【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于测定以及用于从此类测定除去干扰、尤其是生物素干扰的方法和组合物。
技术介绍
1、在现代的体外临床诊断中，各种方法被用于检测样品中的分析物。在诊断方法的一种形式(免疫测定法)中，使用一种或多种特异性结合物质。典型的实例是夹心免疫测定法(其中两种特异性结合物质(抗体或抗原)结合目标分析物)，和竞争性免疫测定法(其中目标分析物和该分析物的类似物竞争结合特异性结合物质)。在竞争性免疫测定法中，抗原经常也称为半抗原或配体。特异性结合物质之一通常附接至所谓的标记物或标签，其可以是原子(例如，放射性)，分子(例如，酶、荧光或发光化合物)或颗粒(磁性或乳胶)。该标记物允许通过对应于利用的标记物的各种检测方法来检测目标分析物。在竞争性测定法中，特异性结合物质或分析物类似物可以携带标记物。其他特异性结合物质通常与固体或可悬浮的基质(“固相”)共价或通过吸附结合。或者，可以将特异性结合物质连接至第二结合对的第一成员(例如，生物素)，而将第二结合对的第二成员(例如，链霉抗生物素蛋白)附接至固相。这允许特异性结合物质经由第二结合对相互作用(例如，生物素-链霉抗生物素蛋白)结合至固相。
2、半抗原、诸如生物素和荧光素经常用于与测定试剂中的抗体或其他小药物分子缀合。它们与包被在固体支持物上的大蛋白分子(例如，链霉抗生物素蛋白与生物素以及抗fitc抗体与荧光素)的紧密结合提供了将半抗原-ab或半抗原-药物固定在固体表面上的便利方法。由于生物素和链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白之间的结合力展示生物分子的最高常数之一，所以生物素非常经常
3、对于诊断测定的稳定性和再现性而言重要的是，固相结合的物质对其结合配偶体的结合能力并不随着时间变得受损害。这可能导致可靠性降低和测定灵敏度降低。可能导致这种损害(表现为不稳定性)的一种机制是一部分固相附接的物质流入周围的介质中。游离物质与固相附接的物质竞争结合靶标，并且由于其更快的扩散而通常具有显著的动力学优势。因此，有利的是将与试剂中的固相附接的物质竞争的游离物质的量保持恒定，优选非常接近于零。这将允许以稳定且可再现的方式灵敏地检测分析物。消除游离物质的优选方式是找到将消除解离的结合方法。由于其更大的键强度，与吸附缔合相反，共价键合可能是一种选择方法。然而，在许多情况下，由于各种原因，这可能是不可能的或不切实际的。
4、生物素已用作补充剂。例如，作为食品补充剂的生物素旨在促进健康的毛发和指甲生长并治疗其他疾病状况。因此，血清中生物素的量可能相当高。因为在许多诊断测定中使用分子、诸如生物素来包被固体支持物、结合抗体或半抗原类似物，所以血液中这些高水平的生物素可能干扰测定信号。因此，如果生物素以游离形式存在于样品溶液中，则其占据结合位点，并且因此可以导致测试结果错误。这在接受高剂量生物素的患者的情况下尤其关键。假定样品中超过30ng/ml的量的生物素已经导致歪曲的结果。在用生物素治疗的患者的情况下，可能出现最高达180ng/ml或甚至最高达1500ng/ml的血清值和约70ng/ml的持久值。
5、一种减轻这种干扰的方法涉及使用预制的试剂，即在试剂生产期间与链霉抗生物素蛋白包被的固体支持物预结合的生物素化的测定组分。由于链霉抗生物素蛋白和生物素之间的紧密结合和缓慢的解离速率，用患者样品中的进入生物素从链霉抗生物素蛋白替换已经结合的生物素不是一个主要过程。
6、第二种方式是增加固相支持物上的链霉抗生物素蛋白结合位点，使得除了生物素化的测定组分外，还有额外的可用于样品生物素分子的结合位点。第三种方式是上述两者的组合。但是，除非我们完全避免使用生物素-链霉抗生物素蛋白作为活性测定组分，否则上述方式均无法真正解决生物素干扰问题。
7、所有上述解决方案的一个主要问题是测定组分参与干扰预防，其可以容易地影响测定信号本身的幅度。在此类情况下使用的测定组分远离了用于检测意欲分析物的最佳条件。在us 8252605中提供了一些实例。
8、在美国专利5212063中公开了另一种方法。其公开了使用具有生物素结合核心和蛋白、碳水化合物或共聚物的覆盖层的聚合物颗粒以过滤通过游离生物素，但不过滤通过缀合至大分子的生物素。
9、这种方法对于一些测定形式可能是有效的，但颗粒的引入可能生成会干扰测定信号的额外吸光度。
技术实现思路
1、因此，本专利技术的一个目的是提供用于在测定中减轻此类物质、使得检测过程不受干扰的改进方法。因此，需要一种方法来除去生物素，使得不发生对测试的干扰。
