【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型技术和辐射危害评价领域，具体是一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型及离子辐射危害评价体系。
技术介绍
1、近年辐射损伤与防护的相关基础研究日益受到关注，虽然海洋环境中离子辐射对水生态系统的危害性和潜在的健康风险一直备受重视，但离子辐射对水生物的毒理学效应，如发育毒性、生殖毒性、神经毒性以及致癌性等仍缺乏有利的研究数据支撑。目前比较缺乏ir（电离辐射）生殖健康危害评价的斑马鱼动物模型，给辐射诱导的生殖危害机制的研究和相关防护药品的研发带来了困难。因此，本专利技术人构建了一种斑马鱼动物模型，为ir生殖发育危害的研究提供模型支持。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型及离子辐射危害评价体系，本专利技术所采取的技术方案如下：
2、第一方面，提供一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其构建方法包括以下步骤：
3、s1. 对成年性成熟雌、雄斑马鱼采用生物辐照仪器进行辐照，并设置不同辐照剂量的雌雄斑马鱼配对组；
4、s2. 雌雄斑马鱼配对组辐照后的16~48h内进行交配，每个交配盒放置1雌1雄；
5、s3. 收集各组雌雄斑马鱼交配后产生的胚胎并评价其产卵量和受精率；
6、s4. 对产生的胚胎于受精后8~120小时进行观察，统计胚胎孵化率、心率、畸形率以及主要畸形表型。
7、作为优选，所述主要畸形表型包括胚胎头部发育异常、脊
8、作为优选，所述畸形表型还包括胚胎全身性的细胞凋亡，通过对胚胎组织进行吖啶橙染色分析确定细胞凋亡现象。
9、作为优选，所述畸形表型还包括内脏区域氧化损伤，采用活性氧（ros）荧光染料染色分析确定内脏区域氧化损伤。
10、作为优选，所述畸形表型还包括心血管发育畸形、胚胎炎症反应和神经发育畸形。
11、作为优选，将雌性斑马鱼卵巢免疫应激基因myhz1、mhcii、mhc2d8、mhc2dab、b2m，以及膜和卵巢发育调控基因vtg、apoa2b、fabp作为离子辐射敏感型基因；将雄性斑马鱼的细胞传导基因p4ha3、ahcyl2a、nt5c2l1、代谢相关基因cyp、ugt家族基因、铁死亡基因gpx4a、gsto2和gsta2，以及血红素结合基因hbba2、hbaa2、hbba1作为离子辐射敏感型基因；根据所述离子辐射敏感型基因的表达来评价所述动物模型受离子辐射的影响程度。
12、具体的，上述步骤s1中，设置斑马与双亲辐照剂量为零的无辐照对照组、辐照剂量均不为零的双亲ir组，仅雄鱼辐照的父本ir组和仅雌鱼辐照的母本ir组。
13、第二方面，提供一种离子辐射危害评价体系，根据上述的斑马鱼动物模型构建，该离子辐射危害评价体系包括雌性鱼类评价体系和雄性鱼类评价体系；
14、根据所述父本ir组和母本ir组动物模型，分别构建雌、雄斑马鱼在不同辐照剂量下的辐射影响指标对照表，所述辐射影响指标包括产卵量、受精率、胚胎孵化率、畸形率、主要畸形表型、离子辐射敏感性基因表达情况中的至少一项，将一项或者多项的统计结果进行显著性检验，根据是否具有显著性判断该样本是否已受辐射影响；
15、所述雌性鱼类评价体系采用待评价的斑马鱼雌鱼样本和未污染的雄鱼交配，所述雄性鱼类评价体系采用待评价的斑马鱼雄鱼样本和未污染的雌鱼交配，通过上述辐射影响指标评价表来评估待评价样本是否受离子辐射影响及待评价样本和其子代胚胎的辐射影响程度。
16、还可以将上述离子辐射危害评价体系应用于生物预警，构建三级评价体系，来评估环境的离子辐射危害等级；
17、一级评价：待评价的斑马鱼样本和未污染的斑马鱼交配后，统计产卵量、受精率、胚胎孵化率、外表畸形率、幼鱼死亡率中的一项或多项，根据统计结果判断是否相对于双亲未污染的对照组具有显著性，若进行多项评价，多项中的两项具有显著性则判定整体具有显著性；
18、二级评价：待评价的斑马鱼样本和未污染的斑马鱼交配后，统计幼鱼的主要畸形表型和/或内脏区域氧化损伤，所述主要畸形表型包括胚胎头部发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊异常、游囊未张开、尾部畸形、心血管发育畸形、胚胎炎症反应、神经发育畸形；根据幼鱼的主要畸形表型发生率和/或内脏区域氧化损伤发生率判断是否相对于双亲未污染的对照组具有显著性，若进行多项评价，多项中的两项具有显著性则判定整体具有显著性；
19、三级评价：设定雌性斑马鱼的卵巢免疫应激基因myhz1、mhcii、mhc2d8、mhc2dab、b2m，以及膜和卵巢发育调控基因vtg、apoa2b、fabp作为离子辐射敏感型基因；将雄性斑马鱼的细胞传导基因p4ha3、ahcyl2a、nt5c2l1、代谢相关基因cyp、ugt家族基因、铁死亡基因gpx4a、gsto2和gsta2，以及血红素结合基因hbba2、hbaa2、hbba1作为离子辐射敏感型基因；根据上述离子辐射敏感型基因的差异表达发生率判断是否相对于双亲未污染的对照组具有显著性；
