【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米，尤其是涉及一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统及其制备方法与应用。
技术介绍
1、血脑屏障是人体三大屏障之一，由血管内皮细胞、基膜、神经胶质细胞脚板等构成。血脑屏障对物质具有很强的选择透过性，仅有部分小分子物质能透过血脑屏障进入脑组织。因此，递送系统对一些脑部治疗药物或具有神经调控作用的功能活性因子的靶向递送具有重要的开发价值。
2、目前，国内外已有许多递送生物活性物质的方法，如载体络合、微胶囊技术和纳米技术等。其中纳米技术利用纳米尺寸的载体将药物或生物活性物质进行封装，一方面可以其不受消化道内外环境影响，并控制其在特定条件下的释放；另一方面，纳米载体可以实现靶向递送，促进负载药物或生物活性物质生物利用度的提高。chen等建立了一种由金包裹并与聚乙二醇(peg)偶联的超顺磁性氧化铁纳米颗粒用于腹腔注射，实现在外部静磁场作用下穿越血脑屏障的递送。国外有学者设计了一种基于聚合人血清白蛋白(hsa)的合成蛋白质纳米粒子(spnp)，该纳米粒子配备了细胞穿透肽irgd实现了脑胶质瘤治疗mirna穿过血脑屏障向脑组织的靶向递送。专利cn202311385127.5公开了一种负载双白术内酯的脑靶向纳米颗粒，其为表面修饰tween 80的鹅去氧胆酸修饰的普鲁兰多糖，实现疏水性药物穿越血脑屏障；cn202211262389.8公开了一种负载有活性成分的纳米药物载体及其制备方法，将壳聚糖膜层包裹在负载活性成分的聚乳酸-乙醇酸共聚物纳米颗粒上，可经鼻给药通过血脑屏障用于防治帕金森病的进展。但目前，多数载体材料已无机
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统及其制备方法与应用，以实现药物或生物活性因子向脑组织的靶向递送，解决药物或生物活性因子生物利用度低和难以穿过血脑屏障的问题，实现向脑组织的定向递送。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术一方面提供一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统，包括如下各组分：负载药物、连接葡萄糖的大豆分离肽、三聚磷酸钠(tpp)和接枝csk肽的三甲基壳聚糖。
4、在本专利技术的一个实施方式中，所述负载药物、连接葡萄糖的大豆分离肽、接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠(tpp)的质量比为1：(30～40)：(10～15)：(2～4)。
5、在本专利技术的一个实施方式中，所述靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统为双层结构，内层为由连接葡萄糖的大豆分离肽和负载药物自组装形成的单层纳米颗粒，外层包裹在内层外侧，外层由接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠形成，其中，三聚磷酸钠作为交联剂与接枝csk肽的三甲基壳聚糖共同形成外层。
6、在本专利技术的一个实施方式中，所述连接葡萄糖的大豆分离肽的制备方法为：
7、大豆分离肽与d-氨基葡萄糖溶于去离子水，调节ph，加入tgase酶进行酶解反应，结束后，灭活tgase酶，冷却至环境温度后蒸馏水透析过夜，冻干后磨粉即得连接葡萄糖的大豆分离肽。
8、优选地，所述连接葡萄糖的大豆分离肽的制备方法中，大豆分离肽与d-氨基葡萄糖的质量比为15：1，加入tgase酶的终浓度为10u/g，调节ph是指用naoh调节ph至8.5，蒸馏水的温度为4℃。
9、在本专利技术的一个实施方式中，所述大豆分离肽的制备方法为：将大豆分离蛋白分散在去离子水中，调节温度为50℃、ph为7.5-8.5后加入碱性蛋白酶(终浓度为10u/g)进行酶解。待酶解过程结束后调ph为7并离心，弃去上清，将沉淀用去离子水洗涤，冻干后磨粉即得大豆分离肽。
10、在本专利技术的一个实施方式中，所述接枝csk肽的三甲基壳聚糖的制备方法如下：
11、(1)壳聚糖溶于nacl溶液中，搅拌，加入硫酸二甲酯后开始反应，反应过程中使ph保持在7.5-8.5之间，ph不发生变化后继续进行，反应结束后，旋转浓缩后透析，再旋蒸蒸发，无水乙醇沉淀，丙酮洗涤，产物即为三甲基壳聚糖，将产物冻干磨粉；
12、(2)将上述步骤(1)所得产物与edc·hcl和nhs溶于水中，加入csk肽，在氮气气氛下，室温避光反应，反应结束后透析，产物冷冻干燥；
13、(3)将上述步骤(2)所得产物溶解于醋酸水溶液中，调节ph至5.5，用0.45μm滤膜过滤备用。
14、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(1)中，壳聚糖、nacl溶液、硫酸二甲酯的用量关系为1g：10ml：16ml，所述nacl溶液的浓度为15mm。
15、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，步骤(1)所得产物、edc·hcl和nhs的摩尔质量比为3:5:5。
16、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，csk肽的终浓度为0.02-0.05mm，优选为0.045mm。
17、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，产物冷冻干燥后在4℃保存。
18、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(3)中，醋酸水溶液的浓度为0.1％(v/v)。
19、在本专利技术的一个实施方式中，所述接枝csk肽的三甲基壳聚糖中，三甲基壳聚糖的脱乙酰度>95％，粘度100-200mpa·s-1。
20、本专利技术第二方面，提供一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，包括如下步骤：
