【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及茶树生长，尤其涉及一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法。
技术介绍
1、当前，茶园化肥过量施用问题较为突出。为解决化肥与农药超量施用带来成本增加与环境负荷，国家提出“化肥与农药双减”举措。在减肥替代中有机增施有机肥与使用微生物肥料是主要方式。但在实际生产中增施有机肥导致生产成本明显增加，而在茶园施肥中微生物菌肥应用较少，各个茶区缺少专用微生物肥料。又进一步限制了茶园减肥的实际效果。
2、茶园土壤因长期施肥与茶树根际分泌物影响多呈偏酸性。这一茶园土壤特性或限制了常规微生物肥料在茶园中的应用效果。因此，开展茶树根际微生物组中促生菌的筛选，寻找具有实际应用潜力的促生微生物资源意义重大。来源于茶树根系内外的微生物经与宿主茶树的长期互作过程中的演化与生态选择，已与宿主茶树形成了稳定的互惠共生关系。这一显著优势与其本自分离于宿主体内或根际，与宿主具有高度亲和性、互惠性紧密相关。故与其他非茶树根际微生物组的促生菌比较，因其具备更高的浸染、定殖宿主植物的能力，若将其制备成微生物肥料，将更易于与宿主植物在人为外界添加条件下形成稳定性更强的“近自然型的互惠共生系统”。因此，我们提出一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对
技术介绍
中存在化肥与农药超量施用带来成本增加与环境负荷的问题，提出一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法的主题。
2、本专利技术的技术方案：一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，
3、茶树根内生细菌分离与筛选：采集茶树根系，冲洗干净并吸干水分，进行表面消毒处理，研磨根系并涂布于lb培养基，同时涂布最后一次洗涤液作对照，最后在30℃温度下培养，挑取不同单菌落纯化后4℃保藏于lb斜面；
4、内生细菌促生功能鉴定：将分离的细菌转接培养在特定培养基上，挑出有透明圈和不同形态菌落纯化保存，测定水解圈和菌落直径，进行固氮、解磷、解钾、生长素的测定及种子萌芽法测定促生功能；
5、促生菌与宿主茶树互作共生体建立与促生效果评价：设置5种处理类型，设空白对照组，制备液态lb培养基培养液态种子，活化菌株并制备浇灌菌液，然后进行盆栽种植，每盆5kg土种2株茶树，选存活旺盛苗用于后续试验，处理组每隔7天灌菌液50ml，对照组施50ml lb培养基，常规管理90天后测定茶树生长性状；
6、茶园大田应用促生效果：选5年生茶园，用根内生混合菌制成的菌剂浇灌茶树，设无菌培养液对照，处理周期1年，1年后测定茶树经济及表型性状。
7、可选的，所述表面消毒处理为依次进行75％乙醇1min、2.5％次氯酸钠3min、75％乙醇30s三步表面消毒处理。
8、可选的，所述解磷的测定为将细菌分别接种nbrip培养基和蒙金娜有机磷培养基上后，通过观察是否有溶磷圈的形成来确定其是否具有溶解无机磷或有机磷的能力，进一步通过钼锑抗比色法定量测定细菌溶解无机磷或有机磷的能力，同时测定菌液的ph值。
9、可选的，所述解钾的测定为解钾能力使用添加钾长石粉作为唯一钾源的硅酸盐培养基进行检测，将细菌分别接种于硅酸盐培养基上，于30℃培养10天观察，能够生长的菌株具有解钾潜力。
10、可选的，所述生长素测定为产生长素能力测定，参照glickmann的方法进行，包括：细菌在特定液体培养基中生长培养一段时间，取培养液2ml，12000×g离心15min，每1ml上清液加2ml salkowski试剂，室温暗处显色30min后，于530nm处测光密度值，以空白培养基作对照，并以纯生长素对应的光密度作标准曲线，计算生长素产出量。
11、可选的，所述细菌为固氮菌，培养时间为72h。
12、可选的，所述细菌为假单胞菌或芽孢杆菌，培养时间为48h。
13、可选的，所述测定促生功能采用种子萌芽法进一步验证鉴定上述具有促生功能菌株，以清水处理为对照ck计算发芽率，并将每种促生能力最佳的内生细菌作为盆栽互作目标菌株。
14、可选的，所述盆栽种植时每盆装土5kg，并留取原始土样测定基本理化性质，应定期浇水，浇水量一致，盆栽应搭建遮雨棚，消除雨水外界因素干扰。
15、可选的，所述制备浇灌菌液时供试菌株分别活化后，接种于lb液体培养基中摇床振荡培养24h，用无菌水调节od600＝1.0的菌悬液，按试验设计，等体积混合不同菌株菌悬液以制备复合菌系备用。
16、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益的技术效果：
17、本专利技术有助于减少化肥的使用量，降低成本，减轻环境负荷，能够显著减少劳动力成本，提高农业生产效率。筛选出的内生细菌菌株与茶树具有高度亲和性和互惠性，更易于在人为添加条件下与茶树形成稳定的共生关系，从而更好地发挥促生作用。
