System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法及其应用技术_技高网
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一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法及其应用技术

技术编号:43242720 阅读:1 留言:0更新日期:2024-11-05 17:26
本发明专利技术公开了一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法及其应用,包括如下步骤:(1)采用超临界二氧化碳萃取预处理的葵花籽中的油脂,得到葵花籽饼粕;(2)将葵花籽饼粕与氯化钠溶液混合,溶解,混合液经过滤、离心,取上清液即为所述粗酶液;(3)将上清液在4℃下不断搅拌,缓慢加入硫酸铵,沉淀其中的蛋白质并离心分离,沉淀的蛋白质经透析、调节pH、离心、真空干燥,制得粗酶提取物;(4)将粗酶提取物用水溶解,之后采用离子交换层析法纯化粗酶液中的凝乳酶,经真空干燥得到纯化后的凝乳酶。本发明专利技术方法具有条件温和、提取率高、凝乳酶活性高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品酶制取与应用,尤其是涉及一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法及其应用


技术介绍

1、葵花籽与大豆、花生和油菜籽并列,是全球四大油料作物之一。据统计,全球葵花籽的总产量已超4500万吨。在我国,葵花籽的种植分布广泛,主要集中于东北、西南及内蒙古地区,中部和东南部地区也有少量种植,年产量已突破200万吨。油料用葵花籽仁中,油脂含量高达45%~55%,蛋白质含量约为20%~30%。葵花籽蛋白的氨基酸组成均衡,且抗营养因子含量较低,被视为一种具有高营养价值的优质蛋白来源。

2、凝乳酶能够特异性地水解κ-酪蛋白中的phe 105-me 106之间的肽键,在钙离子作用下交联酪蛋白形成凝固的乳。

3、传统的压榨法由于其加工条件剧烈,会导致饼粕中的蛋白质发生变性,影响对植物蛋白的进一步加工利用;经有机溶剂萃取法提油后的饼粕会有溶剂残留的风险,高温脱溶的过程也会对饼粕中的蛋白质产生影响。超临界二氧化碳萃取是一种温和的油脂提取方法,通常的提取温度在35℃~50℃之间,具有提油率高、提取温度低、热敏性成分损失少、对环境污染极低等优点。经超临界二氧化碳萃取后的饼粕残油率极低(<2%),且无需经过脱溶步骤,可以有效保护凝乳酶在内的各种功能性蛋白质成分。


技术实现思路

1、针对现有技术存在的上述问题,本专利技术提供了一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法及其应用。本专利技术方法具有条件温和、提取率高、凝乳酶活性高的优点。

2、本专利技术的技术方案如下:

3、本专利技术的第一个目的是提供一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法,所述方法包括如下步骤:

4、(1)制备葵花籽饼粕,采用超临界二氧化碳萃取预处理的葵花籽中的油脂,得到葵花籽饼粕;

5、(2)提取粗酶液,将步骤(1)制得的葵花籽饼粕与氯化钠溶液混合,溶解,混合液经过滤、离心,取上清液即为所述粗酶液;

6、(3)制备粗酶提取物,将步骤(2)制得的上清液在4℃下不断搅拌,缓慢加入硫酸铵,沉淀其中的蛋白质并离心分离,沉淀的蛋白质经透析、调节ph、离心、真空干燥,制得粗酶提取物;

7、(4)纯化凝乳酶,将步骤(3)制得的粗酶提取物用水溶解,之后采用离子交换层析法纯化粗酶液中的凝乳酶,经真空干燥得到纯化后的凝乳酶。

8、在本专利技术的一个实施例中,步骤(1)中,预处理的方法为:将葵花籽粉碎、筛分、干燥,制得预处理的葵花籽;

9、在本专利技术的一个实施例中,步骤(1)中,预处理的方法为:将葵花籽粉碎至20-40目(粒径380~830μm),50~70℃下干燥至含水量低于2%,制得预处理的葵花籽;

