【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然抗肿瘤药物开发，具体涉及一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备及其应用。
技术介绍
1、结直肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，国家癌症中心近期发布的 2022 年中国恶性肿瘤发病情况和死亡情况数据显示，结直肠癌发病数仅次于肺癌，高达 51.7万例，死亡率也高居第四，高达 24 万例，且患者数量呈现逐年上升趋势，形式较为严峻。 结直肠癌５年生存率仅为14%，其普遍认同的治疗方案主要为手术联合化疗与egfr/vegf抑制剂的治疗模式，但此方案对于中晚期患者依然存在较高失败率。近年随着精准治疗概念的提出、分子病理学的发展，不断有新靶点被发现或新药物上市。目前针对高度异质性的结直肠癌，靶向药物和免疫检查点抑制剂成了重要突破口，但迄今为止这些不同组学的分子分型还无法相互对应，尚无临床可实际应用的分型。免疫治疗也是近些年研究热点，抗体单独或联合其他治疗用于晚期癌症取得了良好的疗效，为少部分患者提供了希望。目前免疫治疗仅适用于 dmmr/msi-h、ploe/pold1的结直肠癌病例，而实际能从免疫治疗中获益的病例不超过总体的5%。因此，结直肠癌的治疗药物研究依然是一个非常棘手的问题。与结肠癌的西医疗法相比，中医药传统治疗方法具有安全、有效、不良反应少等优势，且有调查显示一半以上的创新药物来源于天然药物，因此中医药的开发利用有利于减轻患者痛苦，服务于社会。
2、斑种草[ bothriospermum chinense bge.]又名细茎斑种草，紫草科斑种草属植物斑种草的全草，味微苦、
3、另外，江苏省扬州市以及关中等多地区进行麦田杂草危害调查，结果显示均具有斑种草，其本身并无大害且具有一定的药用价值，却被视为杂草危害农田，颠覆了斑种草的药用价值。作为《全国中草药汇编》等典籍收录药材，如今却沦落为杂草行列，有失其用途。如可尽快对斑种草开展研究，明确机理，确定其药效，实现其价值，不仅能够变杂草为宝，减轻农业负担，降低过度使用农药带来的环境污染，还可为现代临床用药提供科学依据，一举多得，意义深远。根据研究小组调查可以判断野生斑种草的数量巨大，在农田除杂过程中也是相当困难的，过度使用除草剂不仅对麦田本身有很大伤害，对于环境污染也是具有很大程度的增加，问题十分严峻。本专利技术涉及内容不但可以解决“杂草问题”，还利于环境保护，且可以带动地方经济发展，为临床提供大量廉价且作用效果显著的中药材。
技术实现思路
1、针对
技术介绍
提出的问题，本专利技术研究设计了一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备及其应用，其目的在于：提供一种提取分离工艺简单，成本低廉，抗结直肠癌活性强，副作用小，开发潜力巨大的抗结直肠癌活性的中药化学成分制备及其应用。
2、一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，包括如下步骤：
3、一、提取：取斑种草的干燥全草，剪段，过筛去掉泥土残渣，按每千克斑种草全草药材加入8-12倍量的溶剂，恒温回流提取2-4次，每次1-2.5h，得溶剂提取液，合并提取液，减压浓缩，得浓缩物；
4、二、萃取：加步骤一所得浓缩物重量3-8倍的蒸馏水混悬，超声振荡器助悬，得混悬液，加入混悬液2-4倍体积的石油醚萃取2-4次，合并石油醚萃取液，所得水层用2-4倍体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取物；
5、三、分离：取乙酸乙酯萃取物用反相ods中压色谱进行分离，以甲醇-水（10%→100%）梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并得到20个流分，流分12经高压制备液相色谱得到化合物，即为本专利技术具有抗结直肠癌活性的中药化学成分。
6、优选地，所述步骤一中剪段后段长为1-3cm，过筛为过1号筛（10目）。
7、优选地，所述步骤一中溶剂为95%乙醇、75%乙醇、甲醇中的一种。
8、优选地，所述步骤一中每千克斑种草全草药材加入提取溶剂10升，恒温回流提取3次，每次回流1.5h。
9、优选地，所述步骤一中的恒温温度为80℃。
10、优选地，所述步骤二中加步骤一所得浓缩物重量5倍的蒸馏水混悬，超声振荡器助悬，得混悬液，加入混悬液2倍体积的石油醚萃取3次，所得水层用2倍体积的乙酸乙酯萃取3次。
11、优选地，所述步骤三中流分12经高压制备液相色谱，制备条件为：选择sunnistpfp&c18柱子，流动相为40%甲醇：60%fa水，流速设置为2ml/min，进样量设置为10μl，收集峰8.93min-9.86min，得化合物，即为本专利技术具有抗结直肠癌活性的中药化学成分。
12、针对上述方法制得的可用于制备抗结直肠癌的中药化学成分的应用，用于开发抗结直肠癌药物。
13、本专利技术的有益效果：本专利技术的斑种草萃取物是以单味干燥的斑种草全草为原料(江苏省宿迁市宿豫区曹集乡田间，经广西中医药研究黄云峰研究员鉴定为为紫草科植物斑种草)，通过回流、提取、浓缩、分离等步骤制备得到，其提取分离工艺简单，成本低廉，波普检测及cck8实验结果显示，从本专利技术的斑种草乙酸乙酯萃取物中分离获得的中药化学成分为rupestrin b，其对结直肠癌sw620细胞增殖具有一定抑制作用，其ic50为0.33μmol·l-1。
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1.一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中剪段后段长为1-3cm，过筛为过1号筛（10目）。
3.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中溶剂为95%乙醇、75%乙醇、甲醇中的一种。
4.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中每千克斑种草全草药材加入提取溶剂10升，恒温回流提取3次，每次回流1.5h。
5.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中的恒温温度为80℃。
6.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤二中加步骤一所得浓缩物重量5倍的蒸馏水混悬，超声振荡器助悬，得混悬液，加入混悬液2倍体积的石油醚萃取3次，所得水层用2倍体积的乙酸乙酯萃取3次。
7.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性
8.一种如权利要求1所述具有抗结直肠癌活性的中药化学成分在用于开发抗结直肠癌药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中剪段后段长为1-3cm，过筛为过1号筛（10目）。
3.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中溶剂为95%乙醇、75%乙醇、甲醇中的一种。
4.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中每千克斑种草全草药材加入提取溶剂10升，恒温回流提取3次，每次回流1.5h。
5.如权利要求1所述一种具有抗结直肠癌活性的中药化学成分的制备方法，其特征在于：所述步骤一中的恒温温度为80℃。
【专利技术属性】
技术研发人员：赵小超，廖承谱，葛竹妹，商勋，万广闻，
申请(专利权)人：浙江大学金华研究院，
类型：发明
国别省市：
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