【技术实现步骤摘要】
本申请涉及一种虫草素纯化方法及纯化得到虫草素和其应用，涉及蛹虫草深加工。
技术介绍
1、蛹虫草是我国传统的食用真菌，具有多种活性功效，现已实现人工培育。许多研究者通过优化得到的培养方式彼此存在差异，说明不同来源的菌株可能对培养条件的需求不尽相同，因此在展开后续实验之前，对培养条件的摸索和优化是十分必要的。在蛹虫草中存在多种活性成分，虫草素是具有代表性的成分之一，尤其在抗肿瘤等方面引起人们的重视。探索经济简便适宜的虫草素发酵、提取、纯化方法尤为重要。
2、目前对于虫草素的分离纯化方法，国内外的研究大多集中在树脂吸附法、超临界萃取法、活性炭结合法、液相色谱法、硅胶柱层析法等。其中，活性炭结合法是最早出现的分离纯化方法，活性炭材料简单易得，价格低廉，分离时可以大量进样，但是提取效率相对较低；目前较高效的分离纯化方法主要有大孔吸附树脂法、高效液相色谱法、离子交换树脂法以及硅胶柱层析法，但上述方法在保留有效成分、弃除无效成分方面，仍存在提取不充分，有效成分损失大，工序多周期长等缺点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种虫草素纯化方法，提高虫草素的纯化度，为其大规模发酵应用研究奠定基础。
2、为了实现上述目的，本申请通过以下的技术方案实现：
3、一种虫草酸及其提取方法，包括以下步骤：
4、(s1)取虫草素粗提液，加入无水乙醇，至溶液中乙醇浓度达60％-80％，静置12-18h，离心收集上清液，获得第一上清液，以质量倍数计，将所述第一上清
5、(s2)取所述醇沉液流经第一色谱柱层析，取所述醇沉液流经第一色谱柱层析，上样量为0.5-2.5bv，上样流速为1-3bv/h；对大孔树脂进行洗脱，得到第一洗脱液，洗脱液为3-5bv的浓度为50％-70％乙醇溶液；
6、(s3)将所述第一洗脱液以2-4bv/h速度流经氧化铝硅胶柱，
7、收集余液；
8、(s4)将所述余液流经微球树脂柱后，加入浓度为10％-70％乙醇溶液进行解吸附，得到第二洗脱液；
9、(s5)将所述第二洗脱液流经第二色谱柱，对第二色谱柱进行洗脱，收集虫草素峰面积占比90％以上的洗脱液，收集虫草素峰面积占比90％以上的第三洗脱液，干燥，即得到纯化产物；利用无水乙醇对纯化产物重复洗涤、结晶，得到纯化后的虫草素。
10、具体的，步骤(s1)前，还包括虫草素粗提液的提取，包括以下步骤：
11、(1)将蛹虫草菌株培育子实体于50-60℃下烘干至恒重，并粉碎过75-85目筛；获得蛹虫草菌株培育子实体干物质；
12、(2)对所述蛹虫草菌株培育子实体干物质进行水浴回流提取，离心收集第二上清液，以质量倍数计，将所述第二上清液在50-70℃水浴条件下浓缩至第二上清液的3-3.5倍，得到粗提液。
13、具体的，步骤(1)中，所述水浴回流提取温度50-90℃、提取时间为1-5h、提纯浓度为10-60％、固液比为1:(10-80)、提取次数为1-3次；步骤(2)中，所述离心转速为3000-5000r/min，离心时间为10-20min。
14、具体的，步骤(s2)中，所述第一色谱柱为hpd1000大孔树脂柱、xad-16大孔树脂柱、h103大孔树脂柱、ab-8大孔树脂柱或nka-ii大孔树脂柱中的一种。
15、具体的，步骤(s4)中，所述微球树脂为kb-2微球树脂、nx-9微球树脂或nx-8微球树脂中的一种。
16、具体的，步骤(s5)中，所述第二色谱柱为葡聚糖凝胶g10色谱柱或c18色谱柱。
17、具体的，步骤(s1)、(s4)、(s5)前，还包括预处理步骤，具体为分别将试验用的第一色谱柱、微球树脂与第二色谱柱在无水乙醇中浸泡12-18h，再用去离子水洗涤浸泡。
18、根据本申请的另一个方面，根据上述任一所述的一种虫草素纯化方法制得的虫草素。
19、具体的，所述虫草素的纯度高于81％。
20、本申请还提供了一种虫草素的应用方法，在预防和/或治疗肥胖症、高脂血症、冠心病药物中的应用。
21、本专利技术的有益效果包括但不限于：
22、1、根据本专利技术所提供的一种虫草素纯化方法，建立了体系的从粗提液中分离纯化虫草素的方法，优化工艺步骤，提高虫草素纯度，为扩大虫草素的研究应用奠定了基础。
23、2、根据本专利技术所提供的一种虫草素纯化方法，融入醇沉提取技术，进一步优化了虫草素初步纯化工艺，除去了粗提液中蛋白质、多糖等水溶性杂质，提高了粗提液中虫草素的纯度。
24、3、根据本专利技术所提供的一种虫草素纯化方法，建立大孔树脂联合应用微球树脂进一步纯化虫草素工艺，将虫草素初步纯化产物中的虫草素纯度提升3倍以上，具有优异的纯化效果。
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1.一种虫草素纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(S1)前，还包括虫草素粗提液的提取，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述水浴回流提取温度50-90℃、提取时间为1-5h、提纯浓度为10-60％、固液比为1:(10-80)、提取次数为1-3次；步骤(2)中，所述离心转速为3000-5000r/min，离心时间为10-20min。
4.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(S2)中，所述第一色谱柱为HPD1000大孔树脂柱、XAD-16大孔树脂柱、H103大孔树脂柱、AB-8大孔树脂柱或NKA-II大孔树脂柱中的一种。
5.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(S4)中，所述微球树脂为KB-2微球树脂、NX-9微球树脂或NX-8微球树脂中的一种。
6.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(S5)中，所述第二色谱柱为葡聚糖凝胶G10色谱柱或C18色谱柱。
7.如权利要
8.如权利要求1-7中任一所述的一种虫草素纯化方法制得的虫草素。
9.如权利要求8所述的虫草素，其特征在于，所述虫草素的纯度高于81％。
10.一种权利要求9的虫草素的应用方法，其特征在于，所述虫草素在预防和/或治疗肥胖症、高脂血症、冠心病药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种虫草素纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(s1)前，还包括虫草素粗提液的提取，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述水浴回流提取温度50-90℃、提取时间为1-5h、提纯浓度为10-60％、固液比为1:(10-80)、提取次数为1-3次；步骤(2)中，所述离心转速为3000-5000r/min，离心时间为10-20min。
4.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于，步骤(s2)中，所述第一色谱柱为hpd1000大孔树脂柱、xad-16大孔树脂柱、h103大孔树脂柱、ab-8大孔树脂柱或nka-ii大孔树脂柱中的一种。
5.如权利要求1所述的虫草素纯化方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝捷，柴颖，叶亚军，陈晨，田数，温源，赵赛月，李力群，
申请(专利权)人：内蒙古昆明卷烟有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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