【技术实现步骤摘要】
本申请总体涉及混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物、包含所述组合物的疫苗以及用于在受试者中使用这些组合物和疫苗用于预防肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)感染或疾病的方法。
技术介绍
1、肺炎球菌(肺炎链球菌)是具有超过90种已知血清型的革兰氏阳性、柳叶刀形、兼性厌氧性细菌。大多数肺炎链球菌血清型已经显示出会造成疾病，其中23种最常见的血清型在世界各地导致大约90％的侵入性疾病。血清型是根据荚膜多糖(肺炎球菌最重要的毒力因子)的血清学反应进行分类。荚膜多糖是t细胞非依赖性抗原，其在不存在t辅助细胞的情况下诱导抗体产生。t细胞非依赖性抗原通常诱导低亲和力抗体和短期免疫反应以及很少甚至于没有免疫记忆。
2、初始肺炎球菌疫苗包括来自不同血清型的荚膜多糖的组合。这些疫苗可赋予具有发达或健康的免疫系统的患者对抗肺炎链球菌的免疫力，然而，它们在缺乏发达的免疫系统的婴儿和通常免疫功能减弱的老年受试者中没有效果。为了改善肺炎球菌疫苗的免疫反应，特别是在处于发展肺炎链球菌感染较高风险下的婴儿和老年受试者中，使荚膜多糖与合适的载体蛋白缀合以产生肺炎球菌缀合物疫苗。与合适的载体蛋白缀合使荚膜多糖由t细胞非依赖性抗原改变成t细胞依赖性抗原。确切而言，对抗缀合的荚膜多糖的免疫反应涉及t辅助细胞，所述t辅助细胞在再暴露于荚膜多糖时协助诱导更有力且快速的免疫反应。
3、存在至少两种开发肺炎球菌缀合物疫苗的方法：单一载体方法和混合载体方法。不同的荚膜多糖缀合物的免疫原性可取决于所用的肺炎球菌血清型和载体蛋白而变化。
4、第二种肺炎球菌疫苗方法是混合载体方法。在混合载体方法中，使用两种或更多种蛋白质载体，而非使用单一蛋白质载体，其中来自特定血清型的荚膜多糖与第一蛋白质载体缀合并且来自不同血清型的荚膜多糖与至少第二、不同的蛋白质载体缀合。例如，葛兰素史克(glaxosmithkline)已经开发出双伏威(synflorix)，一种10价(血清型1、4、5、6b、7f、9v、14、18c、19f和23f)、混合载体、肺炎球菌缀合物疫苗，其使用流感嗜血杆菌蛋白d、破伤风类毒素和白喉类毒素作为蛋白质载体。在双伏威中，血清型1、4、5、6b、7f、9v、14和23f与蛋白d缀合；血清型18c与破伤风类毒素缀合；并且血清型19f与白喉类毒素缀合[2]。由11价前体部分地去除血清型3成为双伏威，因为所述血清型3在急性中耳炎试验中没有显示出血清型特异性功效[1]。另一集团，安万特巴斯德(aventis pasteur)，开发了一种使用白喉类毒素和破伤风类毒素作为蛋白质载体的11价(血清型1、3、4、5、6b、7f、9v、14、18c、19f和23f)、混合载体、肺炎球菌缀合物疫苗[3]。来自血清型3、9v、14和18c的荚膜多糖在与白喉类毒素缀合时可引起比其与破伤风类毒素缀合时引起的反应更佳的反应[6]。因此，血清型3、6b、14和18c与白喉类毒素缀合并且血清型1、4、5、7f、9v、19f和23f与破伤风类毒素缀合。此混合载体、肺炎球菌疫苗的开发被终止，部分是由于技术因素以及与非细胞性百日咳疫苗一起施用时反应潜力的降低[3]。近来，血清型5和1被报道为具有从所有prevnar 13血清型观察到的最低opa效价中的一个，其中在igg效价与opa活性之间存在关联的相关性[4]。还有人建议对于血清型3，保护作用将需要高得多的血清igg浓度[5]。
技术实现思路
1、本申请提供了新且改进的混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物以及包含所述组合物的疫苗。在一个方面，混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物包含21种不同的肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质缀合物，其中各肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质缀合物包含与来自不同肺炎链球菌血清型的荚膜多糖缀合的蛋白质载体，其中肺炎链球菌血清型选自1、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、18c、19a、19f、22f、23f和33f，其中蛋白质载体是crm197或破伤风类毒素，其中荚膜多糖中的四种与破伤风类毒素缀合并且其余荚膜多糖与crm197缀合，并且其中与破伤风类毒素缀合的四种荚膜多糖中的两种选自由血清型1、3和5组成的组，并且其余两种荚膜多糖是血清型15b和22f。
2、在混合载体、21价肺炎球菌缀合物组合物的一个实施方案中，来自血清型1、5、15b和22f的荚膜多糖与破伤风类毒素缀合，并且来自血清型3、4、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的荚膜多糖与crm197缀合。
3、在混合载体、21价肺炎球菌缀合物组合物的另一个实施方案中，来自血清型1、3、15b和22f的荚膜多糖与破伤风类毒素缀合，并且来自血清型4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的荚膜多糖与crm197缀合。
4、在混合载体、21价肺炎球菌缀合物组合物的另一个实施方案中，来自血清型3、5、15b和22f的荚膜多糖与破伤风类毒素缀合，并且来自血清型1、4、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的荚膜多糖与crm197缀合。
5、在另一方面，本申请提供了一种混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物，其包含21种不同的肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质缀合物，其中各肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质缀合物包含与来自不同肺炎链球菌血清型的荚膜多糖缀合的蛋白质载体，其中肺炎链球菌血清型选自1、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、18c、19a、19f、22f、23f和33f，其中蛋白质载体是crm197或破伤风类毒素，其中荚膜多糖中的三种与破伤风类毒素缀合并且其余荚膜多糖与crm197缀合，并且其中与破伤风类毒素缀合的三种荚膜多糖选自由血清型1、3、5、15b和22f组成的组。在某些实施方案中，与破伤风类毒素缀合的三种荚膜多糖中的两种选自由血清型1、3和5组成的组，并且与破伤风类毒素缀合的其余荚膜多糖是血清型15b或22f。
6、在一些实施方案中，混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物还包含佐剂，诸如铝基(aluminum-bas本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种免疫原性血清型9N缀合物，其包含与来自肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖缀合的蛋白质载体，其中所述蛋白质载体是CRM197，并且其中血清型9N荚膜多糖与CRM197缀合，所述血清型9N荚膜多糖的状态是被活化具有2-19或5-10的氧化程度以及200-700kDa的分子量。
