【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，公开了一种氟化喜树碱类化合物的新用途——抗膀胱癌活性，用于制备治疗膀胱癌的药物。
技术介绍
1、膀胱癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，具有易复发、进展快等特点，而基于化学药物的治疗手段在膀胱癌治疗过程中占据关键地位。化学药物治疗主要包括膀胱灌注化疗和全身化疗。膀胱灌注化疗主要用于非肌层浸润性膀胱癌术后的膀胱内灌注，以预防肿瘤复发。然而，由于肿瘤的异质性，部分肿瘤对药物不敏感，导致复发。全身化疗的主流策略为基于铂类药物的顺铂联合吉西他滨(gc)方案，其总体反应率为49％，但约半数患者对该方案无反应。鉴于膀胱癌细胞对现有药物敏感性存在差异，开发和应用靶向不同作用位点的新药物，以提高总体肿瘤反应率，显得尤为重要。
2、氟原子因其特有的理化性质被认为是氢原子、羰基、磺酰基和氰基的潜在生物电子等排体，常被药化界认为是万能钥匙。从分子层面看，含氟化合物的酸性、亲脂性、静电相互作用以及在体内的代谢过程等都将被调节甚至改变；在生理层面上，药物分子中氟原子的引入可以提高生物利用度、增加对靶器官的选择性、降低药物的使用剂量。氟元素的特性赋予了含氟化合物独特的物理化学性质，从而促进了含氟药物的快速发展。
3、喜树碱是从中国喜树的树皮和茎中分离出来的五环喹啉生物碱，是抗癌药物开发中的重要先导化合物之一。当前，喜树碱衍生的dna拓扑异构酶i抑制剂，如拓扑替康、伊立替康和贝洛替康已被批准用于治疗非小细胞肺癌、卵巢癌和结直肠癌，但在膀胱癌中目前应用尚少。喜树碱的构效关系表明，a环修饰能显著影响其抗肿瘤活性，是深
4、因此，我们以喜树碱为先导结构，在a环引入氟原子，得到一系列a环氟化喜树碱类化合物，并测试了其对膀胱癌t24和umuc3细胞株的抑制活性。实验结果进一步揭示了氟化喜树碱类化合物可作为一种新型的抗膀胱癌药物进行开发，且本专利技术所述的化合物尚未见在膀胱癌治疗中的应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种氟化喜树碱类化合物的抗膀胱癌活性，以期用于制备治疗膀胱癌的药物。
2、下面通过对膀胱癌t24和umuc3细胞系的干预，使用cck-8法测定不同浓度干预的t24和umuc3细胞的细胞存活率的实验，对氟化喜树碱类化合物的抗膀胱癌活性进行具体研究和分析。
3、本专利技术所提供的氟化喜树碱类化合物，均以dmso溶解稀释为10mm母液，以rpmi-1640完全培养基为溶剂梯度稀释为8μm、1.6μm、0.32μm、0.064μm、0.0128μm、0.00256μm、0.000512μm、0.0001024μm、0.00002048μm、0.000004096μm的工作液。对膀胱癌t24和umuc3细胞系的干预，使用cck-8法测定不同浓度干预的t24和umuc3细胞的细胞存活率，根据细胞存活率计算拟合出每个化合物在不同细胞中的半数抑制浓度(ic50)值，ic50越低代表同等浓度下细胞存活越少即对肿瘤细胞的杀伤能力越强。
4、所用的膀胱癌细胞系t24和umuc3均使用rpmi-1640完全培养基(rpmi-1640基础培养基、10％胎牛血清、青霉素/链霉素双抗)并在37℃、5％二氧化碳和饱和湿度条件下培养。
5、将处于对数期生长的t24和umuc3细胞用胰蛋白酶消化并使用rpmi-1640完全培养基制备为单细胞混悬液，计数后以5000个/孔的密度接种至96孔板，待细胞贴壁之后去除培养液将上述工作液100ul/孔加入孔板，每组设置3个重复孔，干预72h之后去除工作液，每孔加入100ul含有5％cck-8试剂的rpmi-1640基础培养基，继续培养2h后，酶标仪450nm波长测定每孔吸光度，根据吸光度计算细胞抑制率和ic50。并与膀胱癌治疗常用药顺铂以及商业化喜树碱类药拓扑替康和伊立替康进行对比。
6、每种化合物重复检测三次。所述氟化喜树碱类化合物的结构式及在膀胱癌细胞中的ic50见表1。
7、表1氟化喜树碱类化合物的结构式以及在膀胱癌细胞中的ic50数据
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13、表1的实验结果显示，所涉及的氟化喜树碱类化合物均对膀胱癌t24和umuc3细胞系表现出较强的抑制活性。其中，w-16的活性最佳，对膀胱癌t24和umuc3细胞株的ic50值分别为0.000307um和0.000291um，显著优于对照药顺铂、拓扑替康和伊立替康。此外，w-1、w-2、w-3、w-5、w-6、w-8、w-11、w-12、w-13、w-15和w-18也均对膀胱癌t24和umuc3细胞株表现出优于或接近对照药的抗肿瘤活性。而w-4、w-7、w-9、w-14、w-17和w-19对测试的两种膀胱癌细胞系表现出优于伊立替康的抑制作用。因此本专利技术所涉及的氟化喜树碱类化合物在膀胱癌的治疗中具有良好的应用前景。
14、基于上述研究成果，以氟化喜树碱类化合物为活性物质，按药学上可接受的盐加入药学上可接受的载体和/或辅料，制成药学上可接受的任一剂型，如片剂、喷雾剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、针剂、混悬剂的任一种剂型。
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1.氟化喜树碱类化合物作为活性成分在制备抗膀胱癌药物中的用途，其特征在于：所述氟化喜树碱类化合物的结构式如下：
2.如权利要求1所述氟化喜树碱类化合物作为活性成分在制备抗膀胱癌药物中的用途，其特征在于：所述氟化喜树碱类化合物或其药学上可接受的盐加入药学上可接受的载体和/或辅料，制成药学上可接受的任一剂型。
3.如权利要求2所述氟化喜树碱类化合物作为活性成分在制备抗膀胱癌药物中的用途，其特征在于：所述剂型为片剂、喷雾剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、针剂、混悬剂的任一种剂型。
【技术特征摘要】
1.氟化喜树碱类化合物作为活性成分在制备抗膀胱癌药物中的用途，其特征在于：所述氟化喜树碱类化合物的结构式如下：
2.如权利要求1所述氟化喜树碱类化合物作为活性成分在制备抗膀胱癌药物中的用途，其特征在于：所述氟化喜树碱类化合物或其药学上可...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘映前，王志平，王邓拓，张泽，罗雄飞，范光锐，张智军，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：
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