【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，具体涉及一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂及应用。
技术介绍
1、自身免疫性疾病(aid)是一种由自身抗原引发免疫反应而导致组织或器官损害的疾病。系统性血管炎是自身免疫疾病的一种，anca是系统性血管炎的一组标志性抗体，而其中抗蛋白酶3(pr3)抗体是anca的代表抗体之一，也是韦格拉肉芽肿病(wg)的特异性抗体，对于临床鉴别和诊断wg血管炎有重要意义。
2、目前临床对抗蛋白酶3抗体的检测方法多为免疫荧光法、elisa、免疫印迹法和化学发光法，但均存在一定缺点，如elisa法检测操作步骤多、反应时间长、灵敏度低且由于其通常为多孔检测板，无法进行独立的单人份检测，免疫荧光法通常操作繁琐，不易进行重复，化学发光检测需依赖大型精密仪器。
3、免疫层析检测试剂很多均采用干法检测，通过将显色或荧光等物质固定在结合垫等固相物质上的形式实现，但干法层析可能存在精密度差问题，批内或者批间检测差异大，且关于检测灵敏度仍是湿法免疫层析检测更具有优势。此外，免疫层析抗体检测试剂大部分采用抗原固定在硝酸纤维素膜上的方式，不同抗原的构象和分子量不同，其在硝酸纤维素膜上的固定效率往往差异较大，部分抗原固定效率较低，检测灵敏度更低，制备试剂时用量更大，且由于层析检测试剂的原理使得抗原用量相对elisa方式更高。
4、因此，提供一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，检测时间短、操作简单、可单人份检测，有良好的灵敏度和精密度，且固定效率高，灵敏度高，抗原相对用量低，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于，提供一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，检测时间短、操作简单、可单人份检测，具有良好的灵敏度和精密度，且通过生物素-链霉亲和素体系避免抗原直接固定在硝酸纤维素膜上，解决现有技术中固定效率差的问题，增加试剂检测灵敏度，抗原相对用量更低，节约成本。
2、本专利技术的目的之二在于，提供该免疫层析试剂的应用。
3、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
4、本专利技术公开的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，所述免疫层析试剂包括检测卡和样本稀释液；
5、其中检测卡包括有设置了检测线和质控线的试纸条；所述试纸条包括pvc底板，搭载于pvc底板上的样本垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测线由包被在硝酸纤维素膜上的链霉亲和素形成，质控线由包被在硝酸纤维素膜上的2,4-二硝基苯酚抗体(抗dnp抗体)或羊抗鸡igy形成；
6、所述样本稀释液中含有偶联了抗体的荧光纳米微球和生物素标记的pr3抗原。
7、本专利技术的部分实施方案中，所述荧光纳米微球偶联的抗体为两种：其中一种选自2,4-二硝基苯酚牛血清白蛋白复合物(dnp-bsa)或鸡igy，另一种为抗人igg抗体。
8、本专利技术的部分实施方案中，将蛋白包被液在硝酸纤维素膜上划线、烘干，形成所述检测线；
9、优选地，所述蛋白包被液为含有链霉亲和素的缓冲液；
10、更优选地，所述缓冲液含有0.1-10wt％糖类成分的pbs溶液；进一步优选的，所述糖类物质包括蔗糖、海藻糖、甘露醇、聚乙二醇中的至少一种；
11、更优选地，所述蛋白包被液中链霉亲和素抗体的包被浓度为0.1～2mg/ml，进一步优选为0.5～2mg/ml；
12、优选地，烘干温度为30-55℃。
13、本专利技术的部分实施方案中，将质控包被液在硝酸纤维素膜上划线、烘干，形成所述质控线；
14、优选地，所述质控包被液为含有抗dnp抗体或羊抗鸡igy的缓冲液；
15、更优选地，所述缓冲液含有0.1-10wt％糖类成分；进一步优选的，所述糖类物质包括蔗糖、海藻糖、甘露醇、聚乙二醇中的至少一种；
16、更优选地，所述质控包被液中抗dnp抗体或羊抗鸡igy的包被浓度为0.1～2mg/ml；
17、优选地，烘干温度为30-55℃。
18、本专利技术的部分实施方案中，所述样本稀释液为含有偶联了抗体的荧光纳米微球和生物素标记的pr3抗原的缓冲液；
19、优选地，所述缓冲液为tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种；
20、优选地，所述样本稀释液中还包括有盐、表面活性剂、防腐剂、添加剂中的至少一种；
21、更优选地，所述盐包括氯化钠、氯化钙、氯化钾中的至少一种，其终浓度为0.1～1m；
22、更优选地，所述表面活性剂包括吐温、甜菜碱、triton、长链烷基硫酸盐中的至少一种，其浓度为0.05～5wt.％；
23、更优选地，所述防腐剂包括叠氮钠、proclin、硫柳汞中的任意一种，浓度为0.05～2wt.％；
24、更优选地，所述添加剂包括bsa，其浓度为0～5wt.％；
