【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供用于制备包含脂质体双层的均质和异质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，且本专利技术进一步提供由所述方法生产的佐剂制剂。
技术介绍
0、专利技术背景
1、2017年，美国将含有单磷酰脂质a(mpla)及qs-21皂苷两者的商品化脂质体佐剂制剂(称为as01)用于>50岁的成人，作为带状疱疹疫苗的佐剂。美国陆军已开发另一种含有mpla及qs-21皂苷两者的基于脂质体的制剂，其称为陆军脂质体制剂q(army liposomeformulation q；alfq)。已显示alfq在啮齿动物及非人类灵长类动物研究中可有效作为脂质体疫苗佐剂，且其在临床前研究中也显示为非热原的及无毒性的。改良的alfq安全性质可归因于脂质体胆固醇与游离qs-21不可逆地结合以形成复合物，该复合物防止由qs-21与红细胞的结合而导致其溶血。当将可溶性qs-21添加至脂质体中间体的悬浮液中时，alfq的尺寸在alfq制造期间从50至100nm增大至约30,0
2、在另一方法中，将脂质的有机溶液冷冻干燥，产生具有容易被待封装材料的水溶液水合的物理特性的冻干产品。与这种生产方法相关的问题包括各批次间脂质体中的药物封装的差异性。例如，conrad等人(biochim.biophys.acta 332(1974)36-46)显示，在使用这种方法独立制备的脂质体制剂之间，封装效率的标准偏差为12％至13％。
3、因此，需要能够控制含有mpla及皂苷(包括但不限于qs-21)的脂质体佐剂制剂的尺寸及多分散性的可重现的方法。另外，需要足够稳定以便大规模使用(即，可扩展到临床及商业制造)的方法。
技术实现思路
0、专利技术简述
1、本专利技术提供了新的可重现的方法，其可控制包含mpla及皂苷(包括但不限于qs-21)的脂质体佐剂制剂的尺寸及多分散性。另外，本专利技术提供用于大规模制造包含mpla及皂苷的所述脂质体佐剂制剂的方法，其中大规模制造(即可扩展制造)生产了足以用于临床及商业用途的量的脂质体佐剂制剂。
2、本专利技术提供一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的第一方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)及二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
3、所述方法包括以下步骤：
4、(i)将磷脂、胆固醇及mpla溶解于有机溶剂中以形成有机相；
5、(ii)将步骤(i)中的有机相以特定流速和有机相与水相的特定比率注入水相中以形成脂质体；
6、(iii)搅拌步骤(ii)中的脂质体以形成中间体脂质体；
7、(iv)移除步骤(iii)中的中间体脂质体的有机相；
8、(v)浓缩步骤(iv)中的中间体脂质体；及
9、(vi)将步骤(v)中的中间体脂质体与皂苷混合以形成具有约30至400nm的尺寸范围且多分散性为0.05至0.5的最终佐剂制剂，
10、由此生产所述均质佐剂制剂。
11、在用于生产均质佐剂制剂的第一方法的一个实施方案中，所述皂苷是选自由qs-7、qs-18、qs-21或其混合物组成的组。在一个优选的实施方案中，所述皂苷为qs-21。
12、本专利技术提供一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的第二方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
13、所述方法包括以下步骤：
14、(i)将磷脂、胆固醇及mpla溶解于有机溶剂或有机溶剂的混合物中以形成有机相；
15、(ii)将步骤(i)中的有机相以特定流速和有机相与水相的特定比率注入水相中以形成中间体脂质体；
16、(iii)浓缩步骤(ii)中的中间体脂质体；
17、(iv)移除步骤(iii)中的中间体脂质体的有机相；
18、(v)过滤步骤(iv)中的中间体脂质体；及
19、(vi)将步骤(v)中的中间体脂质体与皂苷混合以形成具有约30至400nm的尺寸范围且多分散性为0.05至0.5的最终佐剂制剂，
20、由此生产所述均质佐剂制剂。
21、在用于生产均质佐剂制剂的第二方法的一个实施方案中，所述皂苷是选自由qs-7、qs-18、qs-21或其混合物组成的组。在一个优选的实施方案中，所述皂苷为qs-21。
22、本专利技术提供一种用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质A(MPLA)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(PC)和/或磷脂酰甘油(PG)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
2.根据权利要求1中所述的方法，其中所述皂苷是选自由QS-7、QS-18、QS-21或其混合物组成的组。
3.根据权利要求2中所述的方法，其中所述皂苷为QS-21。
4.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(i)中的所述磷脂、胆固醇和MPLA是通过超声处理、加热或其组合溶解于所述有机溶剂中。
5.根据权利要求4中所述的方法，其中所述有机溶剂为乙醇或异丙醇。
6.根据权利要
7.根据权利要求1中所述的方法，其中所述水相包含水或缓冲液。
8.根据权利要求7中所述的方法，其中所述缓冲液包含pH 6.2的含有150mM NaCl的10mM磷酸盐。
