【技术实现步骤摘要】
本公开涉及神经调节蛋白1(nrg1)融合物的领域、检测该融合物的方法、鉴定或诊断具有该融合物的患者的方法、以及治疗包含nrg1融合物的癌症、肿瘤或异常细胞的方法。此外，本公开涉及用于治疗患有包含nrg1融合物的erbb-2/erbb-3阳性癌症的受试者的治疗性(人类)化合物的领域。
技术介绍
1、跨膜nrg1同种型的胞外结构域的蛋白分解处理会释放可溶性因子。hrg1-β1是由nrg1基因编码的蛋白质之一。nrg1含有ig结构域和egf样结构域，该egf样结构域对于直接结合至受体酪氨酸激酶erbb-3和erbb-4是必要的。nrg1基因和同种型已知有许多不同的别名，诸如：神经调节蛋白1(neuregulin 1)；pro-nrg1；hrga；smdf；hgl；ggf；ndf；nrg1内切转录2(intronic transcript 2，不编码蛋白质)；heregulin,α(45kd,erbb2p185-活化子)；乙酰胆碱受体诱导活性(acetylcholine receptor-inducing activity)；原神经调节蛋白-1(pro-neuregulin-1)，其是膜结合同种型；感觉和运动神经元衍生因子；新分化因子(neudifferentiation factor)；神经胶质生长因子2；nrg1-it2；mstp131；mst131；aria；ggf2；hrg1；和hrg。nrg1基因的外部id为hgnc:7997；entrez gene:3084；ensembl:ensg00000157168；omim:1424
2、nrg1同种型是通过选择性剪接制造，且包括跨膜、外部膜结合、脱落(shed)、分泌或胞内形式(falls,exp cell res 284:14-30,2003；hayes和gullick,j.mammary glandbiol neoplasia13:205-214,2008)。它们结合至erbb-3或erbb-4，这可理解为促进与erbb-2(her2)形成异源二聚体。虽然通常将nrg1编码蛋白视为有丝分裂原(mitogen)，但其也可强力促进细胞凋亡：特别是在细胞中表达nrg1可造成该表达细胞的细胞凋亡(参见weinstein等人,oncogene17:2107-2113,1998)。
3、鉴于各种不同具有nrg1融合物的肿瘤类型，基于新的融合配偶体以及nrg1与融合配偶体之间的新的断点，需要有更快且更稳健的诊断方法，且需要鉴定前所未知的nrg融合物的方法。
技术实现思路
1、本公开一般地提供了涉及nrg1和新型融合配偶体的融合物，以及由其所编码的多肽融合物。本公开提供了涉及nrg1和vapb、nrg1和pvalb、nrg1和daam1、nrg1和asph、nrg1和zfat或者nrg1和dscaml1作为新型融合配偶体的融合物，在此分别通常指vapb-nrg1、pvalb-nrg1、daam1-nrg1、asph-nrg1、zfat-nrg1和dscaml1-nrg1。更特别的是，本公开的该方面涉及：
2、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的vapb核酸序列或vapb核酸序列的一部分的多核苷酸，或
3、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的pvalb核酸序列或pvalb核酸序列的一部分的多核苷酸，或
4、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的daam1核酸序列或daam1核酸序列的一部分的多核苷酸，或
5、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的asph核酸序列或asph核酸序列的一部分的多核苷酸，或
6、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的zfat核酸序列或zfat核酸序列的一部分的多核苷酸，或
7、包含与nrg1核酸序列或nrg1核酸序列的一部分融合的dscaml1核酸序列或dscaml1核酸序列的一部分的多核苷酸。
8、优选地，该vapb核酸序列包含序列seq id no:17-23中的任一者或seq id no:17-23中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。优选地，该nrg1核酸序列包含序列seq id no:125-138中的任一者或序列seq id no:125-138中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。
9、替代性地或另外地，本公开提供一种包含vapb的外显子1或外显子1的等位基因变体的一部分且其与nrg1的外显子2或外显子2的等位基因变体的一部分融合的多核苷酸。优选地，vapb的外显子1包含seq id no:17或由其组成，且其等位基因变体优选为seq id no:17的变体。nrg1的外显子2包含seq id no:126或由其组成，且其等位基因变体优选为seqid no:126的变体。
10、优选地，该pvalb核酸序列包含序列seq id no:439-444中的任一者或seq id no:439-444中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。优选地，该nrg1核酸序列包含序列seq id no:125-138中的任一者或序列seq id no:125-138中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。
