【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及α-淀粉酶的变体，其与亲本α-淀粉酶相比具有增加的外淀粉酶活性。本专利技术还涉及制备变体α-淀粉酶的方法以及所述变体α-淀粉酶在烘焙、洗涤剂、个人护理产品、在纺织品的加工、在纸浆和纸加工、在生产乙醇、木质纤维素乙醇或糖浆以及在油田和采矿业中用作减粘剂(viscosity breaker)的用途。
技术介绍
0、专利技术背景
1、面包数千年来是人类营养的主要内容。面包通常是通过将面粉、水、盐、酵母和/或其他食物添加剂混合以制成面团或糊状物而制成的；然后将面团烘焙以制成面包。已知酶可用于烘焙，因为酶对烘焙过程的作用可以与化学替代品的作用相似或比之更好。几种不同的酶可用于制作面包，例如已知淀粉酶有助于随着时间保持新鲜度(抗老化或硬度)并随着时间保持弹性。面包老化是由支链淀粉的结晶引起的，其在烘焙后在淀粉颗粒中发生。面包老化时，其失去面包屑的柔软性和水分，从而失去弹性。
2、因此，依然需要一种淀粉酶，其可以在比目前可得的更长的时间内提供新鲜的面包，或者需要一种淀粉酶，其可以随时间提供比新鲜的更好的面包。
3、所述问题的一种解决方案是具有满足或超过这些工业要求的α-淀粉酶活性的变体多肽。此外，α-淀粉酶变体还可用于动物饲料，洗涤剂，个人护理产品，纺织品的加工、纸浆和纸加工，生产乙醇，生产木质纤维素乙醇，生产糖浆，或在油田和采矿业中用作减粘剂。
技术实现思路
1、本专利技术人惊奇地发现，与亲本酶的活性相比，在α-淀粉酶的氨基酸序列中
2、因此，本专利技术涉及根据seq id no.1的α-淀粉酶的变体多肽，其包含与根据seqidno.1的序列至少80％相同的氨基酸序列并且具有α-淀粉酶活性，其中与根据seq idno.1的α-淀粉酶相比，所述变体多肽具有增加的外淀粉酶活性。
3、在一个实施方案中，与根据seq id no.1的氨基酸序列相比，所述变体包含至少一个氨基酸修饰，其可以是氨基酸取代。
4、在一个实施方案中，所述至少一个氨基酸修饰是在选自以下的氨基酸残基位置编号：seq id no.1编号中的2、3、4、21、22、25、26、29、32、35、45、53、59、68、76、82、88、90、91、96、105、117、126、128、134、141、152、160、175、197、200、234、236、243、256、257、258、261、264、270、292、311、380、416、423、433和435。
5、在一个实施方案中，所述至少一个氨基酸修饰是选自以下的氨基酸取代：seqidno.1编号中的k2h、y3r、s4t、p21e、p21w、g22q、i25w、w26g、t29g、q32r、p35k、i45m、g53a、s59p、f68p、k76r、r82n、e88y、v90g、v90m、n91t、a96t、a105w、l117r、y126v、w128y、v134a、a141t、k152m、g160e、g160v、w175n、f197a、f197k、v200s、w234c、y236h、f243a、f243k、f243t、d256a、n257r、t258c、p261c、p261f、v264r、g270y、i292a、i292e、v311l、n380l、g416q、g423m、a433w和v435s。
6、在一个实施方案中，与根据seq id no.1的氨基酸序列相比，所述变体多肽包含氨基酸修饰的组合。
7、所述氨基酸修饰的组合是可选自以下的氨基酸取代的组合：seq id no.1编号中的
8、(a)g22q、p35k、s59p、w128y、d256a；
9、(b)g22q、w128y、w175n、v200s、a433w；
10、(c)g22q、p35k、s59p、d256a；
11、(d)g22q、w175n、v200s、d256a、a433w；
12、(e)w128y、w175n、d256a；
13、(f)g22q、s59p、v200s、d256a、a433w；
14、(g)g22q、w175n、v200s、d256a；
15、(h)g22q、s59p；
16、(i)g22q、p35k、w128y、w175n、v200s、d256a、a433w；
17、(j)g22q、p35k、s59p、w128y、a433w；
18、(k)g22q、w128y、w175n、d256a；
19、(l)p35k、w128y、v200s、d256a；
20、(m)g22q、s59p、w175n、v200s、a433w；
21、(n)g22q、s59p、w128y、v200s、a433w；
22、(o)g22q、s59p、w175n、v200s、d256a、a433w；
23、(p)g22q、s59p、w128y、d256a；
24、(q)s59p、v200s、d256a、a433w；
25、(r)p35k、s59p、w128y、w175n、v200s、d256a、a433w；
26、(s)g22q、s59p、w128y、d256a、a433w；
27、(t)g22q、s59p、w128y、w175n、v200s、433w；