9.根据权利要求7中所述的方法，其中所述水相处于20℃至60℃之间的温度下。
10.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(ii)的流速为0.5mL/min至400mL/min或快速添加。
11.根据权利要求1中所述的方法，其中以700rpm至900rpm的速率搅拌所述步骤(iii)中的中间体脂质体。
12.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(ii)的有机相与水相的比率介于1:4至1:16的范围内。
13.根据权利要求1中所述的方法，其中通过使用高压挤出机或微射流均质机来缩小所述步骤(iv)中的中间体脂质体的尺寸。
14.根据权利要求13中所述的方法，其中通过使用尺寸范围介于50nm至120nm的膜或介于17000PSI与24000PSI之间的均质化压力或两者的组合来缩小所述步骤(iv)中的脂质体的尺寸。
15.根据权利要求1中所述的方法，其中在所述步骤(iv)的尺寸缩小之前或在步骤(iv)的尺寸缩小之后移除该有机溶剂。
16.根据权利要求1中所述的方法，其中通过切向流过滤(TFF)移除步骤(iv)中的中间体脂质体的有机相。
17.根据权利要求16中所述的方法，其中所述TFF为TFF渗滤。
18.根据权利要求16中所述的方法，其中所述TFF包含具有介于100kDa至500kDa范围内的截留分子量(MWCO)的膜。
19.根据权利要求1中所述的方法，其中通过超滤进行所述步骤(v)中的浓缩。
20.根据权利要求19中所述的方法，其中所述超滤包含生物负荷减少过滤器及无菌过滤器。
21.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合是以300rpm的混合速度进行。
22.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合介于1小时至24小时的范围内。
23.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合是在室温或2℃至8℃下进行。
24.根据权利要求1中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有约30nm至400nm的尺寸范围。
25.根据权利要求1中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有0.05至0.5的多分散性。
26.根据权利要求1中所述的方法，其中通过泵或注射器注射进行所述步骤(ii)中的注入。
27.一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质A(MPLA)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(PC)和/或磷脂酰甘油(PG)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
28.根据权利要求27中所述的方法，其中所述皂苷是选自由QS-7、QS-18、QS-2...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
2.根据权利要求1中所述的方法，其中所述皂苷是选自由qs-7、qs-18、qs-21或其混合物组成的组。
3.根据权利要求2中所述的方法，其中所述皂苷为qs-21。
4.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(i)中的所述磷脂、胆固醇和mpla是通过超声处理、加热或其组合溶解于所述有机溶剂中。
5.根据权利要求4中所述的方法，其中所述有机溶剂为乙醇或异丙醇。
6.根据权利要求4中所述的方法，其中将所述有机相加热至45℃至65℃之间的温度。
7.根据权利要求1中所述的方法，其中所述水相包含水或缓冲液。
8.根据权利要求7中所述的方法，其中所述缓冲液包含ph 6.2的含有150mm nacl的10mm磷酸盐。
9.根据权利要求7中所述的方法，其中所述水相处于20℃至60℃之间的温度下。
10.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(ii)的流速为0.5ml/min至400ml/min或快速添加。
11.根据权利要求1中所述的方法，其中以700rpm至900rpm的速率搅拌所述步骤(iii)中的中间体脂质体。
12.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(ii)的有机相与水相的比率介于1:4至1:16的范围内。
13.根据权利要求1中所述的方法，其中通过使用高压挤出机或微射流均质机来缩小所述步骤(iv)中的中间体脂质体的尺寸。
14.根据权利要求13中所述的方法，其中通过使用尺寸范围介于50nm至120nm的膜或介于17000psi与24000psi之间的均质化压力或两者的组合来缩小所述步骤(iv)中的脂质体的尺寸。
15.根据权利要求1中所述的方法，其中在所述步骤(iv)的尺寸缩小之前或在步骤(iv)的尺寸缩小之后移除该有机溶剂。
16.根据权利要求1中所述的方法，其中通过切向流过滤(tff)移除步骤(iv)中的中间体脂质体的有机相。
17.根据权利要求16中所述的方法，其中所述tff为tff渗滤。
18.根据权利要求16中所述的方法，其中所述tff包含具有介于100kda至500kda范围内的截留分子量(mwco)的膜。