11、替代性地或另外地，本公开提供一种包含pvalb的外显子4或外显子4的等位基因变体的一部分且其与nrg1的外显子6或外显子6的等位基因变体的一部分融合的多核苷酸。优选地，pvalb的外显子4包含seq id no:422或由其组成，且其等位基因变体优选为seq idno:422的变体。nrg1的外显子6包含seq id no:130或由其组成，且其等位基因变体优选为seq id no:130的变体。
12、优选地，该daam1核酸序列包含序列seq id no:606-631中的任一者或seq id no:606-631中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。优选地，该nrg1核酸序列包含序列seq id no:125-138中的任一者或序列seq id no:125-138中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。
13、替代性地或另外地，本公开提供一种包含daam1的外显子1或外显子1的等位基因变体的一部分且其与nrg1的外显子1或外显子1的等位基因变体的一部分融合的多核苷酸。优选地，daam1的外显子1包含seq id no:606或由其组成，且其等位基因变体优选为seq idno:606的变体。nrg1的外显子1包含seq id no:125或由其组成，且其等位基因变体优选为seq id no:125的变体。
14、优选地，该asph核酸序列包含序列seq id no:637-662中的任一者或seq id no:637-662中的任一者的等位基因变体(的一部分)或由其组成。优选地，该nrg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多核苷酸，包含：
2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中
3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其中所述PVALB、DAAM1、ZFAT或DSCAML1核酸序列(或其等位基因变体)位于NRG1核酸序列(或其等位基因变体)的5’端。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多核苷酸，其中所述编码NRG1蛋白序列(或其等位基因变体)的核酸包含或编码NRG1的EGF样结构域，优选为根据SEQ ID NO:163的EGF样结构域。
7.一种多核苷酸，包含：
8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中VAPB的外显子1为SEQ ID NO:17的外显子；CADM1的外显子7为SEQ ID NO:39的外显子；CD44的外显子5为SEQ ID NO:65的外显子；SLC3A2的外显子1为SEQ ID NO:103的外显子；VTCN1的外显子2为SEQ ID NO:169的外显子；CDH1的外显子11为SEQ
9.根据权利要求7或8中任一项所述的多核苷酸，其中：
10.根据权利要求7至9中任一项所述的多核苷酸，其中：
11.根据权利要求7至10中任一项所述的多核苷酸，其中：
12.根据权利要求7至11中任一项所述的多核苷酸，其中：
13.根据权利要求7至12中任一项所述的多核苷酸，其中：
14.根据权利要求7至12中任一项所述的多核苷酸，其中：
15.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被分离或纯化。
16.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述融合物中的任一者为框内融合物。
17.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸为哺乳动物多核苷酸，优选为人类多核苷酸。
18.一种多肽融合物，其通过根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸编码。
19.一种载体，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸。
20.一种重组宿主细胞，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求19所述的载体。
21.一种制造根据权利要求18所述的多肽融合物的方法，其包括将根据权利要求20所述的宿主细胞维持在适合所述宿主细胞所包含的多核苷酸表达的条件下，从而表达所述多核苷酸且产生多肽融合物，随后分离或纯化所述多肽融合物。
22.一种制造重组宿主细胞的方法，其包括将根据权利要求19所述的载体导入宿主细胞内。
23.一种检测测定法，其包含用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物的存在的核酸探针、引物或引物对。
24.一种用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物的核酸探针、引物或引物对。
25.根据权利要求24所述的核酸探针、引物或引物对，其长度为10至40个核苷酸。...
