【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体涉及一种尿转铁蛋白检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
1、转铁蛋白是肝脏内形成的蛋白，分子量比较大，一般不从肾小球基底膜滤过，如果肾脏早期损伤且肾小球受到损害是使滤过膜的通透性增加，血液中的转铁蛋白则可以通过受损的基底膜排出到体外，在尿液中就可以检测出来。尿转铁蛋白增高，则证实肾脏出现损害而且这种损害比较严重，尿转铁蛋白的定量检测能更敏感地反映肾小球电荷屏障受损情况。
2、目前，检测尿转铁蛋白的方法包括酶联免疫法、免疫比浊法、胶体金法以及放射免疫法等，其中，酶联免疫法灵敏度低，胶体金法除了灵敏度低以外，还易出现假阳性，而放射免疫法易造成发射性污染同时会对人体造成损伤，因此，相比较而言，免疫比浊法由于其较高的稳定性和重复性等被广泛应用，现有技术如专利cn116359513a公开了一种用于检测尿转铁蛋白的试剂盒，包括：试剂1和试剂2；其中，试剂1包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、曲拉通x-100、牛血清白蛋白、液体生物防腐剂；试剂2包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、抗人转铁蛋白抗体乳胶颗粒、牛血清白蛋白。另外，试剂2还包括海藻糖、二氢槲皮素和羟脯氨酸。该试剂盒检测的重复性、均匀度均较优，且线性范围相对较广。但该专利技术重点考察了试剂盒的重复性、批间差以及线性范围，但未重点探究试剂盒的精密度以及稳定性等。
3、再如专利cn105044352a公开了一种尿转铁蛋白免疫比浊试剂及其制备方法，该试剂盒包括固定在同一容器内的冻干r1试剂和r2试剂，冻干r1试剂和r2试剂是由液态r1试剂和r2试剂加入赋
4、针对现有技术存在的问题，寻找一种精密度以及稳定性等整体性能均优异的尿转铁蛋白检测试剂盒及制备方法十分必要。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种尿转铁蛋白检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)及制备方法，试剂盒在检测尿转铁蛋白方面具有优异的精密度和稳定性。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种尿转铁蛋白检测试剂盒，包括试剂r1和试剂r2；
4、所述试剂r1包括：柠檬酸缓冲液、叠氮钠、聚乙二醇和表面活性剂a；
5、所述试剂r2包括：柠檬酸缓冲液、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒、叠氮钠、表面活性剂b和稳定剂；
6、所述表面活性剂a包括失水山梨糖醇脂肪酸酯，所述表面活性剂b包括吐温-20和月桂醇聚氧乙烯醚，所述稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠、甘露醇和富兰克胶。
7、进一步地，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000。
8、进一步地，所述试剂r1包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/l、叠氮钠1-3g/l、聚乙二醇5-50g/l和表面活性剂a 5-20g/l。
9、优选地，所述试剂r1包括：柠檬酸缓冲液50mmol/l、叠氮钠1g/l、聚乙二醇20g/l和表面活性剂a10g/l。
10、进一步地，所述试剂r2包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/l、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒1-4g/l、叠氮钠1-3g/l、表面活性剂b10-30g/l和稳定剂10-50g/l。
11、优选地，所述试剂r2包括：柠檬酸缓冲液50mmol/l、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒2g/l、叠氮钠1g/l、表面活性剂b 20g/l和稳定剂20g/l。
12、进一步地，所述的尿转铁蛋白检测试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和质控品均包括磷酸盐缓冲液、叠氮钠和trf抗原(尿转铁蛋白)。
13、进一步地，所述校准品包括磷酸盐缓冲液40mmol/l、叠氮钠2g/l和trf抗原(尿转铁蛋白)0-200mmol/l，所述质控品包括磷酸盐缓冲液40mmol/l、叠氮钠2g/l和trf抗原(尿转铁蛋白)5-100mmol/l。
14、进一步地，所述表面活性剂b包括重量比为(3-6):(1-2)的吐温-20和月桂醇聚氧乙烯醚。
15、优选地，所述表面活性剂b包括重量比为4:1的吐温-20和月桂醇聚氧乙烯醚。
16、进一步地，所述稳定剂包括重量比为(1-3):(2-4):1的乙二胺四乙酸二钠、甘露醇和富兰克胶。
17、优选地，所述稳定剂包括重量比为2:2:1的乙二胺四乙酸二钠、甘露醇和富兰克胶。
18、进一步地，本专利技术还提供了上述的尿转铁蛋白检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)的制备方法，包括以下步骤：
19、配制试剂r1：将柠檬酸缓冲液、叠氮钠、聚乙二醇和表面活性剂a混合即得；
20、配制试剂r2：将柠檬酸缓冲液、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒、叠氮钠、表面活性剂b和稳定剂混合即得。