2.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9N缀合物，其分子量为500-4000kDa。
3.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中所述免疫源性血清型9N缀合物中所述血清型9N荚膜多糖与CRM197的比例为0.1-5(w/w)。
4.根据权利要求3所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中所述免疫源性血清型9N缀合物中所述血清型9N荚膜多糖与CRM197的比例为0.5-2.5(w/w)。
5.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中15-60％的所述免疫源性血清型9N缀合物在CL-4B柱中测量的Kd为0.3或更低。
6.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中所述免疫原性血清学型9N缀合物用被活化具有2-19氧化程度的血清型9N
7.根据权利要求6所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中所述氧化程度为5-10。
8.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9N缀合物，其中，通过每1μg糖添加0.02-0.19μg过碘酸盐，将所述血清型9N荚膜多糖与CRM197缀合，并且其中，所述免疫原性的血清型9N缀合物的分子量为500-4000kDa，分子量分布为15-60％，在CL-4B柱中测量的Kd为0.3或更低，糖/蛋白比为0.5-2.5。
9.一种混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的免疫原性血清型9N缀合物。
10.根据权利要求9所述的混合载体、多价肺炎球菌结合物组合物，还包含佐剂。
11.一种制备肺炎链球菌血清型9N的免疫原性缀合物的方法，所述方法包括：
12.根据权利要求11所述的方法，其中在步骤(d)中混合的CRM197与还原剂反应，以与活化的肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖形成缀合物。
13.根据权利要求11所述的方法，其中在步骤(c)中，将0.02-0.19μg过碘酸盐与1μg肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖在20-25℃下反应15-20小时。
14.根据权利要求11所述的方法，其中在步骤(c)中与氧化剂反应的肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖的分子量为400-900kDa。
15.根据权利要求11所述的方法，其中在步骤(d)中与CRM197混合的活化的肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖的分子量为200-700kDa。
16.根据权利要求11所述的方法，其中步骤(d)中形成的免疫原性血清型9N缀合物的分子量为500-4000kDa。
17.根据权利要求11所述的方法，其中CRM197与活化的血清型9N荚膜多糖的初始投入比率为0.5-2.5:1。
18.根据权利要求11所述的方法，其中至少15-60％的免疫原性血清型9N缀合物在CL-4B柱中测量的Kd为0.3或更低。
19.根据权利要求11-18中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中，0.02-0.19μg的过碘酸盐与1μg的肺炎链球菌血清型9N荚膜多糖反应，并且其中步骤(d)中形成的免疫原性血清型9N缀合物的分子量为500-4000kDa，分子量分布为15-60％，在CL-4B柱中测量的Kd为0.3或更低，CRM197/多糖比为0.5-2.5。
20.根据权利要求11-18中任一项所述的方法，其中所述氧化程度为5-10。
...【技术特征摘要】
1.一种免疫原性血清型9n缀合物，其包含与来自肺炎链球菌血清型9n荚膜多糖缀合的蛋白质载体，其中所述蛋白质载体是crm197，并且其中血清型9n荚膜多糖与crm197缀合，所述血清型9n荚膜多糖的状态是被活化具有2-19或5-10的氧化程度以及200-700kda的分子量。
2.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9n缀合物，其分子量为500-4000kda。
3.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中所述免疫源性血清型9n缀合物中所述血清型9n荚膜多糖与crm197的比例为0.1-5(w/w)。
4.根据权利要求3所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中所述免疫源性血清型9n缀合物中所述血清型9n荚膜多糖与crm197的比例为0.5-2.5(w/w)。
5.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中15-60％的所述免疫源性血清型9n缀合物在cl-4b柱中测量的kd为0.3或更低。
6.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中所述免疫原性血清学型9n缀合物用被活化具有2-19氧化程度的血清型9n多糖制备。
7.根据权利要求6所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中所述氧化程度为5-10。
8.根据权利要求1所述的免疫原性血清型9n缀合物，其中，通过每1μg糖添加0.02-0.19μg过碘酸盐，将所述血清型9n荚膜多糖与crm197缀合，并且其中，所述免疫原性的血清型9n缀合物的分子量为500-4000kda，分子量分布为15-60％，在cl-4b柱中测量的kd为0.3或更低，糖/蛋白比为0.5-2.5。
9.一种混合载体、多价肺炎球菌缀合物组合物，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的免疫原性血清型9n缀合物。
10.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：安京军，韩东苏，金洪，金宋宪，申金焕，罗伯特·霍普弗，理查德·D·肯辛格，莫·基乌，菲利普·塔拉加，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德有限公司，
类型：发明
国别省市：
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