【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物分子标记检测，尤其涉及一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的分子标记引物、试剂盒和应用。
技术介绍
1、大口黑鲈（ micropterus salmoides） ，俗称加州鲈鱼、黑鲈，隶属鲈形目（ perciformes）、鲈亚目（ porcoidei）、太阳鱼科（ cehtrachidae）、黑鲈属（ micropterus）,原产于北美洲，是一种世界性的游钓鱼类。经过多年的养殖发展，已成为国内重要的淡水养殖品种之一。2023年，我国大口黑鲈的年产量为88.80万吨，其中广东省是大口黑鲈的主要养殖地,年产量占国内总产量的40%以上。目前，市场上仅有“优鲈1号”和“优鲈3号”优良品种，现有品种无法充分满足市场需求，因此迫切需要进行种质创新。
2、随着全球气候变化，极端高温事件的发生频率日益增加，培育耐高温的大口黑鲈新品种变得尤为重要。大口黑鲈的适宜生长温度为25-28℃。然而，在养殖过程中发现，大口黑鲈对高温具有较高的应激性，夏季持续高温会影响其生理生化指标，导致摄食变差、生长缓慢、病害频发、死亡率较高，进而造成严重的经济损失。因此，培育耐高温的大口黑鲈优良品种势在必行。
3、传统的大口黑鲈耐高温选育方法，如中国专利技术专利申请（公开号：cn115553233a，公开日：2023-01-03）公开了一种耐高温大口黑鲈的选育方法，包括大
技术实现思路
1、为了解决上述的技术问题，本专利技术的目的是提供一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的分子标记引物，采用分子标记引物pcr扩增可准确区分耐高温和不耐高温的大口黑鲈个体，该方法更快速、准确、成本更低，能够在早期阶段快速鉴定和筛选出具有耐高温性能的大口黑鲈个体，提高选育效率，加速耐高温大口黑鲈的培育进程。
2、为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：
3、一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的分子标记引物，该分子标记由正向引物和反向引物构成，正向引物p1-f序列为ctacacaccagtaaagaggcagg，反向引物p1-r序列为cttctgtatccattggcttctgc。
4、进一步，本专利技术还公开了所述的分子标记在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈dna采用分子标记引物pcr扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
5、进一步，本专利技术还公开了一种包含所述的分子标记引物的试剂盒。
6、进一步，本专利技术还公开了所述的试剂盒在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈dna采用分子标记引物pcr扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
7、进一步，本专利技术还公开了一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的方法，该方法包括以下的步骤：
8、1）提取大口黑鲈dna；
9、2）利用所述的分子标记引物对大口黑鲈dna进行pcr扩增，pcr扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
10、优选，所述pcr扩增中pcr反应体系为：2×taq pcr mix 10μl；depc h2o 8μl；dna模板 1μl；正向引物和反向引物 0 .5μl/0 .5μl。
11、优选，所述pcr扩增反应程序为：94℃ 5 min；94℃ 30 s；58℃ 30 s；72℃ 30 s；35个循环；72℃延伸10 min。
12、本专利技术由于采用了上述的技术方案，分子标记引物及其应用实现了对大口黑鲈耐高温性能的快速、准确鉴定，显著提高了选育效率，降低了成本，为耐高温大口黑鲈的选育提供了有力的技术支持。具体体现在以下的效果：
13、1、快速鉴定：通过本专利技术的分子标记引物，可在短时间内对大口黑鲈的耐高温性能进行准确鉴定。相比传统选育方法需要经过多代繁殖筛选的过程，该方法可以大幅缩短鉴定时间，实现对个体耐高温性能的快速判断。
14、2、高精确性：该分子标记引物针对与大口黑鲈耐高温性能相关的特异性基因位点，利用pcr扩增技术和琼脂糖凝胶电泳检测，实现了对耐高温个体与不耐高温个体的精确区分。扩增产物中具有244bp产物的为耐高温个体，具有288bp产物的为不耐高温个体。这一高精确性可以显著提高耐高温品种选育的成功率。
15、3、提高选育效率：通过本专利技术的方法，可以在早期阶段快速筛选出具有耐高温性能的个体，极大地提高了选育效率，减少了选育过程中所需的时间和资源投入。与传统的多代群体选育相比，该方法显著提高了选育效率，为大规模选育耐高温大口黑鲈群体提供了有效手段。
16、4、降低成本：采用分子标记技术进行耐高温性能鉴定，无需进行大规模基因测序和多代繁殖，降低了选育过程中的人力、物力和财力成本。简化的实验流程和低成本的试剂消耗，使得该方法具有良好的经济性和可操作性。
17、5、有利于耐高温品种的构建：通过对耐高温大口黑鲈个体的快速鉴定，本专利技术有助于建立耐高温群体，为后续培育具有更强耐高温性能的大口黑鲈新品种提供了基础。
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1.一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的分子标记引物，该分子标记引物由正向引物和反向引物构成，其特征在于，正向引物P1-F序列为CTACACACCAGTAAAGAGGCAGG，反向引物P1-R序列为CTTCTGTATCCATTGGCTTCTGC。
2.权利要求1所述的分子标记引物在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈DNA采用分子标记引物PCR扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
3.一种包含权利要求1所述的分子标记引物的试剂盒。
4.权利要求3所述的试剂盒在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈DNA采用分子标记引物PCR扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
5.一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增中PCR反应体系为：2×Taq PCRmix
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为：94℃ 5 min；94℃30 s；58℃ 30 s；72℃ 30 s；35个循环；72℃延伸10 min。
...【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定大口黑鲈耐高温个体的分子标记引物，该分子标记引物由正向引物和反向引物构成，其特征在于，正向引物p1-f序列为ctacacaccagtaaagaggcagg，反向引物p1-r序列为cttctgtatccattggcttctgc。
2.权利要求1所述的分子标记引物在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈dna采用分子标记引物pcr扩增完成后采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增产物中具有244bp扩增产物的为耐高温个体，具有288bp扩增产物的为不耐高温个体。
3.一种包含权利要求1所述的分子标记引物的试剂盒。
4.权利要求3所述的试剂盒在快速鉴定大口黑鲈耐高温个体中的应用，大口黑鲈dna...
【专利技术属性】
技术研发人员：关文志，简杰亮，许晓军，牛宝龙，楼宝，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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