从南山楂果实中提取总黄酮(tfcc)的工艺为：
3.根据权利要求1所述的利用南山楂总黄酮治疗多囊卵巢综合征的方法，其特征在于，所述步骤s2的具体操作为：
4.根据权利要求1所述的利用...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋家乐，闫传智，徐婕径，刘智强，宋子纯，王可盈，黄春想，周燕园，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：
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