20、样本为雄鱼时，若一级评价和二级评价均不具有显著性，则判断样本所处环境无辐射危害或者不具有生物危害性；
21、样本为雄鱼或雌鱼时，一级评价和二级评价任一具有显著性，则判断样本所处环境具有生物危害性且可能受到辐射危害；
22、样本为雄鱼或雌鱼时，一级评价和二级评价均具有显著性，可选择进行三级评价判断样本是否确为辐射危害；
23、样本为雌鱼时，若一级评价和二级评价均不具有显著性，则进行三级评价，若三级评价具有显著性，则判断样本所处环境可能受到辐射危害，若三级评价不具有显著性，则判断样本所处环境无辐射危害或者不具有生物危害性；
24、在同等条件下，优先选择斑马鱼雄鱼样本和未污染的雌鱼交配进行评价。
25、本专利技术的有益效果如下：本专利技术构建了离子辐射诱导生殖发育危害的斑马鱼模型，并全面检查了ir（电离辐射）对斑马鱼生殖健康的危害风险，并筛选了主要影响的生物标志物及分子靶点，也比较了ir对雌性和雄性生殖健康危害的敏感性差异，可应用于辐射诱导的生殖危害机制的研究和相关防护药品的研发；同时综合各项辐射影响指标及性别差异构建了完善的辐射危害评价体系，该辐射危害评价体系可用于进行生态监测或者生物预警，以评价样本所处环境的辐射影响。
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1.一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于，其构建方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育的动物模型，其特征在于：所述主要畸形表型包括胚胎头部发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊异常、游囊未张开、尾部畸形。
3.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括胚胎全身性的细胞凋亡，通过对胚胎组织进行吖啶橙染色分析确定细胞凋亡现象。
4.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括内脏区域氧化损伤，采用活性氧荧光染料染色分析确定内脏区域氧化损伤。
5.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括心血管发育畸形、胚胎炎症反应和神经发育畸形。
6.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：将雌性斑马鱼卵巢免疫应激基因myhz1、MHCII、mhc2d8、mhc2dab、b2m，以及膜和卵巢发育调控基因vtg、apoa2b、fabp作为离
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：
8.一种离子辐射危害评价体系，根据权利要求7所提供的动物模型构建。
9.根据权利要求8所述的一种离子辐射危害评价体系，包括雌性鱼类评价体系和雄性鱼类评价体系；
10.如权利要求9所述的一种离子辐射危害评价体系应用于生物预警，构建三级评价体系，来评估环境的离子辐射危害等级；
...【技术特征摘要】
1.一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于，其构建方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育的动物模型，其特征在于：所述主要畸形表型包括胚胎头部发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊异常、游囊未张开、尾部畸形。
3.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括胚胎全身性的细胞凋亡，通过对胚胎组织进行吖啶橙染色分析确定细胞凋亡现象。
4.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括内脏区域氧化损伤，采用活性氧荧光染料染色分析确定内脏区域氧化损伤。
5.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物模型，其特征在于：所述畸形表型还包括心血管发育畸形、胚胎炎症反应和神经发育畸形。
6.根据权利要求1所述的一种离子辐射诱导生殖发育危害的动物...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈将飞，刘晓冬，孙震恺，梅鹤，杨天鹏，马淑梅，瞿述根，尹玉莹，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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