【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种brd4/plk1双靶标小分子荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、brd4是溴代和末端外(bet)蛋白家族的成员，是一种转录和表观遗传调控因子，在胚胎发生和癌症发展过程中发挥着关键作用。因其在超级增强子(se)组织和癌基因表达调控中的作用而在癌症中得到广泛认可。brd4的抑制缩短了se和靶启动子之间的通信，随后对癌症细胞成瘾的癌基因进行细胞特异性抑制并导致细胞死亡。plk1是polo-likekinases(plks)家族的成员，该家族由五个同源物组成：plk1、plk2、plk3、plk4和plk5。它是一种保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，是有丝分裂进程的重要调节因子，对基因组稳定性的维持至关重要。plk1的过度表达是许多类型人类癌症的标志，包括黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌和神经胶质瘤，它与化疗耐药性和不良患者预后有关。
3、靶向选择性抑制剂在体外可能发挥良好作用，但补偿信号通路的上调往往会损害其在细胞中的功效。合理设计的多药疗法，即通过单一的合成剂来识别几个关键的生物靶点，有望提供在细胞中更有效的药物，并克服与多药方案相关的缺点。即靶向参与肿瘤发生的不同家族的多个蛋白靶点。polo-like kinase 1(plk1)和溴结构域4(brd4)它们都共同靶向myc途径。它们还复杂地参与
4、同时抑制多种癌症驱动激酶是提高靶向治疗临床反应持久性的既定策略。然而，发现具有适当多靶点特征的激酶抑制剂的困难使得联合疗法的应用成为必要。溴结构域家族的表观遗传阅读结构域最近成为癌症治疗的新靶点。此外，构效关系和共晶结构确定了设计特征，为合理设计双激酶溴结构域抑制剂提供了通用平台。这种“双靶向单药”方法原则上可以提供与联合疗法相同的益处(例如，更大的治疗窗口、更持久的反应)，同时也可以最大限度地减少联合方法的一些责任，包括复杂漫长的临床研究、协同非机制毒性和药物-药物相互作用的潜力，以及高的处理成本。
5、小分子荧光探针具有快速、灵敏、高通量和易于自动化等特点在蛋白标记与成像技术中有着重要的作用，目前小分子荧光探针已经广泛应用于蛋白质、核酸等重要生物分子的生物学和药理学检测中，对疾病机制探讨、临床诊断及药物筛选等领域的发展具有重要的意义。
6、专利技术人发现基于设计和合成方法的缺乏，目前还没有用于研究brd4/plk1双靶点间相互作用的小分子荧光探针。鉴于此，为了更深入了解brd4/plk1双靶点的双重抑制及发现更有效的抑制剂，亟待研发一种可以结合brd4/plk1双靶标的小分子荧光探针。
技术实现思路
1、针对现有技术的需求，本专利技术目的是提供一种brd4/plk1双靶标小分子荧光探针及其制备方法，所述荧光探针具有显著的光学活性和生物活性，适用于对生理、病理及相关疾病的研究。
2、具体的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供一种brd4/plk1双靶标小分子荧光探针或其立体异构体、药学上可接受的盐，所述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针具有式i或式ii所示结构：
4、
5、n＝1～3，n可以为1、2或3；
6、其中，r选自如下结构：
7、
8、优选的，所述药学上可接受的盐，旨在改善化学物理化性质所进行基团修饰后的衍生物，通常包括与无机盐如盐酸、硫酸、硝酸或氢溴酸等所形成的盐，以及与有机酸，例如甲磺酸、甲苯磺酸、柠檬酸或三氟乙酸等所形成的盐。
9、本专利技术的第二方面，提供一种上述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
10、s1、将式iii所示化合物与式iv所示化合物发生酰胺化反应，即得式i所示化合物；
11、
12、s2、将式v所示化合物与式vi所示化合物发生酰胺化反应，即得式ii所示化合物；
13、
14、优选的，步骤s1中，所述式iii所示化合物的制备方法为：将(r)-2-氯-8-环戊基-7-乙基-5-甲基-7,8-二氢蝶呤-6(5h)-酮与4-氨基-3-甲氧基苯甲酸反应即得。
15、优选的，步骤s1中，所述式iv所示化合物的制备方法为：将丹酰氯与n-叔丁氧羰基-1,3丙二胺反应得到化合物6，化合物6经过脱保护反应得到式iv所示化合物；
16、
17、优选的，步骤s2中，所述式v所示化合物的制备方法为：将式iii所示化合物与4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯经过酰胺缩合反应得到化合物8，化合物8经过氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱boc保护基得中间体9，中间体9与4-(叔丁氧羰基)氨基丁酸经酰胺缩合反应得到化合物10，化合物10经过脱保护反应得到式v所示化合物；
18、
19、n＝1～3，n可以为1、2或3。
20、本专利技术的第三方面，提供第一方面所述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针在制备识别brd4的试剂或试剂盒中的应用。
21、本专利技术的第四方面，提供了第一方面所述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针在其高表达的肿瘤细胞或组织的标记物中的应用。