18、通过对茶树根内生细菌的分离、功能鉴定以及与茶树的互作研究，为茶园的可持续发展提供了科学依据和技术支持。
19、盆栽和大田试验表明该方法能有效促进茶树生长，提高茶树的生物量、树高、树幅、百芽重等经济及表型性状，提高茶叶产量和质量。为解决茶园土壤偏酸性对常规微生物肥料应用效果的限制提供了新的途径和解决方案。
20、本专利技术从茶园土壤和茶树体内分离筛选出具有促生功能微生物菌株，将其制成混合菌剂回接茶树，展现出优异的促进生物量合成的功能与潜力。该技术的应用将有效降低化肥施用量，并显著减少劳动力成本。
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1.一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述表面消毒处理为依次进行75％乙醇1min、2.5％次氯酸钠3min、75％乙醇30s三步表面消毒处理。
3.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述解磷的测定为将细菌分别接种NBRIP培养基和蒙金娜有机磷培养基上后，通过观察是否有溶磷圈的形成来确定其是否具有溶解无机磷或有机磷的能力，进一步通过钼锑抗比色法定量测定细菌溶解无机磷或有机磷的能力，同时测定菌液的pH值。
4.根据权利要求3所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述解钾的测定为解钾能力使用添加钾长石粉作为唯一钾源的硅酸盐培养基进行检测，将细菌分别接种于硅酸盐培养基上，于30℃培养10天观察，能够生长的菌株具有解钾潜力。
5.根据权利要求4所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述生长素测定为产生长素能力测定，参照Glic
6.根据权利要求5所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述细菌为固氮菌，培养时间为72h。
7.根据权利要求5所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述细菌为假单胞菌或芽孢杆菌，培养时间为48h。
8.根据权利要求5所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述测定促生功能采用种子萌芽法进一步验证鉴定上述具有促生功能菌株，以清水处理为对照CK计算发芽率，并将每种促生能力最佳的内生细菌作为盆栽互作目标菌株。
9.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述盆栽种植时每盆装土5kg，并留取原始土样测定基本理化性质，应定期浇水，浇水量一致，盆栽应搭建遮雨棚，消除雨水外界因素干扰。
10.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述制备浇灌菌液时供试菌株分别活化后，接种于LB液体培养基中摇床振荡培养24h，用无菌水调节0D600＝1.0的菌悬液，按试验设计，等体积混合不同菌株菌悬液以制备复合菌系备用。
...【技术特征摘要】
1.一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述表面消毒处理为依次进行75％乙醇1min、2.5％次氯酸钠3min、75％乙醇30s三步表面消毒处理。
3.根据权利要求1所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述解磷的测定为将细菌分别接种nbrip培养基和蒙金娜有机磷培养基上后，通过观察是否有溶磷圈的形成来确定其是否具有溶解无机磷或有机磷的能力，进一步通过钼锑抗比色法定量测定细菌溶解无机磷或有机磷的能力，同时测定菌液的ph值。
4.根据权利要求3所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述解钾的测定为解钾能力使用添加钾长石粉作为唯一钾源的硅酸盐培养基进行检测，将细菌分别接种于硅酸盐培养基上，于30℃培养10天观察，能够生长的菌株具有解钾潜力。
5.根据权利要求4所述的一种茶树内生细菌分离及促进宿主茶树生长的方法，其特征在于，所述生长素测定为产生长素能力测定，参照glickmann的方法进行，包括：细菌在特定液体培养基中生长培养一段时间，取培养液2ml，12000×g离心15min，每1ml上清液加2mlsalkowski试...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱留刚，张文锦，孙君，
申请(专利权)人：福建省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：
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