【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外诊断，具体涉及一种识别蓝舌病毒vp7蛋白的鼠源基因工程抗体及其制备方法。
技术介绍
1、蓝舌病是一种主要由媒介传播的传染性病毒性疾病，影响野生和家养反刍动物，如绵羊、山羊、牛、水牛、鹿等。蓝舌病毒主要在易感脊椎动物宿主之间通过库蠓进行传播，该疾病的全球分布在很大程度上取决于媒介的分布。蓝舌病毒(btv)感染在绝大多数动物中不明显，但可在一部分受感染的羊、鹿和野生反刍动物中引起死亡。蓝舌病的临床症状主要包括发热、充血充血、面部水肿出血、粘膜糜烂、冠状炎和板膜炎、胸膜和心包出血。
2、蓝舌病毒是呼肠孤病毒科环状病毒属的代表性成员。btv由三层蛋白质层组成。外衣壳层包含两种蛋白质，vp2和vp5。vp2是主要的中和抗原和血清型特异性的决定因素。去除外层的vp2/vp5层，留下一个双层二十面体核粒子，包括一个完全由vp7的衣壳组成的外层和一个完整的由vp3组成的内衣壳，其包裹着10个dsrna基因组片段和次要的结构蛋白(vp1、vp4和vp6)。vp7是血清群特异性主要决定因素，用于建立竞争性酶联免疫吸附试验以检测抗btv抗体。酶联免疫吸附试验(elisa)和病毒中和(vn)是最常用的血清学试验，基于单克隆抗体的竞争性elisa具有灵敏度高、特异性强、快速、可靠等优点。
3、本专利技术筛选获得一种识别蓝舌病毒vp7蛋白的杂交瘤细胞株2b2，利用巢式pcr方法扩增得到抗体的重链及轻链可变区序列；并将所述重链及轻链可变区序列构建到含有鼠源igg恒定区的表达载体上，成功表达获得了识别蓝舌病毒vp7蛋白
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术提供了一种识别蓝舌病毒vp7蛋白的基因工程抗体，所述的基因工程抗体具有效价高、亲和力强、特异性好的特点，能够识别btv感染bhk-21细胞和kc细胞中的天然vp7蛋白，且与蓝舌病毒的重组vp7蛋白发生反应。
2、具体包括以下内容：
3、第一方面，本专利技术提供了一种识别蓝舌病毒vp7蛋白的基因工程抗体，所述基因工程抗体包括抗体重链和抗体轻链；
4、所述抗体重链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.5所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.6所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.7所示的cdr3；
5、所述抗体轻链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.8所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.9所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.10所示的cdr3。
6、优选地，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。
7、第二方面，本专利技术提供了一种核酸，所述核酸编码上述第一方面所述基因工程抗体的抗体重链和抗体轻链。
8、优选地，编码所述抗体重链的可变区的基因序列如seq id no.2所示，编码所述抗体轻链的可变区的基因序列如seq id no.4所示。
9、第三方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的基因工程抗体在以非疾病诊断为目的的蓝舌病毒体外检测中的应用。
10、第四方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的基因工程抗体在制备检测蓝舌病毒的试剂，或试纸条，或试剂盒中的应用。
11、第五方面，本专利技术提供了一种蓝舌病毒elisa检测试剂盒，所述试剂盒包括上述第一方面所述的基因工程抗体。
12、优选地，所述试剂盒包括酶标板、蓝舌病毒抗原、封闭液、稀释液、上述第一方面所述的基因工程抗体、酶标二抗、洗涤液、显色剂、终止液。
13、优选地，所述封闭液为含5％脱脂奶粉的pbst缓冲液。
14、优选地，所述稀释液为0.01m pbs ph7.2。
15、优选地，所述洗涤液为pbst缓冲液。
16、优选地，所述酶标二抗为hrp标记的山羊抗鼠二抗。
17、优选地，所述蓝舌病毒抗原选自蓝舌病毒vp7重组蛋白。
18、第六方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的基因工程抗体的制备方法，所述方法包括以下步骤：
19、(1)扩增获得编码上述第一方面所述基因工程抗体的轻链可变区序列和重链可变区序列，分别构建到含有鼠源恒定区的载体中，获得所述基因工程抗体的轻链表达质粒和重链表达质粒；
20、(2)将轻链表达质粒和重链表达质粒按1：1转染到293f悬浮细胞内，培养纯化获得所述基因工程抗体。
21、本专利技术的有益效果是：①本专利技术利用杂交瘤细胞技术筛选得到的识别蓝舌病毒vp7蛋白的杂交瘤细胞株2b2，将所述杂交瘤细胞株2b2用trizol裂解后提取总rna，反转录后利用巢式pcr方法扩增得到编码抗体的重链及轻链可变区序列；并将所述重链及轻链可变区序列构建到含有鼠源恒定区的载体上，成功表达获得了识别蓝舌病毒vp7蛋白的基因工程抗体；②所述基因工程抗体能够识别btv感染bhk-21细胞和kc细胞中的天然vp7蛋白，且与蓝舌病毒的重组vp7蛋白发生反应，能够用于蓝舌病毒的检测与诊断；③可利用该基因工程抗体建立蓝舌病毒竞争elisa、夹心elisa、胶体金试纸条等检测方法，相较于现有抗体检测方法，所述方法具有更好的灵敏度和特异性，适用于蓝舌病毒的检测与诊断。
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1.一种识别蓝舌病毒VP7蛋白的基因工程抗体，其特征在于，所述基因工程抗体包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的基因工程抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1或2所述基因工程抗体的抗体重链和抗体轻链。
4.如权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的基因序列如SEQ ID NO.2所示，编码所述抗体轻链的可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。
5.如权利要求1或2所述的基因工程抗体在以非疾病诊断为目的的蓝舌病毒体外检测中的应用。
6.如权利要求1或2所述的基因工程抗体在制备检测蓝舌病毒的试剂，或试纸条，或试剂盒中的应用。
7.一种蓝舌病毒ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的基因工程抗体。
8.如权利要求7所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板、蓝舌病毒抗原、
9.如权利要求7所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述蓝舌病毒抗原选自蓝舌病毒VP7蛋白。
10.如权利要求1或2所述的基因工程抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种识别蓝舌病毒vp7蛋白的基因工程抗体，其特征在于，所述基因工程抗体包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的基因工程抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1或2所述基因工程抗体的抗体重链和抗体轻链。
4.如权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的基因序列如seq id no.2所示，编码所述抗体轻链的可变区的基因序列如seq id no.4所示。
5.如权利要求1或2所述的基因工程抗体在以非疾病诊断为目的的...
【专利技术属性】
技术研发人员：独军政，户鑫兵，孟凡华，张雨，田占成，关贵全，殷宏，罗建勋，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
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