【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析，特别涉及一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体及应用。
技术介绍
1、苯唑草酮(topramezone)是一种由巴斯夫公司研制的苯甲酯吡唑酮类除草剂，属于新型4-羟基苯丙酮酸双加氧酶抑制剂。它可以有效地防除玉米地中的一年生禾本科杂草和阔叶杂草，具有高效和安全性高的特点。苯唑草酮的分子式为c16h17n3o5s，相对分子质量为363.388。苯唑草酮于2005年初在美国申请登记，2006年首次在加拿大登记，用于玉米田苗后除草。此后，在全球多个国家和地区获得登记和上市。作为除草剂，苯唑草酮的作用原理是抑制靶植物中的酶——4-羟苯基丙酮酸双加氧酶(4-hppd)，导致生长中的芽组织中的叶绿素损失和坏死，从而使杂草白化死亡。苯唑草酮在土壤中的残留具有持久性，半衰期大于125天。不当使用可能导致环境中的持续污染，并通过农作物的秸秆和籽粒转移到动物体内，最终可能危害人类健康。苯唑草酮会抑制哺乳动物系统中的4-hppd酶，可能导致血清中l-赖氨酸水平升高，酪氨酸水平的升高，会引起动物患有慢性角膜炎。此外，其酸性代谢产物m670h05可能引起细胞增殖和细胞腺瘤的癌变症状。为确保食品安全，不同国家和组织已经确定了玉米、猪、牛和家禽中苯唑草酮的最大残留限量(mrl)，范围为0.01至0.8mg/kg。
2、苯唑草酮的残留检测方法包括高效液相色谱法(hplc)、超高效液相色谱法(uplc)、液相色谱质谱联用法(lc-ms)等。这些方法虽然灵敏度和准确度高，但需要昂贵的仪器设备和复杂的操作过程。
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1、本专利技术的主要目的是提出一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体及应用，旨在通过合成免疫原和包被原，制备特异性较强的单克隆抗体，并建立相应的酶联免疫检测方法，以实现对苯唑草酮的快速、大批量和低成本检测。
2、为实现上述目的，第一方面，本专利技术提出一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体，所述单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体半抗原由苯唑草酮与4-溴丁酸乙酯反应制得，结构如式i所示：
3、
4、免疫原由免疫半抗原和牛血清白蛋白(bsa)反应得到，包被原由包被半抗原和鸡卵清白蛋白(ova)反应得到。
5、本专利技术采用半抗原为免疫半抗原，与载体蛋白bsa偶联后得到免疫原并将其免疫小鼠，与载体蛋白ova偶联后得到包被原，使用elisa方法进行血清检测，取免疫效果好的小鼠脾脏与瘤细胞融合，筛选获得杂交瘤细胞株，最后使用腹水诱生获得单克隆抗体。
6、第二方面，本专利技术提出一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体在制备检测苯唑草酮的试剂盒中的应用。
7、第三方面，本专利技术提出一种试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体。
8、其中，所述试剂盒是单特异性检测苯唑草酮的酶联免疫试剂盒。
9、第四方面，本专利技术提出一种单特异性检测食品中苯唑草酮残留的酶联免疫方法，所述方法采用如上所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体，所述方法包括以下步骤：
10、步骤s10，将所述包被原稀释后包被固相载体；
11、步骤s20，将所述单克隆抗体稀释后配制成单克隆抗体工作液；
12、步骤s30，用有机溶剂提取待测样品，并配置成待测样品溶液；
13、步骤s40，向所述固相载体中加入所述待测样品溶液和所述单克隆抗体工作液，并进行孵育；
14、步骤s50，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠igg(酶标二抗)并进行孵育；
15、步骤s60，加入底物液和终止液显色，用酶标仪测定od值并计算苯唑草酮的含量。
16、其中，所述包被原稀释后的浓度为2μg/ml，所述单克隆抗体工作液的浓度为1μg/ml，所述单克隆抗体、酶标二抗和底物液的显色时间分别为40min、35min和15min。
17、本专利技术的有益效果是：
18、1、特异性：本专利技术单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体能对苯唑草酮实现单特异性检测，与其他同类型hppd型除草剂(包括磺酰草吡唑，异恶唑草酮，吡唑特，环磺酮，磺草酮，硝草酮)均无交叉反应。
19、2、灵敏度：本专利技术单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体对苯唑草酮具有很高的识别灵敏度，通过优化检测条件，进一步提高了检测灵敏度，最终使ic50值达到了0.604μg/l，检测玉米、猪肉、牛肉和羊肉中的最低检测限达到了0.153μg/kg。
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1.一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体，其特征在于，所述单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体半抗原由苯唑草酮与4-溴丁酸乙酯反应制得，结构如式I所示：
2.一种如权利要求1所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体在制备检测苯唑草酮的试剂盒中的应用。
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是单特异性检测苯唑草酮的酶联免疫试剂盒。
5.一种单特异性检测食品中苯唑草酮残留的酶联免疫方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求1所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体，所述方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的单特异性检测食品中苯唑草酮残留的酶联免疫方法，其特征在于，所述包被原稀释后的浓度为2μg/mL，所述单克隆抗体工作液的浓度为1μg/mL，所述单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG和底物液的显色时间分别为40min、35min和15min。
【技术特征摘要】
1.一种单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体，其特征在于，所述单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体半抗原由苯唑草酮与4-溴丁酸乙酯反应制得，结构如式i所示：
2.一种如权利要求1所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体在制备检测苯唑草酮的试剂盒中的应用。
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的单特异性抗苯唑草酮的单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是单特异性检测苯唑草酮的酶联免疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭大鹏，韩世赟，王佳灿，汪奕町，潘晓明，张林伟，肖佳旭，杨鸿飞，
申请(专利权)人：湖北江夏实验室，
类型：发明
国别省市：
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