本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种提高伏马毒素降解酶的比活力的方法及突变体和应用。本发明专利技术的伏马毒素降解酶突变体Q229S、Q229G、Q229A、Q229S/S231A、Q229S/D255S、Q229S/S231G、Q229S/A233R、Q229S/S234G、Q229S/V441T、Q229S/G443R、Q229S/D346G、Q229S/G348R、Q229S/S256G、Q229S/N344E和Q229S/R516S与伏马毒素降解酶Fum37对FB<subgt;1</subgt;的降解能力相比，各伏马毒素降解酶突变体的相对活力均高于伏马毒素降解酶Fum37的相对活力。应用本发明专利技术的方法可以获得性质优良的伏马毒素降解酶突变体，该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少伏马毒素对动物及人类健康的危害。
1、伏马毒素(fumonisin，fb)是镰刀菌属(fusarium spp.)在特定的条件下产生的一些水溶性的次级代谢产物。伏马毒素是由多氢醇和丙三羧酸组成双酯类化合物，结构中的主要活性官能团是伯胺、三羧酸、羟基和脂肪族骨架，这些与它们的毒性效应密切相关。研究表明，伏马毒素可引起大鼠肾肿瘤和肝癌、马脑白质软化症(elem)，猪肺水肿(ppe)等，且与人类食管癌的发病密切相关。到目前为止，发现了28种伏马毒素的类似物，将其分为四类，即fa、fb、fc和fp，在b系列中，最常发现的是伏马毒素b1(fb1)、b2(fb2)和b3(fb3)，其中fb1量在自然界中的量大约占70％-80％左右，其毒性最强，污染最广泛。应用物理、化学的方法能将伏马毒素去除，但是，化学方法局限性比较大，虽然能降低fb1的含量，但会引入新的化学物质，增加安全隐患，此外欧盟也禁止使用化学方法消除真菌毒素。物理方法可去除一定量的伏马毒素，但要求条件高，且易改变食品品质和风味。生物降解法降解伏马毒素反应温和，专一性强，特异性高，应用前景非常广阔。
2、真菌毒素的污染在全球范围内都在日益加剧，其造成宝贵的粮食资源的浪费，且对人具有致癌性。因此，研发降解真菌毒素的酶制剂，可以很好的遏制被污染的粮食作物中的毒素的产生，挽回经济损失。
>2、本专利技术的目的在于提供一种比活力提高的伏马毒素降解酶突变体。3、本专利技术的再一目的在于提供一种比活力提高的伏马毒素降解酶基因。
4、本专利技术的再一目的在于提供一种包括上述基因的重组表达载体。
5、本专利技术的再一目的在于提供一种包括上述基因的重组菌株。
6、本专利技术的再一目的在于提供制备伏马毒素降解酶的方法。
7、本专利技术的再一目的是提供一种提高伏马毒素降解酶的比活力的方法。
8、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s，其氨基酸序列如seqid no:1所示。
9、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s的基因，该基因的基因组序列如seq id no:2所示。
10、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229g，其氨基酸序列如seqid no:3所示。
11、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229g的基因，该基因的核苷酸序列如seq id no：4所示。
12、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229a，其氨基酸序列如seqid no：5所示。
13、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229a的基因，该基因的基因组序列如seq id no：6所示。
14、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/s231a，其氨基酸序列如seq id no：7所示。
15、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/s231a的基因，该基因的基因组序列如seq id no：8所示。
16、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/d255s，其氨基酸序列如seq id no：9所示。
17、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/d255s的基因，该基因的基因组序列如seq id no：10所示。
18、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/s231g，其氨基酸序列如seq id no：11所示。
19、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/s231g的基因，该基因的基因组序列如seq id no：12所示。
20、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/a233r，其氨基酸序列如seq id no：13所示。
21、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/a233r的基因，该基因的基因组序列如seq id no：14所示。
22、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/s234g，其氨基酸序列如seq id no：15所示。
23、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/s234g的基因，该基因的基因组序列如seq id no：16所示。
24、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/v441t，其氨基酸序列如seq id no：17所示。
25、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/v441t的基因，该基因的基因组序列如seq id no：18所示。
26、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/g443r，其氨基酸序列如seq id no：19所示。
27、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/g443r的基因，该基因的基因组序列如seq id no：20所示。
28、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/d346g，其氨基酸序列如seq id no：21所示。
29、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/d346g的基因，该基因的基因组序列如seq id no：22所示。
30、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/g348r，其氨基酸序列如seq id no：23所示。
31、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/g348r的基因，该基因的基因组序列如seq id no：24所示。
32、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/s256g，其氨基酸序列如seq id no：25所示。
33、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/s256g的基因，该基因的基因组序列如seq id no：26所示。
34、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/n344e，其氨基酸序列如seq id no：27所示。
35、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/n344e的基因，该基因的基因组序列如seq id no：28所示。
36、根据本专利技术具体实施方式的伏马毒素降解酶突变体q229s/r516s，其氨基酸序列如seq id no：29所示。
37、本专利技术提供了编码上述伏马毒素降解酶突变体q229s/r516s的基因，该基因的基因组序列如seq id no：30所示。
38、本专利技术还提供了包含上述伏马毒素降解酶突变体编码基因的重组载体，将本专利技术的伏马毒素降解酶突变体编码基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核普酸序列可操作的与表达调控序列相连接。
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【技术保护点】
1.一种比活力提高的伏马毒素降解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示。
2.一种比活力提高的伏马毒素降解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、或SEQ IDNO:29所示。
3.一种伏马毒素降解酶基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1或2所述的比活力提高的伏马毒素降解酶突变体。
4.根据权利要求3所述的伏马毒素降解酶基因，其特征在于，所述基因的核苷酸需要如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQID NO:26、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:30所示。
5.包括权利要求3所述的伏马毒素降解酶基因的重组载体。
6.包括权利要求3所述的伏马毒素降解酶基因的重组菌株。
7.权利要求1或2所述的比活力提高的伏马毒素降解酶突变体的应用。
8.权利要求1或2所述的比活力提高的伏马毒素降解酶突变体用于降解伏马毒素的应用。
9.一种提高伏马毒素降解酶的比活力的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：对氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示的马毒素降解酶进行Q229S、Q229G或Q229A突变。
10.根据权利要求9所述的提高伏马毒素降解酶的比活力的方法，其特征在于，当对氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示的马毒素降解酶进行Q229S时，所述方法进一步包括进行S231A、D255S、S231G、A233R、S234G、V441T、G443R、D346G、G348R、S256G、N344E或R516S突变的步骤。
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【技术特征摘要】
1.一种比活力提高的伏马毒素降解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no:1、seq id no:3或seq id no:5所示。
2.一种比活力提高的伏马毒素降解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no:7、seq id no:9、seq id no:11、seq id no:13、seq id no:15、seq id no:17、seq id no:19、seq id no:21、seq id no:23、seq id no:25、seq id no:27、或seq idno:29所示。
3.一种伏马毒素降解酶基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1或2所述的比活力提高的伏马毒素降解酶突变体。
4.根据权利要求3所述的伏马毒素降解酶基因，其特征在于，所述基因的核苷酸需要如seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seqid no:14、seq id no:16、seq id no:18、...
【专利技术属性】
技术研发人员：李中媛，赵军旗，张梦伟，金轶，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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