22、本专利技术的第五方面，提供了第一方面所述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针在brd4抑制剂的高通量筛选中的应用。
23、与现有技术相比，本专利技术取得了以下有益效果：
24、(1)本专利技术制备的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针生物活性强，与brd4/plk1家族蛋白的亲和力高，灵敏度高，可以作为识别brd4家族蛋白的探针及与相关的生理、病理及相关疾病的研究，具有广阔的应用前景。
25、(2)本专利技术制备的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针可以用于brd4/plk1双靶标抑制剂高通量筛选及其在抗肿瘤方面的应用；也可以用于brd4/plk1家族蛋白及其高表达的肿瘤细胞或组织的标记。
26、(3)本专利技术提供的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法反应条件温和，原料便宜易得，操作及后处理简单。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针或其立体异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针具有式I所示结构或式II所示结构：
2.如权利要求1所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，所述药学上可接受的盐，包括与无机酸或有机酸形成的盐，所述无机酸为盐酸、硫酸、硝酸或氢溴酸，所述有机酸为甲磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸。
3.如权利要求1所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述式III所示化合物的制备方法为：将(R)-2-氯-8-环戊基-7-乙基-5-甲基-7,8-二氢蝶呤-6(5H)-酮与4-氨基-3-甲氧基苯甲酸反应即得。
5.如权利要求3所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述式IV所示化合物的制备方法为：将丹酰氯与N-叔丁氧羰基-1,3丙二胺反应得到化合物6，化合物6经过脱保护反
6.如权利要求3所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述式V所示化合物的制备方法为：将式III所示化合物与4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯经过酰胺缩合反应得到化合物8，化合物8经过氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc保护基得中间体9，中间体9与4-(叔丁氧羰基)氨基丁酸经酰胺缩合反应得到化合物10，化合物10经过脱保护反应得到式V所示化合物；
7.如权利要求1所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针在制备识别BRD4/PLK1双靶标的试剂或试剂盒中的应用。
8.如权利要求1所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针制备其高表达的肿瘤细胞或组织的标记物中的应用。
9.如权利要求8的应用，其特征在于，所述肿瘤包括良性肿瘤和/或恶性肿瘤；优选的，所述恶性瘤包括实体瘤和血液瘤；进一步优选的，所述实体瘤包括乳腺癌。
10.如权利要求1所述的BRD4/PLK1双靶标小分子荧光探针在其抑制剂的高通量筛选中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种brd4/plk1双靶标小分子荧光探针或其立体异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述brd4/plk1双靶标小分子荧光探针具有式i所示结构或式ii所示结构：
2.如权利要求1所述的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，所述药学上可接受的盐，包括与无机酸或有机酸形成的盐，所述无机酸为盐酸、硫酸、硝酸或氢溴酸，所述有机酸为甲磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸。
3.如权利要求1所述的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述式iii所示化合物的制备方法为：将(r)-2-氯-8-环戊基-7-乙基-5-甲基-7,8-二氢蝶呤-6(5h)-酮与4-氨基-3-甲氧基苯甲酸反应即得。
5.如权利要求3所述的brd4/plk1双靶标小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述式iv所示化合物的制备方法为：将丹酰氯与n-叔丁氧羰基-1,3丙二胺反应得到化...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘婷婷，高玉祺，李建军，马杰，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。