【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于，具体涉及屋尘螨主要户尘螨主要变应原der p1单克隆抗体对、杂交瘤细胞及应用。
技术介绍
1、屋尘螨(dermatophagoides pteronyssinus)是引起过敏性疾病的主要变应原。其中主要变应原der p 1，存在于螨的肠内容物和中肠组织中，是一种半胱氨酸蛋白酶，分子量25000，属于木瓜蛋白酶家族。现大约有95％屋尘螨过敏患者的血清与der p1反应。
2、它可能是通过半胱氨酸蛋白酶活性切断外周血t细胞表面的il-2受体，抑制t细胞的增殖和ifn-γ的分泌，或通过切断b细胞表面的cd23，消除ige合成的抑制信号、刺激ige的产生途径等来诱导过敏反应。
3、目前，临床上常使用标准化屋尘螨变应原来特异性诊断屋尘螨过敏和进行脱敏治疗。der p1作为屋尘螨的主要变应原，其在脱敏药物中的含量已成为评估药物有效性的重要指标。因此，制备一种可以检测der p1抗原的单克隆抗体，对过敏原提取液的质量控制和过敏原产品的标准化及相互比较的作用意义重大。
4、目前已上市了几种抗der p 1单克隆抗体，但他们与粉尘螨主要变应原der f 1均有不同程度的交叉反应，影响检测特异性。der p 1和der f 1同属于木瓜蛋白酶类半胱氨酸蛋白酶家族，氨基酸序列存在82％的序列相似性。但是它们的氨基酸残基在蛋白空间结构表面分布不均衡，其变应原表位并不完全重叠。
5、本专利技术使用半固体培养技术，成功制备了一种不与der f 1发生交叉反应的特异性抗der p 1单克隆抗体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供用于制备屋尘螨主要变应原der p 1单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞株制备的抗体对对屋尘螨主要变应原der p 1具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立屋尘螨主要变应原der p 1的免疫学检测方法。
2、本专利技术的另一个目的在于提供一种用于检测户尘螨主要变应原der p 1含量的抗体对，及抗体对在过敏原产品定量检测中的应用。
3、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
4、用于制备屋尘螨主要变应原der p 1单克隆抗体的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞于2024年4月17日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：cgmcc no.45843和cgmcc no.45844。
5、本专利技术利用纯化的天然der p 1蛋白免疫balb/c小鼠，取免疫合格的小鼠的脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞进行融合，在甲基纤维素半固体培养基上筛选杂交瘤细胞，使用elisa方法筛选阳性杂交瘤细胞，得到特异性分泌抗der p 1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
6、用于检测屋尘螨主要变应原der p 1含量的抗体对，其是将上述获得杂交瘤细胞腹腔注射经产balb/c雌性小鼠，采集腹水，进行单克隆抗体的纯化，获得抗der p 1的单克隆抗体dp1.10和df1.7。
7、如上所述的用于检测屋尘螨主要变应原der p1含量的抗体对在制备检测屋尘螨主要der p 1抗原制剂中的应用。
8、一种检测屋尘螨主要der p1抗原的检测试剂盒，其包括由保藏编号为cgmccno.45843的小鼠杂交瘤细胞制备的单克隆抗体作为捕获抗体，和由保藏编号为cgmccno.45844的小鼠杂交瘤细胞制备的单克隆抗体标记hrp，作为检测抗体。
9、一种检测屋尘螨主要变应原der p 1的方法，其包括如下步骤：
10、s1、将由杂交瘤细胞cgmcc no.45844制备的抗体作为捕获抗体包被elisa包被板；
11、s2、洗涤后用封闭液封闭后，洗涤；
12、s3、将待测液加入elisa包被板中，温育后，洗涤；
13、s4、加入hrp结合的由杂交瘤细胞cgmcc no.45845制备的抗体，进温育后，洗涤；
14、s5、加入tmb反应后，加入终止液终止，用酶标仪检测波长450nm处的吸光度值。
15、如上所述的方法，优选地，同时配置不同der p 1蛋白浓度的标准品，按上述方法检测后，绘制剂量-反应的标准曲线，之后将待测液的吸光度值代入标准曲线即可获得待测液中der p 1蛋白的浓度。
16、本专利技术的有益效果在于：
17、本专利技术提供的用于制备屋尘螨主要变应原der p1单克隆抗体的杂交瘤细胞，可制备出抗der p 1的单克隆抗体，其可特异性的识别并结合der p 1蛋白，特异性高，灵敏性强。在相同条件下，使用本专利技术提供的抗der p 1的单克隆抗体对可以用于elisa实验技术，高灵敏、快速的检测屋尘螨主要变应原der p 1。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.用于制备屋尘螨主要变应原Der p 1的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，杂交瘤细胞的保藏编号为：CGMCC No.45843和CGMCCNo.45844。
2.用于检测屋尘螨主要变应原Der p 1含量的抗体对，其特征在于，其是将杂交瘤细胞CGMCC No.45843和CGMCC No.45844分别腹腔注射经产BALB/c雌性小鼠，采集腹水，进行单克隆抗体的纯化，获得抗Der p 1的单克隆抗体DP1.10和DF1.7。
3.权利要求2所述的用于检测屋尘螨变应原Der p1含量的抗体对在制备检测屋尘螨主要Der p1抗原制剂中的应用。
4.一种检测屋尘螨主要变应原Der p 1的检测试剂盒，其包括由保藏编号为CGMCCNo.45843的小鼠杂交瘤细胞制备的单克隆抗体作为捕获抗体，和由保藏编号为CGMCCNo.45844的小鼠杂交瘤细胞制备的单克隆抗体标记HRP，作为检测抗体。
5.一种检测屋尘螨主要变应原Der p 1的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，同时配置不同De
...【技术特征摘要】
1.用于制备屋尘螨主要变应原der p 1的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，杂交瘤细胞的保藏编号为：cgmcc no.45843和cgmccno.45844。
2.用于检测屋尘螨主要变应原der p 1含量的抗体对，其特征在于，其是将杂交瘤细胞cgmcc no.45843和cgmcc no.45844分别腹腔注射经产balb/c雌性小鼠，采集腹水，进行单克隆抗体的纯化，获得抗der p 1的单克隆抗体dp1.10和df1.7。
3.权利要求2所述的用于检测屋尘螨变应原der p1含量的抗体对在制备检测屋尘螨主要der p1抗原制剂中的应用...
【专利技术属性】
技术研发人员：易喜连，尹佳，李俊达，孙劲旅，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。