19.根据权利要求1中所述的方法，其中通过超滤进行所述步骤(v)中的浓缩。
20.根据权利要求19中所述的方法，其中所述超滤包含生物负荷减少过滤器及无菌过滤器。
21.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合是以300rpm的混合速度进行。
22.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合介于1小时至24小时的范围内。
23.根据权利要求1中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合是在室温或2℃至8℃下进行。
24.根据权利要求1中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有约30nm至400nm的尺寸范围。
25.根据权利要求1中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有0.05至0.5的多分散性。
26.根据权利要求1中所述的方法，其中通过泵或注射器注射进行所述步骤(ii)中的注入。
27.一种用于生产包含脂质体双层的均质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
28.根据权利要求27中所述的方法，其中所述皂苷是选自由qs-7、qs-18、qs-21或其混合物组成的组。
29.根据权利要求28中所述的方法，其中所述皂苷为qs-21。
30.根据权利要求27中所述的方法，其中所述步骤(i)中的所述磷脂、胆固醇和mpla是通过超声处理、加热、搅拌或其组合溶解于所述有机溶剂中。
31.根据权利要求30中所述的方法，其中所述有机溶剂为乙醇或异丙醇或其他有机溶剂。
32.根据权利要求30中所述的方法，其中将所述有机相加热至45℃至65℃之间的温度，优选为在50℃与65℃之间或在45℃与55℃之间的温度。
33.根据权利要求27中所述的方法，其中所述水相包含水或缓冲液。
34.根据权利要求33中所述的方法，其中所述缓冲液包含ph 6.2的含有150mm nacl的10mm磷酸盐。
35.根据权利要求33中所述的方法，其中所述水相处于20℃至65℃之间的温度下。
36.根据权利要求27中所述的方法，其中所述步骤(ii)中的流速为12ml/min。
37.根据权利要求27中所述的方法，其中以100rpm至1000rpm的速率搅拌所述步骤(vi)中的中间体脂质体。
38.根据权利要求27中所述的方法，其中所述步骤(ii)中的有机相与水相的比率介于1:2至1:16的范围内，优选为4:7。
39.根据权利要求27中所述的方法，其中通过切向流过滤(tff)移除所述步骤(iv)中的中间体脂质体的有机相。
40.根据权利要求39中所述的方法，其中所述tff为tff渗滤。
41.根据权利要求40中所述的方法，其中所述tff包含具有介于100kda至500kda范围内的截留分子量(mwco)的膜。
42.根据权利要求27中所述的方法，其中通过超滤进行所述步骤(iii)中的浓缩。
43.根据权利要求27中所述的方法，其中所述步骤(v)中的过滤包含生物负荷减少过滤器及无菌过滤器。
44.根据权利要求27中所述的方法，其中所述步骤(vi)中的混合是在室温下以350rpm的混合速度进行1小时。
45.根据权利要求27中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有约50nm至200nm的尺寸范围。
46.根据权利要求27中所述的方法，其中所述最终佐剂制剂具有0.05至0.5的多分散性。
47.根据权利要求27中所述的方法，其中通过泵或注射器注射进行所述步骤(ii)中的注入。
48.一种用于生产包含脂质体双层的异质佐剂制剂的方法，该脂质体双层包含(a)单磷酰脂质a(mpla)、(b)皂苷及(c)脂质体组合物，所述脂质体组合物包含(i)至少一种选自至少一种磷脂酰胆碱(pc)和/或磷脂酰甘油(pg)的磷脂，其中所述磷脂是选自由以下组成的组：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)及其组合，以及(ii)胆固醇，其中所述脂质体组合物中的胆固醇的摩尔百分比浓度大于50％(mol/mol)，
49.根据权利要求48中所述的方法，其中所述皂苷是选自由qs-7、qs-18、qs-21或其混合物组成的组。
50.根据权利要求49中所述的方法，其中所述皂苷为qs-21。
51.根据权利要求48中所述的方法，其中在所述步骤(i)中，所述磷脂、胆固醇和mpla是通过超声处理、加热、搅拌或其组合溶解于所述有机溶剂中。
52.根据权利要求51中所述的方法，其中所述有机溶剂为乙醇或异丙醇或其混合物。
53.根据权利要求51中所述的方法，其中将所述脂质制剂有机相加热至45℃至65℃的温度。
54.根据权利要求48中所述的方法，其中所述水相包含水或缓冲液。
55.根据权利要求54中所述的方法，其中所述缓冲液包含ph 6.2的含有150mm nacl的10mm磷酸盐。
56.根据权利要求54中所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·安萨里，A·V·巴德卡尔，L·S·巴格勒，陈波，R·达尔瓦里，P·A·科尔赫，M·S·拉普希纳，R·G·纳亚克，N·帕莱特，师帅，Z·贝克，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：
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