【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于蠕形螨特异抗原tpi（triose-phosphateisomerase，通常简称为tpi或tim）的检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸，尤其是提供了一种检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸，同时还提供了其制备方法，用于蠕形螨感染的血清检测，属于免疫学。
技术介绍
1、蠕形螨(demodex)是寄生在宿主毛囊和皮脂腺内的人兽共患寄生螨，它会引起痘疹、结节、脱毛、消瘦等症状，同时还会引起交叉感染，严重影响宿主的生活质量和健康。若不及时治疗，会加剧病情，严重者可导致死亡。蠕形螨呈世界 性分布，不同种族人群普遍易感。国外蠕形螨感染率为27%-100%，国内为20%-97.86%。目前尚无预防和治疗蠕形螨的特效药。因此建立一种检测快速、适合基层推广的血清学检测方法和定期的流行病学调查可有效降低感染蠕形螨的风险，有利于减少该病造成的危害和损失，对我国蠕形螨病的防控和人与动物的健康发展具有重要的意义。
2、目前检测蠕形螨的常用方法主要有直接涂片法、透明胶带法、挤刮法等。直接涂片法直观且简单易行，但敏感性和特异性可能受到操作技巧和经验的影响。透明胶带法能够较准确地检测到蠕形螨的存在，但检出率与胶带的粘性、粘贴的部位、面积和时间等因素有关。挤刮法能够获取皮肤或毛囊中的分泌物和皮屑，提高蠕形螨检出率。但该方法可能对患者造成一定的不适感，且操作过程需要一定的技巧和经验。免疫学诊断方法是病原学诊断方法的重要补充，该方法具有特异性强、敏感性高、稳定性好等优点。目前诊断蠕形螨常用的实验室检查方法为酶联免疫吸附试验（elisa）
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸及其制备方法，可以快速检测蠕形螨感染，有检测快速、操作简单、不需特定仪器等特点，适合临床中的现场检测及大规模的流行病学调查。
2、本专利技术所述的蠕形螨特异抗原基因tpi（genbank：mt434861.8）。
3、本专利技术所述的是一种蠕形螨特异抗原基因tpi获取的方法，包括以下步骤：根据基因序列，设计特异性引物，通过聚合酶链式反应（pcr）扩增出目的片段。
4、本专利技术公开了一种检测蠕形螨感染免疫胶体金层析试纸条的制备方法，通过表达纯化tpi，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，并确定胶体金溶液的最佳ph值和最佳金黄色葡萄球菌a蛋白（spa）标记量等条件，将pvc底板、硝酸纤维素膜（nc膜）、金标垫、样品垫、吸水纸等进行组装，之后确定组装好的试纸条的检测线（tpi）和质控线（鼠抗spa抗体）的最佳包被量，以此为基础研制出了一种诊断和检测蠕形螨感染的免疫胶体金层析试纸条。
5、tpi蛋白是检测蠕形螨的免疫优势抗原之一，可以刺激机体较早地产生特异性抗体，在检测及疫苗相关研究中得到广泛的关注和研究。本试验通过制备纯度高、反应性好、稳定的tpi蛋白，开发、优化并最终建立了免疫层析试纸条及抗体检测方法。
6、本专利技术所述的一种检测蠕形螨抗体胶体金试纸条的制备方法：
7、将金标垫提前用重悬液进行浸润后，放置烘箱中烘干，然后将pvc底板、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装在一起。将纯化的tpi稀释至0.25mg/ml,spa的稀释倍数为1：16，分别标记到硝酸纤维素膜的检测线上和质控线上，即得检测蠕形螨抗体胶体金试纸条。
8、本专利技术提供一种上述检测蠕形螨抗体胶体金试纸条的应用，即所述检测蠕形螨抗体胶体金试纸条在检测血清中蠕形螨抗体中的应用。
9、当抗spa抗体没有与spa结合则质控线c线无条带及表明该试纸条失效；当抗spa抗体可以和质控线c线的spa结合质控线有条带时，如果血清中有tpi抗体则会和tpi蛋白结合，此时t线显色结果判定为阳性；当t线无条带则结果判定为阴性。
10、本专利技术的积极效果在于：基于蠕形螨tpi蛋白制备的蠕形螨感染胶体金试纸条具有检测速度快、稳定性高、特异性强、敏感性好、操作简便、检测成本低、无需任何仪器设备、检测样本多样性、不需要专业人员、对操作人员的身体危害及环境污染小等优点。检测结果直观易判读，适于临床现场中快速诊断和大规模流行病学调查中应用，好的检测方法可以在很大程度上降低蠕形螨发生和传播的风险。
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1.一种检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸，其特征在于：
2.如权利要求1所述的一种检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种检测蠕形螨感染胶体金免疫层析试纸，其特征在于：
2.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：李建华，耿琦，李新，段杨鑫婷，王晓岑，张旭，宫鹏涛，张楠，张西臣，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：
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