21、在一些具体的实施方式中，所述尿转铁蛋白检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)的制备方法，包括以下步骤：
22、配制试剂r1：将柠檬酸缓冲液、叠氮钠、聚乙二醇和失水山梨糖醇脂肪酸酯混合即得；
23、配制试剂r2：将柠檬酸缓冲液、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒、叠氮钠、吐温-20、月桂醇聚氧乙烯醚、乙二胺四乙酸二钠、甘露醇和富兰克胶混合即得。
24、进一步地，所述的制备方法还包括标准品和质控品的配置，具体方法为将标准品或质控品中的各原料混合即得。
25、本专利技术所取得的技术效果是：
26、本专利技术的试剂盒采用乳胶增强免疫比浊法，用于体外定量测定人尿液中转铁蛋白的含量，辅助临床诊断，具体地，在反应体系中，转铁蛋白试剂是大小均一的聚苯乙烯乳胶颗粒悬液，颗粒表面包被有人转铁蛋白专一性的lgg，当含有转铁蛋白的样本与之混合时，发生明显的凝聚反应，通过测定570nm处吸光度的变化，即可计再出样品中转铁蛋白的含量，此外，本专利技术进一步通过优化试剂盒中的双试剂r1和r2，最终得到的试剂盒在检测尿转铁蛋白方面具有优异的精密度和稳定性。
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1.一种尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2；
2.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/L、叠氮钠1-3g/L、聚乙二醇5-50g/L和表面活性剂A 5-20g/L。
3.根据权利要求2所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1包括：柠檬酸缓冲液50mmol/L、叠氮钠1g/L、聚乙二醇20g/L和表面活性剂A10g/L。
4.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/L、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒1-4g/L、叠氮钠1-3g/L、表面活性剂B10-30g/L和稳定剂10-50g/L。
5.根据权利要求4所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2包括：柠檬酸缓冲液50mmol/L、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒2g/L、叠氮钠1g/L、表面活性剂B20g/L和稳定剂20g/L。
6.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：还包括
7.根据权利要求6所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述校准品包括磷酸盐缓冲液40mmol/L、叠氮钠2g/L和TRF抗原0-200mmol/L，所述质控品包括磷酸盐缓冲液40mmol/L、叠氮钠2g/L和TRF抗原5-100mmol/L。
8.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂B包括重量比为(3-6):(1-2)的吐温-20和月桂醇聚氧乙烯醚。
9.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂包括重量比为(1-3):(2-4):1的乙二胺四乙酸二钠、甘露醇和富兰克胶。
10.如权利要求1-9任一项所述的尿转铁蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括试剂r1和试剂r2；
2.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂r1包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/l、叠氮钠1-3g/l、聚乙二醇5-50g/l和表面活性剂a 5-20g/l。
3.根据权利要求2所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂r1包括：柠檬酸缓冲液50mmol/l、叠氮钠1g/l、聚乙二醇20g/l和表面活性剂a10g/l。
4.根据权利要求1所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂r2包括：柠檬酸缓冲液40-60mmol/l、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒1-4g/l、叠氮钠1-3g/l、表面活性剂b10-30g/l和稳定剂10-50g/l。
5.根据权利要求4所述的尿转铁蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂r2包括：柠檬酸缓冲液50mmol/l、包被有兔抗人转铁蛋白抗体的胶乳颗粒2g/l、叠氮钠1g/l、...
【专利技术属性】
技术研发人员：连国军，郑睿颖，连烨，陶国锋，连梦清，
申请(专利权)人：浙江夸烨生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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