【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及发酵产物检测方法，尤其是涉及一种淡豆豉发酵产物含量的检测方法。
技术介绍
1、淡豆豉是由大豆的成熟种子经发酵加工而成的制品，其性味苦寒，具有解表，除烦，宣郁，解毒之功效。用于伤寒热病，寒热，头痛，烦躁，胸闷。淡豆豉含有大豆中的12种异黄酮类组分，分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类，其中含量较高的两种苷元成分为染料木素和大豆素，含量较高的两种糖苷类成分为染料木苷和大豆苷。《中华人民共和国药典》2010年版，对淡豆豉规定了形状和显微鉴别，其中有效成分大豆异黄酮的含量并没有具体测定方法。
2、目前，一般采用高效液相色谱法对淡豆豉中的有效成分进行检测。由于淡豆豉发酵产物成分复杂，因此在使用高效液相色谱法对发酵产物中的目标成分进行检测前需要先通过预处理工艺对其进行提取，而现有技术中一般采用醇类溶剂进行提取，例如，专利cn201811423462.9中公开的“基于一测多评法的淡豆豉异黄酮苷元含量检测”，采用80%甲醇对待测样品进行提取。
3、但采用水和醇提取时，对淡豆豉中的有效成分的提取率不高、易受杂峰干扰，影响检测结果的精确性。
技术实现思路
1、本专利技术是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种淡豆豉发酵产物含量的检测方法，采用低共熔溶剂和水的混合溶剂对发酵后的淡豆豉样品进行提取，可以提高对大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷四种主要成分的提取率，结合高效液相色谱法，可实现对淡豆豉发酵产物的高精确度检测。
2、为了实现上述目的，本专利技术
3、一种淡豆豉发酵产物含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
4、s1：用低共熔溶剂和水的混合溶剂对发酵后的淡豆豉样品进行超声提取，离心取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤后，用水定容，得到待测液；所述的低共熔溶剂包括摩尔比为3:1~1.5:0.5~1的氯化胆碱、抗坏血酸和异山梨醇；混合溶剂中低共熔溶剂和水的体积比为7:3~8:2；
5、s2：采用高效液相色谱法对待测液进行检测，得到淡豆豉样品中的大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷的含量。
6、为了提高淡豆豉中有效成分的提取效率，本专利技术采用低共熔溶剂和水的混合溶剂对淡豆豉进行提取。低共熔溶剂的极性、粘度、溶解度等性质与其组分性质息息相关，因此其成分组成会直接影响目标化合物的提取效率。本专利技术根据需提取的淡豆豉中的有效成分的性质，选取氯化胆碱为氢键受体，以抗坏血酸和异山梨醇为氢键供体，制得三元低共熔溶剂，用其对淡豆豉样品进行提取时，对其有效成分的提取能力与醇类溶剂相比有显著提升。但直接使用本专利技术中的三元低共熔溶剂对淡豆豉进行提取时，其粘度较高，传质效果不佳，不利于提取效率的提升，因此本专利技术在低共熔溶剂中加入水，降低其粘度，可使混合溶剂对淡豆豉的有效成分有高的提取效率，结合高效液相色谱法，可实现对淡豆豉发酵产物含量的简便、精确检测。
7、优选地，s1中低共熔溶剂的制备方法为：将氯化胆碱、抗坏血酸和异山梨醇按比例混合，在80~90℃的水浴中磁力搅拌1~2h，得到澄清透明的均质溶液，即为所述低共熔溶剂。
8、优选地，s1中超声提取时淡豆豉样品和混合溶剂的质量体积比为1g:30~40ml，超声提取温度为40~60℃，超声提取时间30~60min。
9、优选地，s1中超声提取时的超声功率为1000~2000w，频率40~60khz。
10、优选地，s1中离心时的转速为3000~5000rpm，离心时间10~20min。
11、优选地，s2中高效液相色谱法测试时采用梯度洗脱，梯度洗过时使用的流动相a为乙腈，流动相b为1wt%甲酸溶液，洗脱梯度如下：
12、0~10min，10~25%体积分数的流动相a，75~90%体积分数的流动相b；
13、10~30min，25~60%体积分数的流动相a，40~75%体积分数的流动相b；
14、30~50min，60~75%体积分数的流动相a，25~40%体积分数的流动相b。
15、优选地，s2中高效液相色谱法使用的色谱柱为c18柱，柱温30~50℃。
16、优选地，s2中高效液相色谱法的检测波长为254nm。
17、优选地，s2中高效液相色谱法的流速为0.8~1.0ml/min。
18、优选地，s2中高效液相色谱法的进样量为10~30μl。
19、因此，本专利技术具有如下有益效果：
20、（1）以氯化胆碱为氢键受体，抗坏血酸和异山梨醇为氢键供体，制得三元低共熔溶剂；
21、（2）用三元低共熔溶剂和水的混合溶剂对发酵后的淡豆豉样品进行提取，结合高效液相色谱法，可实现对大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷四种主要成分含量的同时及高精确度检测。
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1.一种淡豆豉发酵产物含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S1中低共熔溶剂的制备方法为：将氯化胆碱、抗坏血酸和异山梨醇按比例混合，在80～90℃的水浴中磁力搅拌1～2h，得到澄清透明的均质溶液，即为所述低共熔溶剂。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S1中超声提取时淡豆豉样品和混合溶剂的质量体积比为1g:30～40mL，超声提取温度为40～60℃，超声提取时间30～60min。
4.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于，S1中超声提取时的超声功率为1000～2000W，频率40～60kHz。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S1中离心时的转速为3000～5000rpm，离心时间10～20min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱法测试时采用梯度洗脱，梯度洗过时使用的流动相A为乙腈，流动相B为1wt％甲酸溶液，洗脱梯度如下：
7.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱
8.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱法的检测波长为254nm。
9.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱法的流速为0.8～1.0mL/min。
10.根据权利要求1或6所述的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱法的进样量为10～30μL。
...【技术特征摘要】
1.一种淡豆豉发酵产物含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，s1中低共熔溶剂的制备方法为：将氯化胆碱、抗坏血酸和异山梨醇按比例混合，在80～90℃的水浴中磁力搅拌1～2h，得到澄清透明的均质溶液，即为所述低共熔溶剂。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，s1中超声提取时淡豆豉样品和混合溶剂的质量体积比为1g:30～40ml，超声提取温度为40～60℃，超声提取时间30～60min。
4.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于，s1中超声提取时的超声功率为1000～2000w，频率40～60khz。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，s1中离心时的转速为30...
【专利技术属性】
技术研发人员：倪善林，文波，陈沚望，包鹏，周李杭，
申请(专利权)人：桐君谷生物医药科技浙江有限公司，
类型：发明
国别省市：
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