25、更优选地，所述样本稀释液的ph值为7.0～9.0。
26、本专利技术的部分实施方案中，所述样本稀释液生物素标记的pr3抗原的浓度为0.2-2μg/ml；优选地，生物素和抗原标记使用的质量比例为5～20:1。
27、本专利技术的部分实施方案中，所述样本稀释液中偶联了抗体的荧光纳米微球的含量为0.005～0.05wt.‰。
28、本专利技术的部分实施方案中，所述偶联了抗体的荧光纳米微球的制备方法包括如下步骤：
29、将荧光纳米微球活化，向含活化荧光纳米微球的缓冲液中加入质控线对应抗体和检测线对应抗体，孵育，完成与抗体的偶联；而后再封闭，清洗重悬，得到偶联了抗体的荧光纳米微球。
30、本专利技术的部分实施方案中，荧光纳米微球活化步骤包括：将荧光纳米微球置于缓冲液中，再加入edc和nhs，室温震荡0.2-1h；
31、优选地，荧光纳米微球质量为缓冲液质量的0.4-2％，
32、优选地，edc加入后的浓度为0.25～2μg/ml，
33、优选地，nhs加入后的浓度为0.5～4μg/ml。
34、优选地，室温震荡0.2-1h后，离心去除上清，再用缓冲液清液，离心，得到活化荧光纳米微球；
35、和/或活化荧光纳米微球偶联抗体的步骤包括：将活化后的荧光纳米微球置于缓冲液中，再加入检测线对应抗体和质控线对应抗体，检测线对应抗体为抗人igg抗体，质控线对应抗体为dnp-bsa或鸡igy；室温震荡1-3h，完成与抗体的偶联；
36、优选地，抗体加入后的总浓度为0.05-0.2mg/ml，室温震荡1-3h，完成与抗体的偶联，离心，除去上清，得到偶联抗体后的荧光纳米微球；更优选地，检测线对应抗体和质控线对应抗体浓度均为0.025-0.1mg/ml；
37、和/或封闭步骤包括：将偶联抗体后荧光纳米微球加入含0.5–5wt％bsa的封闭液，室温震荡0.5-1.5h，离心，除去上清，得到封闭后本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述免疫层析试剂包括检测卡和样本稀释液；
2.根据权利要求1所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述荧光纳米微球偶联的抗体为两种：其中一种为2,4-二硝基苯酚牛血清白蛋白复合物或鸡IgY，另一种为抗人IgG抗体。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，将蛋白包被液在硝酸纤维素膜上均匀划线包被、烘干，形成所述检测线；
4.根据权利要求1或2所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，将质控包被液在硝酸纤维素膜上划线、烘干，形成所述质控线；
5.根据权利要求3或4所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述样本稀释液为含有偶联了抗体的荧光纳米微球和生物素标记的PR3抗原的缓冲液；
6.根据权利要求5所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述样本稀释液生物素标记的PR3抗原的浓度为0.2-2μg/mL；优选地，生物素和抗原标记使用的质量比例为5～20:1。
8.根据权利要求7所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述偶联了抗体的荧光纳米微球的制备方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，荧光纳米微球活化步骤包括：将荧光纳米微球置于缓冲液中，再加入EDC和NHS，室温震荡0.2-1h；
10.权利要求1-9任意一项所述的免疫层析试剂在制备检测抗蛋白酶3抗体的试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述免疫层析试剂包括检测卡和样本稀释液；
2.根据权利要求1所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述荧光纳米微球偶联的抗体为两种：其中一种为2,4-二硝基苯酚牛血清白蛋白复合物或鸡igy，另一种为抗人igg抗体。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，将蛋白包被液在硝酸纤维素膜上均匀划线包被、烘干，形成所述检测线；
4.根据权利要求1或2所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，将质控包被液在硝酸纤维素膜上划线、烘干，形成所述质控线；
5.根据权利要求3或4所述的一种检测抗蛋白酶3抗体的免疫层析试剂，其特征在于，所述样本稀释液为含有偶联了抗体的荧光纳米微球和生物素标记的pr3抗原的缓冲液；
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【专利技术属性】
技术研发人员：李广权，向章朋，刘萍，罗帅，李思奇，陈娇，吕小琴，
申请(专利权)人：三六三医院，
类型：发明
国别省市：
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