21、(a)将连接葡萄糖的大豆分离肽与负载药物在去离子水中搅拌；
22、(b)将步骤(a)所得产物冰浴超声分散，经离心后取上清液，得到由连接葡萄糖的大豆分离肽和负载药物自组装形成的单层纳米载体；
23、(c)三聚磷酸钠溶于水中，加入吐温80涡旋得到三聚磷酸钠和吐温80的混合液备用；
24、(d)将上述步骤(b)所得单层纳米载体、接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠和吐温80的混合液混合，进行磁力搅拌，得到靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统。
25、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(c)中，所述三聚磷酸钠、吐温80、水的用量关系为30mg：1mg：30ml。
26、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(a)中，连接葡萄糖的大豆分离肽与负载药物在去离子水中搅拌的条件为：常温下搅拌1-4小时，优选为2h。
27、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(b)中，冰浴超声时间为5-20min，优选为10min，超声功率为90-100w。
28、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(d)中，单层纳米载体、接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠和吐温80的混合液的用量关系为：(2-5):(15-20):2(v/v/v)，优选地，单层纳米载体、接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠和吐温80的混合液的用量关系为：5：20：2(v/v/v)。
29、在本专利技术的一个实施方式中，所述负载药物选自牡荆素。...
【技术保护点】
1.一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统，其特征在于，包括如下各组分：负载药物、连接葡萄糖的大豆分离肽、三聚磷酸钠(TPP)和接枝CSK肽的三甲基壳聚糖；
2.根据权利要求1所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统，其特征在于，所述靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统为双层结构，内层为由连接葡萄糖的大豆分离肽和负载药物自组装形成的单层纳米颗粒，外层包裹在内层外侧，外层由接枝CSK肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠形成，其中，三聚磷酸钠作为交联剂与接枝CSK肽的三甲基壳聚糖共同形成外层。
3.一种如权利要求1或2所述靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述连接葡萄糖的大豆分离肽的制备方法为：
5.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，所述大豆分离肽的制备方法为：将大豆分离蛋白分散在去离子水中，调节温度为50℃、pH为7.5-8.5后加入碱性蛋白酶进行酶解。待
6.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，所述接枝CSK肽的三甲基壳聚糖的制备方法如下：
7.根据权利要求6所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，壳聚糖、NaCl溶液、硫酸二甲酯的用量关系为1g：10mL：16mL；
8.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，步骤(d)中，单层纳米载体、接枝CSK肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠和吐温80的混合液的用量关系为：(2-5):(15-20):2(v/v/v)。
9.根据权利要求6所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，所述接枝CSK肽的三甲基壳聚糖中，三甲基壳聚糖的脱乙酰度>95％，粘度100-200mPa·s-1。
10.权利要求1或2所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统在制备口服药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统，其特征在于，包括如下各组分：负载药物、连接葡萄糖的大豆分离肽、三聚磷酸钠(tpp)和接枝csk肽的三甲基壳聚糖；
2.根据权利要求1所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统，其特征在于，所述靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统为双层结构，内层为由连接葡萄糖的大豆分离肽和负载药物自组装形成的单层纳米颗粒，外层包裹在内层外侧，外层由接枝csk肽的三甲基壳聚糖、三聚磷酸钠形成，其中，三聚磷酸钠作为交联剂与接枝csk肽的三甲基壳聚糖共同形成外层。
3.一种如权利要求1或2所述靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述连接葡萄糖的大豆分离肽的制备方法为：
5.根据权利要求3所述的一种靶向血脑屏障的口服纳米载体递送系统的制备方法，其特征在于，所述大豆分离肽的制备方法为：将大豆分离蛋白分散在去离子水中，调节温度为50℃、ph为7.5-8.5后加入碱性蛋白酶进...
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