【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，具体涉及一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、番茄灰霉病由灰葡萄孢菌(botrytis cinerea)引起，会导致番茄的叶片、茎和果实腐烂，从而大幅降低其经济价值，造成了巨大的作物及经济损失。严重时会导致番茄植株过早枯死，甚至中断生产。尽管化学农药能够在一定程度上控制这种病害，但其长期大量使用可能会对环境和人类健康产生负面影响。因此，寻找安全、环保的生物防治方法成为了科研的重要方向，以实现可持续的农业发展。
2、生物防治剂(biocontrol agents,bcas)，如拮抗微生物、植物精油和植物防御剂已被报导可用于治疗番茄灰霉病。其中，生防链霉菌因其高效的生防能力和优越的抗生素生产能力而备受关注。
3、链霉菌(streptomyces spp.)是放线菌中丰度最高的属，是多种生物活性次级代谢物的高效生产者，也是20世纪新抗生素最重要的来源。这些代谢产物具有促生长、抗真菌和抗细菌等活性，因此链霉菌成为生物农药和植物生长促进剂的重要来源。
4、一直以来，大多数关于番茄灰霉病生物防治的研究都集中在生物防治和提高作物抗性上，而关于叶片喷施生防菌对番茄根际土壤微生物群落的结构与功能的影响鲜有报道。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种抗番茄灰霉病，促进番茄生长的生防链霉菌剂lnu-cpars28，在防治番茄病害、促生增产的同时保护生态环境，降低生产成本。
2、本专利技术通过以下技术方案
3、一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂，所述链霉菌为白黄链霉菌streptomycesalboflavus lnu-cpars28，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为cgmccno.30893。
4、上述的一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂的制备方法，包括如下步骤：
5、1)链霉菌菌株活化：将-80℃甘油保存的白黄链霉菌lnu-cpars28在isp 3固体培养基上培养；
6、2)链霉菌种子液制备：将步骤1)所得的链霉菌接种到tsb液体培养基中培养，得到链霉菌种子液；
7、3)链霉菌液体发酵：将步骤2)所得的链霉菌种子液加入到液体发酵培养基中培养，获得链霉菌发酵液；
8、4)生防链霉菌剂制备：将步骤3)所得的链霉菌发酵液离心，取上清液稀释10倍，获得抗番茄灰霉病生防链霉菌剂。
9、进一步的，上述的制备方法，步骤1)中，所述isp 3固体培养基的组成为：燕麦20g/l，kno3 0.2g/l，mgso4 0.2g/l，k2hpo4 0.5g/l，琼脂20g/l；培养温度为28℃，培养时间为7d。
10、进一步的，上述的制备方法，步骤2)中，所述tsb液体培养基的组成为：胰蛋白胨17g·l-1，大豆蛋白胨3g·l-1，nacl 5g·l-1，葡萄糖2.5g·l-1，k2hpo4 2.5g·l-1，ph 7.1～7.5；培养温度为28℃，转速为180rpm，培养时间为3d。
11、进一步的，上述的制备方法，步骤3)中，所述发酵培养基的组成为：黄豆粉30g·l-1，葡萄糖50g·l-1，酵母提取物5g·l-1，caco3 7g·l-1，ph 7；接种量为3％，培养温度为28℃，转速为180rpm，培养时间为6d。
12、上述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在防治番茄灰霉病中的应用。
13、上述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在促生番茄中的应用。
14、上述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在改善番茄根际土壤微生物群落结构与功能中的应用。
15、本专利技术的有益效果为：
16、1、试验以灰葡萄孢菌为靶标菌，筛选出一株能够有效抑制番茄灰霉病的生防链霉菌lnu-cpars28，通过培养特征观察、生理生化鉴定和16s rrna序列分析，鉴定该菌株为白黄链霉菌(streptomyces alboflavus)lnu-cpars28。
17、2、通过对菌株s.alboflavus lnu-cpars28发酵培养基筛选，确定最适发酵培养基组分：黄豆粉30g·l-1，葡萄糖50g·l-1，酵母提取物5g·l-1，caco3 7g·l-1，ph 7。该发酵液抑菌直径可达23.9±0.85mm。
18、3、通过对本专利技术生防链霉菌剂稳定性进行研究，发现本专利技术生防链霉菌剂在121℃高温处理后仍有活性，经7h紫外线或自然光照处理后，活性无显著变化。证明本专利技术生防链霉菌剂稳定性良好，可用于大田生产。
19、4、本专利技术生防链霉菌剂对番茄灰霉病具有良好的防治效果，经本专利技术生防链霉菌剂处理后的番茄幼苗发病率被显著降低。温室中，本专利技术生防链霉菌剂对番茄灰霉病的防治效果达到90.00±0.58％，优于化学农药腐霉利。
20、5、本专利技术生防链霉菌剂对番茄幼苗具有良好促生效果，经本专利技术生防链霉菌剂处理的幼苗茎粗、根长、地上部鲜重、地下部鲜重均有显著增加。
21、6、本专利技术生防链霉菌剂可以改变番茄根际土壤的微生物群落与功能，增加土壤中有益菌丰度，而减少病原菌丰度，并且可显著上调能量代谢相关信号通路，促进番茄生长。
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1.一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂，其特征在于，所述链霉菌为白黄链霉菌Streptomyces alboflavus LNU-CPARS28，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.30893。
2.权利要求1所述的一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述ISP 3固体培养基的组成为：燕麦20g/L，KNO3 0.2g/L，MgSO4 0.2g/L，K2HPO4 0.5g/L，琼脂20g/L；培养温度为28℃，培养时间为7d。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述TSB液体培养基的组成为：胰蛋白胨17g·L-1，大豆蛋白胨3g·L-1，NaCl 5g·L-1，葡萄糖2.5g·L-1，K2HPO4 2.5g·L-1，pH 7.1～7.5；培养温度为28℃，转速为180rpm，培养时间为3d。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述发酵培养基的组成为：黄豆粉30g·L
6.权利要求1所述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在防治番茄灰霉病中的应用。
7.权利要求1所述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在促生番茄中的应用。
8.权利要求1所述的抗番茄灰霉病生防链霉菌剂在改善番茄根际土壤微生物群落结构与功能中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂，其特征在于，所述链霉菌为白黄链霉菌streptomyces alboflavus lnu-cpars28，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为cgmcc no.30893。
2.权利要求1所述的一种抗番茄灰霉病生防链霉菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述isp 3固体培养基的组成为：燕麦20g/l，kno3 0.2g/l，mgso4 0.2g/l，k2hpo4 0.5g/l，琼脂20g/l；培养温度为28℃，培养时间为7d。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述tsb液体培养基的组成为：胰蛋白胨17g·l-1，大豆蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱春玉，孙萌，孟轩伊，王思杨，郑方亮，孙方苑，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：
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