28、(u)g22q、w128y、w175n、a433w；
29、(v)s59p、w128y、v200s；
30、(w)p35k、s59p、v200s、a433w；
31、(x)s59p、w128y、v200s、d256a；
32、(y)s59p、w128y、v200s、a433w；和
33、(z)w128y、v200s、a433w。
34、在一个实施方案中，所述变体多肽是全长氨基酸序列的片段。
35、在一个实施方案中，所述变体多肽包含所述至少一个变体多肽和具有淀粉酶活性的第二多肽的杂合体，其中所述杂合体具有α-淀粉酶活性。
36、本专利技术还涉及一种包含所述变体多肽的组合物。
37、所述组合物还可以包含第二酶并且所述第二酶可选自：第二α-淀粉酶、脂肪酶、β-淀粉酶、g4-淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、纤维素酶、葡糖淀粉酶、氧化还原酶、磷脂酶和环糊精葡聚糖转移酶。
38、本专利技术还涉及一种制备变体多肽的方法，其包含：提供编码所述多肽变体的模板核酸序列，将所述模板核酸序列转化进表达宿主，培养所述表达宿主以产生所述变体多肽，并纯化所述变体多肽。
39、在一个实施方案中，所述模板核酸是seq id no.2所示核酸序列的变体核苷酸，其中所述变体核苷酸是与seq id no.2所示核酸序列至少8本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.根据SEQ ID No.1的α-淀粉酶的变体多肽，其包含与根据SEQ ID No.1的序列至少80％相同的氨基酸序列并且具有α-淀粉酶活性，其中与根据SEQ ID No.1的α-淀粉酶相比，所述变体多肽具有增加的外淀粉酶活性，
2.权利要求1的变体多肽，其中与根据SEQ ID No.1的氨基酸序列相比，所述变体多肽包含氨基酸修饰的组合。
3.权利要求2的变体多肽，其中所述氨基酸修饰的组合是选自以下的氨基酸取代的组合：SEQ ID No.1编号中的
4.权利要求1-3任一项的变体多肽，其中所述变体多肽是根据SEQ ID No.1的全长氨基酸序列的片段。
5.一种变体多肽，其包含权利要求1-4任一项的至少一种变体多肽和具有淀粉酶活性的第二多肽的杂合体，其中所述杂合体具有α-淀粉酶活性。
6.一种组合物，其包含权利要求1-4任一项的变体多肽。
7.权利要求6的组合物，其还包含第二酶。
8.权利要求7的组合物，其中所述第二酶选自：第二α-淀粉酶、脂肪酶、β-淀粉酶、G4-淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、纤维
9.一种制备变体多肽的方法，其包含：提供编码权利要求1-5任一项的多肽变体的模板核酸序列，将所述模板核酸序列转化进表达宿主，培养所述表达宿主以产生所述变体多肽，并纯化所述变体多肽。
10.权利要求9的方法，其中所述模板核酸是SEQ ID NO.2所示核酸序列的变体核酸序列，其中所述变体核酸序列是与SEQ ID No.2所示核酸序列至少80％相同的核酸序列，其中所述变体核酸序列编码具有α-淀粉酶活性及与由根据SEQ ID No.2的核酸序列编码的α-淀粉酶相比具有增加的外淀粉酶活性的多肽。
11.一种制备面团或由所述面团制备的烘焙产品的方法，所述方法包含将权利要求1-5任一项的变体多肽添加至所述面团，并最终烘焙所述面团。
12.权利要求1-5任一项的变体多肽或权利要求6-8任一项的组合物在加工淀粉、清洁或洗涤纺织品、硬表面或餐具、制备乙醇、处理油井、加工纸浆或纸、饲喂动物或制备糖浆中的用途。
...【技术特征摘要】
1.根据seq id no.1的α-淀粉酶的变体多肽，其包含与根据seq id no.1的序列至少80％相同的氨基酸序列并且具有α-淀粉酶活性，其中与根据seq id no.1的α-淀粉酶相比，所述变体多肽具有增加的外淀粉酶活性，
2.权利要求1的变体多肽，其中与根据seq id no.1的氨基酸序列相比，所述变体多肽包含氨基酸修饰的组合。
3.权利要求2的变体多肽，其中所述氨基酸修饰的组合是选自以下的氨基酸取代的组合：seq id no.1编号中的
4.权利要求1-3任一项的变体多肽，其中所述变体多肽是根据seq id no.1的全长氨基酸序列的片段。
5.一种变体多肽，其包含权利要求1-4任一项的至少一种变体多肽和具有淀粉酶活性的第二多肽的杂合体，其中所述杂合体具有α-淀粉酶活性。
6.一种组合物，其包含权利要求1-4任一项的变体多肽。
7.权利要求6的组合物，其还包含第二酶。
8.权利要求7的组合物，其中所述第二酶选自：第二α-淀粉酶、脂肪酶、β-淀...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·乌尔维纳，A·库雷希，A·休斯顿达文波特，X·谭，J·库切尔，A·丰克，M·赛特，S·黑夫纳，AH·黎，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：
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