【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因治疗领域，具体涉及一种神经元衍生神经营养因子ndnf在治疗或缓解脊髓侧索硬化症中的应用，更具体涉及腺相关病毒介导神经元衍生神经营养因子(ndnf)在治疗运动神经元病变的应用。
技术介绍
1、1.1神经营养因子的分类及功能
2、神经营养因子是最初被鉴定为神经元存活必需的一类分子。随后越来越多的研究表明神经营养因子在成熟后的神经元中也发挥着众多重要的功能，如调节突触可塑性、维持神经元存活和促进损伤后轴突再生等。最初人们发现4种具有共同起源且在序列和结构上非常相似的神经营养因子，主要包括：神经生长因子(ngf，nerve growth factor)、脑源性神经营养因子(bdnf，brain-derived neurotrophic factor)、神经营养素3(nt3，neurotrophic-3)、神经营养素4(nt4，neurotrophic-4)。发现这些因子距今已有40年的时间，之后人们又分离出了众多的神经营养因子，主要包括：胶质细胞源性神经营养因子(gdnf，glia cell-derived neurotrophic factor)、睫状生长因子(cntf，ciliaryneurotrophic factor)、转化生长因子(tgf，transform growth factor)、血小板源生长因子(pdgf，platelet-derived growth factor)、胰岛素样生长因子(igf，insulin likegrowth factor)、神经元源性营养因子(ndnf，neuro
3、1.2神经退行性疾病及其特征
4、神经退行性疾病是指大脑和脊髓中的神经元不可逆的发生结构和功能的改变最终随着时间逐步死亡的一类疾病。常见的神经退行性疾病包括：阿尔兹海默症(ad,alzheimer’s disease)、帕金森病(parkinson’s disease)、脊髓侧索硬化症(als,amyotrophic lateral sclerosis)、亨廷顿病(hd,huntington’s disease)等。神经元的丢失会影响正常的生命活动，包括认知障碍，运动障碍等。不同的神经退行性疾病之间有一些不同之处和相似之处。不同之处，如不同的神经退行性疾病影响的神经元类型不同。在ad中，影响的神经元相对广泛，但也主要集中在海马和皮层的神经元。pd中主要影响的是黑质区域的多巴胺能神经元，紊乱黑质和纹状体的平衡。als主要影响的是支配骨骼肌的胆碱能神经元。也有一些相似之处，如基因组稳定性降低，dna损伤累积增多，修复减少；氧化应激增加；随着年龄的增加发病率增加；都会导致异常的蛋白斑块的聚集体形成等。ad中aβ淀粉样蛋白斑块(amyloid plaque)的聚集。pd中更复杂的α-synuclein斑块的聚集。als中tdp43(tar dna-binding protein of 43kda)蛋白斑块的聚集。在正常衰老过程中，也会出现和上述退行性疾病相似的生物学变化。随着人类寿命的延长以及环境的变化，神经退行性疾病的发病率越来越高，给个人、家庭和社会都带来了沉重的负担。因此，探究神经退行性疾病的发病机制，治疗靶点是研究人员面临的迫在眉睫的问题。
5、1.3肌萎缩性侧索硬化症
6、肌萎缩性侧索硬化症(als)由jean-martin charcot在1869年首次描述的神经退行性疾病。直至1993年人们才鉴定出第一个相关致病基因-超氧化物歧化酶(sod1)，至今该已发现基因有180多种错义、移码突变可能会引起als2。als是非常严重的致命性的神经退行性疾病，目前没有有效的缓解病症进程的治疗手段3。60岁-79岁是发病的高峰年龄，确诊后一般3-5年生命结束4,5。患者5年生存率是49％，10年生存率是32％6。als发病最明显的特征是体重降低，肌肉不自主的细微震颤或感到无力，随着骨骼肌的流失，脊髓、脑干和皮层的运动神经元逐渐死亡，受神经支配的肌肉越来越少，最终失去自主运动能力。患者后期进入闭锁状态，丧失语言、吞咽功能，只有支配眼部的肌肉受支配，可以通过眼动传出信息，最终由于膈肌的失控，无法自主呼吸而死亡。大部分患者会清楚的感受到身体瘫痪的过程，也有约15％的als患者会和额颞叶痴呆(ftd，frontotemporal lobar dementia)有不同程度的交叉，会出现判断力和执行力受损。als经fda批准的药物有3类，分别为：1996年批准的主要用于降低谷氨酸水平进而降低神经元的兴奋性毒性的利鲁唑(riluzole)18，于2019年被我国纳入首批罕见病减税药品清单；2017年批准用来消除自由基，缓解氧化应激的依达拉奉(edaravone)7；以及2022年新批准上市的减少未折叠蛋白反应的苯丁酸钠-牛黄酸二醇(sodium phenylbutyrate-taurursodiol)8。目前批准的药物能够延长的平均寿命为10个月。因此，als是非常残酷的目前没有治疗手段且发病进程很快的疾病9,10。
7、als的发病机制至今仍不清楚，比较公认的是基因-时间-环境理论11。即，具有易感基因，随着年龄增加细胞出现损伤累积，暴露于特定的环境，这些因素综合诱发als的发生。流行病学调查发现，其发病率与年龄呈正向相关，男性发病率和女性发病率的比值约为1.35，同时也具有很大的地域差异12。als患者中约10％为有家族史的家族性疾病，90％为没有家族史的散发性疾病。家族性als患者中约20％为sod1基因不同位点的氨基端突变导致的，约25％为c7ofr72的ggggcc序列的重复扩张引起13，剩余55％的家族性als致病基因包括fus、hnrnpa1、optn、pfn1、sqstm1/p62、ubqln2等40个基因14。散发性als中1-3％为sod1基因的错义突变，5％为c9orf72的ggggcc序列重复扩增引起。这些基因主要改变的生物学过程包括：营养因子减少、线粒体功能异常、氧化应激、蛋白质异常累积、轴突内细胞骨架的稳定性受损等15。
8、1.4神经营养因子在神经退行性疾病中的功能及临床应用
9、神经营养因子对于神经退行性疾病具有缓解的作用，已经在体外、体内、不同动物模型甚至临床试验中有充分的证明。将营养因子试用于临床前的研究已经有30年之久，主要有以下尝试16。最早的一个案例是1991年，将ngf以定位注射的方式注射到pd患者中的基底本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.神经元衍生神经营养因子NDNF在制备治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病的药物中的应用，其特征在于，所述神经元衍生神经营养因子NDNF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