【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸，包含：
2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中
3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其中所述pvalb、daam1、zfat或dscaml1核酸序列(或其等位基因变体)位于nrg1核酸序列(或其等位基因变体)的5’端。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多核苷酸，其中所述编码nrg1蛋白序列(或其等位基因变体)的核酸包含或编码nrg1的egf样结构域，优选为根据seq id no:163的egf样结构域。
7.一种多核苷酸，包含：
8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中vapb的外显子1为seq id no:17的外显子；cadm1的外显子7为seq id no:39的外显子；cd44的外显子5为seq id no:65的外显子；slc3a2的外显子1为seq id no:103的外显子；vtcn1的外显子2为seq id no:169的外显子；cdh1的外显子11为seq id no:198的外显子；cxadr的外显子1为seq id no:219的外显子；gtf2e2的外显子2为seq id no:236的外显子；csmd1的外显子23为seq id no:279的外显子；ptn的外显子4为seq id no:318的外显子；st14的外显子11为seq id no:342的外显子；thbs1的外显子9为seq id no:386的外显子；agrn的外显子12为seq id no:416的外显子；pvalb的外显子4为seq id no:442的外显子；slc3a2的外显子2为seq id no:457的外显子；app的外显子14为seq id no:501的外显子；wrn的外显子33为seq id no:562的外显子；daam1的外显子1为seq id no:606的外显子；asph的外显子22为seq id no:658的外显子；notch2的外显子6为seq id no:700的外显子；cd74的外显子2为seq id no:720的外显子；sdc4的外显子2为seq id no:746的外显子；cd44的外显子5为seq id no:65的外显子；slc4a4的外显子14为seq id no:780的外显子；sdc4的外显子4为seq id no:748的外显子；zfat的外显子12为seq id no:841的外显子；dscaml1的外显子3为seq id no:872的外显子，并且nrg1的外显子1、2、5和6分别为seq id no:125、126、129和130的外显子。
9.根据权利要求7或8中任一项所述的多核苷酸，其中：
10.根据权利要求7至9中任一项所述的多核苷酸，其中：
11.根据权利要求7至10中任一项所述的多核苷酸，其中：
12.根据权利要求7至11中任一项所述的多核苷酸，其中：
13.根据权利要求7至12中任一项所述的多核苷酸，其中：
14.根据权利要求7至12中任一项所述的多核苷酸，其中：
15.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被分离或纯化。
16.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述融合物中的任一者为框内融合物。
17.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸为哺乳动物多核苷酸，优选为人类多核苷酸。
18.一种多肽融合物，其通过根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸编码。
19.一种载体，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸。
20.一种重组宿主细胞，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求19所述的载体。
21.一种制造根据权利要求18所述的多肽融合物的方法，其包括将根据权利要求20所述的宿主细胞维持在适合所述宿主细胞所包含的多核苷酸表达的条件下，从而表达所述多核苷酸且产生多肽融合物，随后分离或纯化所述多肽融合物。
22.一种制造重组宿主细胞的方法，其包括将根据权利要求19所述的载体导入宿主细胞内。
23.一种检测测定法，其包含用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物的存在的核酸探针、引物或引物对。
24.一种用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物的核酸探针、引物或引物对。
25.根据权利要求24所述的核酸探针、引物或引物对，其长度为10至40个核苷酸。
26.根据权利要求24或25所述的核酸探针、引物或引物对，其中所检测到的融合物包含：
27.根据权利要求24至26中任一项所述的核酸探针、引物或引物对，其中：
28.根据权利要求27所述的核酸探针、引物或引物对，其中：
29.根据权利要求27所述的核酸探针、引物或引物对，其中：
30.一种用于原位杂交测定法以检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物的第一核酸探针和第二核酸探针，
31.一种用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物所编码的多肽的第一抗体或第一与第二抗体组。
32.一种包含用于检测根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物所编码的多肽的存在的第一抗体或第一与第二抗体组的检测测定法，其中所述第一抗体或第一与第二抗体组优选为根据权利要求31所述的第一抗体或第一与第二抗体组。
33.根据权利要求31所述的第一抗体或第一与第二抗体组，或根据权利要求32所述的检测测定法，其中所述第一抗体结合选自vapb-nrg1、cadm1-nrg1、cd44-nrg1、slc3a2-nrg1、vtcn1-nrg1、cdh1-nrg1、cxadr-nrg1、gtf2e2-nrg1、csmd1-nrg1、ptn-nrg1、st14-nrg1、thbs1-nrg1、agrn-nrg1、pvalb-nrg1、app-nrg1、wrn-nrg1、asph-nrg1、notch2-nrg1、cd74-nrg1、sdc4-nrg1、slc4a4-nrg1、zfat-nrg1或dscaml1-nrg1的多肽融合物，并且所述第一与第二抗体组分别结合vapb与nrg1、或cadm1与nrg1、或cd44与nrg1、slc3a2与nrg1、vtcn1与nrg1、cdh1与nrg1、cxadr与nrg1、gtf2e2与nrg1、csmd1与nrg1、ptn与nrg1、st14与nrg1、thbs1与nrg1、agrn与nrg1、pvalb与nrg1、app与nrg1、wrn与nrg1、asph与nrg1、notch2与nrg1、cd74与nrg1、sdc4与nrg1、slc4a4与nrg1、zfat与nrg1、或dscaml1与nrg1。
34.一种用于在样本中鉴定根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸融合物、或由其所编码的多肽的方法，所述方法包括检验获自受试者的样本以检测所述样本中所述融合物的存在。
...【专利技术属性】
技术研发人员：埃内斯托·伊萨克·沃瑟曼，玉龙·吉尔斯·拉默特斯范布伦，
申请(专利权)人：美勒斯公司，
类型：发明
国别省市：
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