2、与权利要求和/或说明书中的术语“包括”结合使用时，术语“一个/种(a)”或“一个/种(an)”的使用可意味着“一个/种(one)”，但它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。因此，术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“一种化合物”的提及可指一种或多种化合物、2种或更多种化合物、3种或更多种化合物、4种或更多种化合物或更大数目的化合物。术语“多个/种”是指“两个/种或更多个/种”。
3、术语“至少一个/种”的使用将被理解为包括一个/种以及多于一个/种的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100个/种等。术语“至少一个/种”可延伸多至100或1000或更多个/种，这取决于它所附接的术语；此外，100/1000的数量不视为限制性的，因为更高的限值也可产生令人满意的结果。此外，术语“x、y和z中的至少一个/种”的使用将被理解为包括单独的x，单独的y和单独的z，以及x、y和z的任何组合。序数术语(即，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)的使用仅用于区分两个或更多个事项的目的，并且不意味着暗示例如一个事项相对于另一事项的任何顺序或次序或重要性、或任何添加次序。
4、在权利要求中使用术语“或”用于意指包括性的“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或者除非替代方案是互相排斥的。例如，以下任一种都满足条件“a或b”：a为真(或存在)且b为假(或不存在)，a为假(或不存在)且b为真(或存在)，并且a和b两者均为真(或存在)。
5、如本文所用，对“一个实施方案(one embodiment)”、“一个实施方案(anembodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(anexample)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限定性的。
6、在整个申请中，术语“约”用于指示，值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方法的误差的固有变化，或本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.减少测定中的游离-半抗原的干扰的方法，所述方法包括：
2.权利要求1的减少干扰的方法，其中所述修饰的抗半抗原sbp的特异性游离-半抗原结合的解离速率特征比所述修饰的抗半抗原sbp的特异性游离-半抗原结合的结合速率特征更慢。
3.权利要求1的减少干扰的方法，其中所述分子复合物包含使用柔性接头与空间阻碍聚合物缀合的半抗原-类似物以及与半抗原-类似物缀合物互连的抗半抗原sbp，所述半抗原-类似物具有与所述游离-半抗原相同或更弱的对抗半抗原sbp的特异性结合特征，所述空间阻碍聚合物阻止测定溶液中的半抗原-测定缀合物接近抗半抗原sbp上的特异性半抗原结合位点，且其中测定溶液中的游离-半抗原优选结合抗半抗原sbp特异性结合位点。
4.权利要求1的减少干扰的方法，其中所述半抗原的测定-缀合物和所述抗半抗原的测定-缀合物分别选自由以下组成的测定组分的组以及该组中的两种或更多种的组合：抗体、抗原、所测试的分析物、标记物、标记酶、受体。
【技术特征摘要】
1.减少测定中的游离-半抗原的干扰的方法，所述方法包括：
2.权利要求1的减少干扰的方法，其中所述修饰的抗半抗原sbp的特异性游离-半抗原结合的解离速率特征比所述修饰的抗半抗原sbp的特异性游离-半抗原结合的结合速率特征更慢。
3.权利要求1的减少干扰的方法，其中所述分子复合物包含使用柔性接头与空间阻碍聚合物缀合的半抗原-类似物以及与半抗原-类似物缀合物互连的抗半抗原sbp，所述半抗原-类似物具有与所述游离...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·魏，
申请(专利权)人：美国西门子医学诊断股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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