3.一种治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病的方法，其特征在于，包括向有需要的受试者给药药学上可接受剂量的神经元衍生神经营养因子NDNF，所述神经元衍生神经营养因子NDNF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
5.神经元衍生神经营养因子NDNF用于治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病，其通过向有需要的受试者给药药学上可接受剂量的神经元衍生神经营养因子NDNF实现，所述神经元衍生神经营养因子NDNF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
6.如权利要求5所述的神经元衍生神经营养因子NDNF用于治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾
7.一种重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体含编码神经元衍生神经营养因子NDNF的核苷酸和CBh启动子。
8.如权利要求7所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述神经元衍生神经营养因子NDNF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述CBh启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
9.一种转化体，其特征在于，所述转化体含有如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体；
10.一种病毒颗粒的制备方法，其包括在合适的条件下培养如权利要求9所述的转化体，然后裂解所述转化体，从而获得所述病毒颗粒；
11.一种病毒颗粒，其特征在于，所述病毒颗粒通过如权利要求10所述的制备方法获得。
12.一种重组腺相关病毒，其包含编码神经元衍生神经营养因子NDNF的核苷酸；
13.一种药物制剂，其包含如权利要求11所述的病毒颗粒或如权利要求12所述的重组腺相关病毒；
14.一种套装药盒，其特征在于，所述套装药盒含有药盒A，所述药盒A含有如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体、如权利要求11所述的病毒颗粒、如权利要求12所述的重组腺相关病毒或如权利要求13所述的药物制剂；
15.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体、如权利要求11所述的病毒颗粒、如权利要求12所述的重组腺相关病毒或如权利要求13所述的药物制剂，以及药学上可接受的载体。
16.如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体、如权利要求9所述的转化体、如权利要求11所述的病毒颗粒、如权利要求12所述的重组腺相关病毒、如权利要求13所述的药物制剂、如权利要求14所述的套装药盒或如权利要求15所述的药物组合物在制备治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病的药物中的应用；较佳地，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
17.如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体、如权利要求9所述的转化体、如权利要求11所述的病毒颗粒、如权利要求12所述的重组腺相关病毒、如权利要求13所述的药物制剂、如权利要求14所述的套装药盒或如权利要求15所述的药物组合物在制备提高神经元衍生神经营养因子NDNF递送效率的药物中的应用；较佳地，所述神经元衍生神经营养因子NDNF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
...【技术特征摘要】
1.神经元衍生神经营养因子ndnf在制备治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病的药物中的应用，其特征在于，所述神经元衍生神经营养因子ndnf的氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
3.一种治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病的方法，其特征在于，包括向有需要的受试者给药药学上可接受剂量的神经元衍生神经营养因子ndnf，所述神经元衍生神经营养因子ndnf的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
5.神经元衍生神经营养因子ndnf用于治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病，其通过向有需要的受试者给药药学上可接受剂量的神经元衍生神经营养因子ndnf实现，所述神经元衍生神经营养因子ndnf的氨基酸序列如seq id no:1所示。
6.如权利要求5所述的神经元衍生神经营养因子ndnf用于治疗和/或预防运动神经元病变相关疾病，其特征在于，所述运动神经元病变相关疾病为脊髓侧索硬化症。
7.一种重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体含编码神经元衍生神经营养因子ndnf的核苷酸和cbh启动子。
8.如权利要求7所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述神经元衍生神经营养因子ndnf的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述cbh启动子的核苷酸序列如seq id no:2所示；
9.一种转化体，其特征在于，所述转化体含有如权利要求7或8所述的重组腺相关病毒载体；
10.一种病毒颗粒的制备方法，其包括在合适的条件下培养如权利要求9所述的转...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。