【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽用生物制品领域，具体是涉及一种重组鸡法氏囊病毒vp2基因的表达系统的构建方法。
技术介绍
1、传染性法氏囊病(infectious bursal disease，ibd)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，ibdv)引起的一种急性、高度接触性传染性疾病。传染性法氏囊病主要感染3-6周龄雏鸡，传染性强、潜伏期短，病死率高，严重威胁养殖业的发展。目前对该病的防控主要以疫苗为主，而且鉴于基因工程疫苗研制安全性好、不受母源抗体干扰的优势，传染性法氏囊病病毒基因工程疫苗逐渐成为研究热点。vp2蛋白是ibdv主要结构蛋白，占ibdv蛋白总量的51％，也是该病毒的主要保护性抗原，具有血清型特异性。因此，利用vp2蛋白制备疫苗能够有效预防和控制ibdv。
2、目前已有采用酵母表达系统、原核表达系统、杆状病毒表达系统等来表达vp2蛋白的研究，动物实验证明这些表达的vp2蛋白具有一定的免疫原性，可以作为传染性法氏囊病亚单位疫苗的候选物。但随着鸡传染性法氏囊病毒毒株的不断变异，商品化的ibdv疫苗已不能提供更广谱的防护作用，另一方面，受表达系统的影响，vp2蛋白的表达效果参差不齐，且采用现有的常规表达系统和表达方法，并不能实现vp2蛋白的高效表达，难以实现工业化生产，因此亟需构建一种能够实现高效表达，适合工业化生产的表达系统。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种重组鸡法氏囊病毒vp2基因的表达系统的构建方法。p>
2、本专利技术的目的还在于提供一种重组鸡法氏囊病毒vp2基因的表达系统。
3、重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统，所述表达系统包含重组鸡法氏囊病毒vp2基因、信号肽以及载体组成的表达盒；所述重组鸡法氏囊病毒vp2基因的核苷酸序列如seq idno.1所示。
4、进一步的，所述重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统是由哺乳动物细胞cho构建的。
5、进一步的，所述信号肽为human il-2、human osm、mouse igκ中的任意一种。
6、进一步的，所述载体为pee12.4载体，经hindⅲ、ecorⅰ双酶切后进行连接。
7、进一步的，重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统的构建方法包括：
8、1)将重组鸡法氏囊病毒vp2基因序列n端与信号肽连接；
9、2)pee12.4载体经hindⅲ、ecorⅰ双酶切后，与1)中产物连接；
10、3)将2)的连接产物转化到dh5α中并提取质粒；
11、4)使用cho细胞对3)的质粒进行表达。
12、所述的重组鸡法氏囊病毒vp2基因的表达系统的构建方法在制备鸡法氏囊病毒疫苗中的应用。
13、相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：
14、本专利技术对提取的鸡法氏囊病毒vp2基因组序列进行了改造，将改造后的序列添加了信号肽序列，并构建了重组鸡法氏囊病毒vp2基因的cho表达系统，该系统的表达效果稳定，表达的蛋白含量高，适合规模化的生产，为鸡法氏囊亚单位疫苗的研制奠定了良好基础。
15、本专利技术采用cho哺乳动物细胞表达的蛋白经翻译加工后，其结构与生物学特性更接近于天然蛋白，因此，其制备的疫苗免疫原性更强。
16、本专利技术制备的鸡法氏囊病毒疫苗对不同毒株鸡法氏囊病毒有一定的防护作用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统，其特征在于：所述表达系统包含重组鸡法氏囊病毒VP2基因、信号肽以及载体组成的表达盒；所述重组鸡法氏囊病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统，其特征在于：所述重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统是由哺乳动物细胞CHO构建的。
3.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统，其特征在于，所述信号肽为Human IL-2、Human OSM、Mouse Igκ中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统，其特征在于，所述载体为pEE12.4载体，经HindⅢ、EcoRⅠ双酶切后进行连接。
5.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒VP2基因的表达系统，其特征在于，重组鸡法氏囊病毒VP2基因表达系统的构建方法包括：
6.一种如权利要求5所述的重组鸡法氏囊病毒VP2基因的表达系统的构建方法在制备鸡法氏囊病毒疫苗中的应用。
【技术特征摘要】
1.重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统，其特征在于：所述表达系统包含重组鸡法氏囊病毒vp2基因、信号肽以及载体组成的表达盒；所述重组鸡法氏囊病毒vp2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统，其特征在于：所述重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统是由哺乳动物细胞cho构建的。
3.根据权利要求1所述的重组鸡法氏囊病毒vp2基因表达系统，其特征在于，所述信号肽为human il-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：段进坤，陈静，谷拉强，李彦洁，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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