【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测，具体涉及一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂及其应用。
技术介绍
1、呼吸道病原体包括病毒、支原体、衣原体和细菌等。呼吸道病原体核酸检测的样本类型，一般以鼻/咽拭子样本居多。对于鼻/咽拭子样本的保存，传统的方法多采用磷酸盐、氯化钠等常用成份，其不足之处在于仅能用于保存，样本在(rt-)pcr或lamp或rpa核酸检测之前，仍需要进行核酸提取，耗时长，另外，由于操作步骤繁琐，也增加了样本之间相互污染的可能。因此，研究一种免核酸提取试剂用于鼻/咽拭子样本的检测具有重要意义。
2、公布号为cn111321123a的中国专利申请文献，公开了一种免核酸提取的病毒保存液；公布号为cn111676216a的中国专利申请文献，公开了一种免提取灭活型病毒样本核酸保存液及其制备方法与应用；公布号为cn112725406a的中国专利申请文献，公开了一种免核酸提取的灭活型病毒保存液及其应用；公布号为cn112608978a的中国专利申请文献，公开了一种新型核酸免提取保存液。这些专利都是用于病毒的保存和免提取，但不适用于支原体、衣原体和细菌的保存和免提取；获取的核酸只能用于(rt-)pcr扩增检测，不能用于等温扩增如lamp扩增和rpa扩增。
3、而呼吸道病原体感染不仅有病毒还有支原体、衣原体和细菌。由此可见，在多重呼吸道病原体检测中急需一种高效、快速的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，可用于病毒、支原体、衣原体和细菌等多类病原体的免核酸提取，同时，又能与后续的(rt-)pcr或等温扩增反应相兼容。
1、本专利技术所要解决的技术问题在于如何提供一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂及其应用。
2、本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：
3、本专利技术的第一方面提出一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其组成成份包括tritiontmx-100、氢氧化钠、n-十二烷酰基-n-甲基甘氨酸钠、二硫苏糖醇、海藻糖和水。
4、有益效果：本专利技术通过筛选获得特定的几种组分形成混合液，各的协同配合能够在室温条件下直接完成鼻/咽拭子中的细胞和病原微生物的核酸释放，避免了加热、离心﹑洗涤等繁琐操作，所得产物可以直接用于(rt-)pcr扩增和等温扩增，无需进行后续核酸提取。
5、本专利技术通过氢氧化钠和tritiontmx-100能够高效裂解细胞和病原微生物并提供稳定的ph环境；n-十二烷酰基-n-甲基甘氨酸钠能够使蛋白质解体变性，快速释放出dna或rna；二硫苏糖醇能够还原蛋白质二硫键，使rna酶变性失活，防止rna降解；海藻糖能够在dna和rna表面形成保护层，使核酸在溶液中稳定存在。
6、优选的，所述tritiontmx-100的体积百分比为0.25-1.25％(v/v)。
7、优选的，所述氢氧化钠的质量百分比为0.005-0.05％(g/g)。
8、优选的，所述n-十二烷酰基-n-甲基甘氨酸钠的体积百分比为0.1-1％(v/v)。
9、优选的，所述二硫苏糖醇的终浓度为10-50mm。
10、优选的，所述海藻糖终浓度为10-30mm。
11、本专利技术的第二方面提出上述提取试剂在鼻/咽拭子样本检测中的应用。
12、本专利技术的第三方面提出一种鼻/咽拭子中细胞或/和病原体样本核酸提取的方法，包括以下步骤：
13、将鼻/咽拭子样本与上述提取试剂充分混匀，静置，即获得鼻/咽拭子中的细胞或/和病原体样本核酸。
14、优选的，所述鼻/咽拭子样本包括干鼻/咽拭子样本和含保存液的鼻/咽拭子样本；所述含保存液的鼻/咽拭子样本与鼻/咽拭子免核酸提取试剂的体积比为1：(8～10)。
15、优选的，所述病原体包括病毒、支原体、衣原体和细菌。
16、有益效果：本专利技术的提取方法操作简单，可以高效、快速的获得鼻/咽拭子中的细胞、病毒、支原体、衣原体和细菌的核酸，且所得的样本核酸可以直接用于(rt-)pcr扩增或等温扩增的模板，而无需再进行核酸提取；也可以直接溶解冻干粉(rt-)pcr扩增体系或等温扩增体系混匀后直接扩增检测而不产生抑制。
17、本专利技术的优点在于：
18、1、可以对鼻/咽拭子中的细胞、病毒、支原体、衣原体和细菌进行免核酸提取。
19、2、该免核酸提取试剂无须进行后续核酸提取，可以直接用于(rt-)pcr扩增或等温扩增的模板使用。
20、3、该免核酸提取试剂获得的核酸，不仅可以当做液体(rt-)pcr扩增体系或等温扩增体系的模板使用，也可以直接溶解冻干粉(rt-)pcr扩增体系或冻干粉等温扩增体系混匀后直接扩增检测而不产生抑制。
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1.一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，其组成成份包括TritionTMX-100、氢氧化钠、N-十二烷酰基-N-甲基甘氨酸钠、二硫苏糖醇和海藻糖和水。
2.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述TritionTMX-100的体积百分比为0.25-1.25％。
3.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述氢氧化钠的质量百分比为0.005-0.05％。
4.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述N-十二烷酰基-N-甲基甘氨酸钠的体积百分比为0.1-1％。
5.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述二硫苏糖醇的终浓度为10-50mM。
6.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述海藻糖终浓度为10-30mM。
7.权利要求1-6任一项所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂在鼻/咽拭子样本检测中的应用。
8.一种鼻/咽拭子中细胞或/和病原体样本核酸提取的方法，其特征在于，包括以下步骤：将鼻/
9.根据权利要求8所述的鼻/咽拭子中细胞或/和病原体样本核酸提取的方法，其特征在于，所述鼻/咽拭子样本包括干鼻/咽拭子样本和含保存液的鼻/咽拭子样本；所述含保存液的鼻/咽拭子样本与鼻/咽拭子免核酸提取试剂的体积比为1：(8～10)。
10.根据权利要求8所述的鼻/咽拭子中细胞或/和病原体样本核酸提取的方法，其特征在于，所述病原体包括病毒、支原体、衣原体和细菌。
...【技术特征摘要】
1.一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，其组成成份包括tritiontmx-100、氢氧化钠、n-十二烷酰基-n-甲基甘氨酸钠、二硫苏糖醇和海藻糖和水。
2.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述tritiontmx-100的体积百分比为0.25-1.25％。
3.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述氢氧化钠的质量百分比为0.005-0.05％。
4.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述n-十二烷酰基-n-甲基甘氨酸钠的体积百分比为0.1-1％。
5.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征在于，所述二硫苏糖醇的终浓度为10-50mm。
6.根据权利要求1所述的鼻/咽拭子免核酸提取试剂，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱灵，朱灿灿，崔俊生，刘勇，邓国庆，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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