10、在本专利技术的一个实施例中,步骤(1)中,超临界二氧化碳萃取条件为:萃取压力25-45mpa、萃取温度35-55℃、二氧化碳流量22-28l/h。

11、在本专利技术的一个实施例中,葵花籽饼粕中的残油率低于2%。

12、在本专利技术的一个实施例中,步骤(2)中,氯化钠溶液的浓度为0.2-0.4mol/l;葵花籽饼粕与氯化钠溶液的质量体积比为1:5-15g/ml。

13、在本专利技术的一个实施例中,步骤(2)中,溶解的条件为:30-40℃下搅拌1-3h,使其中的蛋白质溶解。

14、在本专利技术的一个实施例中,步骤(2)中,过滤采用80目(粒径180μm)纱布。

15、在本专利技术的一个实施例中,步骤(2)中,离心条件为4000r/min、30min。

16、在本专利技术的一个实施例中,步骤(3)中,硫酸铵的用量为使其浓度为0.2~0.5g/ml。

17、在本专利技术的一个实施例中,步骤(3)中,透析的方法为:使用3.5kda的透析袋透析24~48h。

18、在本专利技术的一个实施例中,步骤(3)中,调节透析后蛋白质溶液的ph为5.0,并在50℃下恒温10min,使杂蛋白聚集沉淀,离心去除杂蛋白得到含凝乳酶的粗酶液,之后经真空干燥,得到所述粗酶提取物。

19、在本专利技术的一个实施例中,步骤(3)中,两次离心条件均为4000r/min、30min。

20、在本专利技术的一个实施例中,步骤(3)中,真空干燥条件为:将离心后的沉淀在-80℃下冷冻8h,在0.1mpa、-50℃下冷冻干燥48h。

21、在本专利技术的一个实施例中,步骤(4)中,粗酶提取物与水的质量体积比为0.01~0.05:1g/ml。

22、在本专利技术的一个实施例中,步骤(4)中,离子交换层析法采用阴离子交换柱source15q、tris-hcl作为缓冲液,梯度洗脱含有凝乳酶的蛋白质。

23、在本专利技术的一个实施例中,步骤(4)中,真空干燥条件为:将离心后的沉淀在-80℃下冷冻8h,在0.1mpa、-50℃下冷冻干燥48h。

24、本专利技术的第二个目的是提供上述方法制得凝乳酶的应用,用于制备干酪。

25、花籽蛋白来源的凝乳酶最适ph约为5.5,等电点ph为4.3-4.7,在55-60℃可达最大酶反应活性,与动物来源的凝乳酶具有较大差异(最大酶反应活性约为37℃),可利用其性质针对性分离葵花籽蛋白中的凝乳酶。

26、本专利技术有益的技术效果在于:

27、本专利技术凝乳酶的得率高,得率为2.8-3.1%,超临界二氧化碳萃取法有效避免了凝乳酶的损失,提高了提取凝乳酶的得率。

28、本专利技术凝乳酶活力高,酶活力为41-45su,超临界二氧化碳萃取法避免了凝乳酶的失活,提升了葵花籽的经济价值;

29、本专利技术为植物凝乳酶的提取提供了一种新途径,具有良好的普适性和广泛的商业应用价值。

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【技术保护点】

1.一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,预处理的方法为:将葵花籽粉碎、筛分、干燥,制得预处理的葵花籽。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,超临界二氧化碳萃取条件为:萃取压力25-45MPa、萃取温度35-55℃、二氧化碳流量22-28L/h。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,葵花籽饼粕中的残油率低于2%。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,氯化钠溶液的浓度为0.2-0.4mol/L;葵花籽饼粕与氯化钠溶液的质量体积比为1:5-15g/mL。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,硫酸铵的用量为使其浓度为0.2~0.5g/mL。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,透析的方法为:使用3.5kDa的透析袋透析24~48h;调节透析后蛋白质溶液的pH为5.0,并在50℃下恒温10min,使杂蛋白聚集沉淀,离心去除杂蛋白得到含凝乳酶的粗酶液,之后经真空干燥,得到所述粗酶提取物。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中,粗酶提取物与水的质量体积比为0.01~0.05:1g/mL。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中,离子交换层析法采用阴离子交换柱Source15Q、Tris-HCl作为缓冲液,梯度洗脱含有凝乳酶的蛋白质。

10.一种权利要求1所述方法制得凝乳酶的应用,其特征在于,用于制备干酪。

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【技术特征摘要】

1.一种从超临界葵粕中提取凝乳酶的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,预处理的方法为:将葵花籽粉碎、筛分、干燥,制得预处理的葵花籽。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,超临界二氧化碳萃取条件为:萃取压力25-45mpa、萃取温度35-55℃、二氧化碳流量22-28l/h。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,葵花籽饼粕中的残油率低于2%。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,氯化钠溶液的浓度为0.2-0.4mol/l;葵花籽饼粕与氯化钠溶液的质量体积比为1:5-15g/ml。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,...

【专利技术属性】
技术研发人员:张文斌蒋雨桥杨虎彭红春吴进富唐俊诚
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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