【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物技术及其应用领域，本专利技术涉及一种高原适应性的微小核酸分子生物标志物组合及其试剂盒。
技术介绍
1、平原人急性进入海拔2500米的高原地区后，低压低氧可以导致人体血氧含量显著下降，从而使得组织细胞氧的需求无法满足，正常生理功能稳态受损。对于这种生理功能稳态受损，一部分人能通过机体自身调整，建立起良好的高原适应机制以维持生理功能稳态，很好地在高原环境中工作生活，医学上称为高原适应良好者(high altitude adaption，haa)。而另外一部分人，则为高原适应不良者(high-altitude maladaption，ham)，其对高原低氧的适应能力差，无法快速建立高原适应机制，从而导致急性高原反应(acutemountain sickness，ams)、高原肺水肿(high-altitude pulmonary edema,hape)和高原脑水肿(high-altitude cerebraledema,hace)等急性高原病的发生，轻者严重影响急进高原人群的日常生活质量，降低其工作能力或导致失能，重者可导其致死亡，严重威胁生命健康(pham,k.,k.parikh and e.c.heinrich,hypoxia and inflammation:insights fromhigh-altitude physiology.《frontiers in physiology》,2021.12:p.676782)。
2、高原适应性强弱具有明显的遗传倾向性，环境海拔高度、进入高原速度和遗传因
3、近年以来，随着国内外高原旅游业及高原地区经济的蓬勃发展，现在每年都有超过2000万人从平原往返于高原(高钰琪.高原军事医学[m].重庆出版社,2005；刘昊,侯云鹏,冉庄,等.青藏高原供氧列车车厢中常见空气指标的监测及对人体舒适度的影响.《解放军预防医学杂志》,2020.)。而高原适应不良(high-altitude maladaption，ham)所引起的急性高原病高发，不仅给他们的生活和工作造成十分严重的影响，而且亦给高原地区的卫生机构造成沉重的负担。所以亟待寻找到在平原对个体高原适应性进行预测诊断的有效方法,尤其是以生物标志物为检测手段的精准检测方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于高原适应性的微小核酸分子生物标志物组合，通过检测受检者平原时血浆中hsa-mir-4290和hsa-mir-877-3p表达水平提前评估个体进入高原后适应性强弱。还提供这种microrna分子标志物的应用和试剂盒。血液循环microrna具有作为预测个体高原适应性生物标志物的潜能，适用于平原人高原适应性的提前评估并筛选高原适应良好者。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术的第一目的在于提供hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290联合作为生物标志组合物在筛查急进高原后个体高原适应性中的应用。
4、进一步，在一些具体的实施例中，所述hsa-mir-877-3p的序列如seq id no.5所示，所述hsa-mir-4290的序列如seq id no.1所示。
5、进一步，在该应用中，具体为检测受试者血浆中hsa-mir-4290或/和hsa-mir-877-3p的表达水平，所述的核酸分子在高原适应良好者(haa)血浆中的表达与高原适应不良者(ham)血浆中的表达相比被上调。
6、进一步，所述血浆为清晨空腹外周静脉血离心后血浆。
7、进一步，所述血浆为将edta-na抗凝采血管所采集的清晨空腹外周静脉血，3000rpm，25℃条件下离心10分钟后，用无rna酶和无细菌的吸头取上清(血浆)置于无菌无酶的ep管中-80℃保存备用。
8、本专利技术的第二目的在于提供检测hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290的试剂在制备筛查高原适应性的试剂或试剂盒中应用。
9、进一步，所述试剂为分别检测hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290的引物、探针和/或芯片。
10、进一步，在一些具体的实施例中，所述引物为茎环rt引物。
11、第三，本专利技术还提供一种筛查高原适应性的试剂盒，所述试剂盒能检测hsa-mir-4290和hsa-mir-877-3p两种microrna，所述试剂盒包含能够与hsa-mir-4290或hsa-mir-877-3p特异性结合进行反转录的反转录引物。
12、进一步，在一些具体的实施例中，与hsa-mir-4290特异性结合进行反转录的反转录引物如seq id no.2所示。
13、进一步，与hsa-mir-877-3p特异性结合进行反转录的反转录引物如seq id no.6所示。
14、进一步，该试剂盒中还包括能够分别与hsa-mir-4290或hsa-mir-877-3p反转录产物特异性结合并进行qpcr扩增的引物。
15、进一步，在一些具体的实施例中，hsa-mir-4290正向引物序列如seq id no.3所示，hsa-mir-4290反向引物序列如seq id no.4所示。
16、进一步，hsa-mir-877-3p正向引物序列如seq id no.7所示，hsa-mir-877-3p反向引物序列如seq id no.8所示。
17、进一步，所述筛查高原适应性的试剂盒还包括5x reverse transcriptionbuffer，rtase mix和rnase-free h2o。
18、进一步，在一些具体的实施例中，所述筛查高原适应性的试剂盒还包括microrna逆转录(rt)反应体系，所述microrna rt反应体系按每10ul计，包括：茎环rt引物1ul，5xreverse transcription buffer 2ul，rtase mix 2ul，rnase-free h2o 3ul，其余2ul为样本rna。
19、进一步，样本rna来源于血浆。
20、进一步，样本rna来源于清晨空腹外周静脉血离心后血浆。
21、进一步，所述试剂盒rt反应温度参数：42℃60min，70℃10min。
22、进一步，所述试剂盒还包括microrna qpcr反应体系，所述microrna qpcr反应体系按每20ul计包括：sybr green mix 10ul，microrna qpcr forward pri本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.hsa-miR-877-3p和hsa-miR-4290联合作为生物标志组合物在筛查急进高原后个体高原适应性中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hsa-miR-877-3p的序列如SEQ ID No.5所示，所述hsa-miR-4290的序列如SEQ ID No.1所示。
3.检测hsa-miR-877-3p和hsa-miR-4290的试剂在制备筛查高原适应性的试剂或试剂盒中应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为分别检测hsa-miR-877-3p和hsa-miR-4290的引物、探针和/或芯片。
5.筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含能够与微小核酸分子生物标志物特异性结合进行反转录的反转录引物，所述微小核酸分子生物标志物为hsa-miR-877-3p和hsa-miR-4290。
6.根据权利要求5所述的筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述反转录引物序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.6所示。
7.根据权利要求5所述的筛查高原适应性
8.根据权利要求7所述的筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，正向引物序列如SEQ ID No.3或SEQ ID No.7所示，反向引物序列如SEQIDNo.4或SEQ ID No.8所示。
9.根据权利要求5所述的筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒反转录反应温度参数：42℃60min，70℃10min。
10.根据权利要求5所述的筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括5xreverse transcription Buffer，RTase Mix和RNase-free H2O。
...【技术特征摘要】
1.hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290联合作为生物标志组合物在筛查急进高原后个体高原适应性中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hsa-mir-877-3p的序列如seq id no.5所示，所述hsa-mir-4290的序列如seq id no.1所示。
3.检测hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290的试剂在制备筛查高原适应性的试剂或试剂盒中应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为分别检测hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290的引物、探针和/或芯片。
5.筛查高原适应性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含能够与微小核酸分子生物标志物特异性结合进行反转录的反转录引物，所述微小核酸分子生物标志物为hsa-mir-877-3p和hsa-mir-4290。
6.根据权利要求5所述的筛查高原适应性的试剂盒，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄河，万东君，谢慎威，董鹤，黄沛，张英菊，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院，
类型：发明
国别省市：
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