定性检测真菌毒素的方法技术

技术编号：43234715 阅读：0 留言：0更新日期：2024-11-05 17:21

本发明专利技术公开了一种定性检测真菌毒素的方法。该方法包括：将待测样本进行前处理，以便得到样本提取液；采用高效液相色谱‑高分辨质谱，利用全扫描‑数据依赖型扫描模式对所述样本提取液进行检测，以便得到检测数据；基于所述检测数据、数据库和真菌毒素保留时间预测和移植模型，进行高置信靶向、可疑和非靶向定性筛查，以便准确获得所述待测样本的所包含的所述真菌毒素的种类。该方法能够对真菌毒素进行靶向、可疑和非靶向定性筛查，并且，检测灵敏、快速、置信度高。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析化学领域，具体地，涉及定性检测真菌毒素的方法。

技术介绍

1、真菌毒素是指真菌在生长和繁殖过程中产生的次生有毒代谢产物，目前发现的有400余种，多种真菌毒素被国际癌症研究机构(iarc)归类为致癌物，包括中国、欧盟和美国在内的全球许多国家和地区对谷物及其衍生产品中的真菌毒素进行了不同程度的监管及限制。由此，高分辨的真菌毒素筛查技术有待研究。

技术实现思路

1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种定性检测真菌毒素的方法，该方法筛查真菌毒素假阳性率和假阴性率低，筛查准确度高，适用于粮食中真菌毒素的筛查。

2、根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种定性检测真菌毒素的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：将待测样本进行前处理，以便得到样本提取液；采用高效液相色谱-高分辨质谱，利用全扫描-数据依赖型扫描模式对所述样本提取液进行检测，以便得到检测数据；基于所述检测数据、数据库和真菌毒素保留时间预测和移植模型，进行高置信靶向、可疑和非靶向定性筛查，以便准确获得所述待测样本的所包含的所述真菌毒素的种类。

3、根据本专利技术实施例的定性检测真菌毒素的方法，是一种基于高效液相色谱-高分辨质谱仪器扫描的待测样本中真菌毒素靶向、可疑筛查方法，筛查的假阳性率和假阴性率低，准确度高，适用于复杂基质，例如粮食中真菌毒素的筛查。

4、另外，根据本专利技术上述实施例的一种定性检测真菌毒素的方法，还

5、根据本专利技术的实施例，所述前处理包括：将所述待测样本与提取溶液接触，进行浸泡，以便得到浸泡液；将所述浸泡液进行震荡提取，离心，以便得到第一上清液和沉淀；以及将所述沉淀与所述提取溶液接触，进行所述震荡提取，离心，以便得到第二上清液，所述第一上清液和所述第二上清液构成所述样本提取液。

6、根据本专利技术的实施例，所述提取溶液为乙腈和甲酸的水溶液，其中，乙腈、水和甲酸的体积比为80：19.9：0.1。

7、根据本专利技术的实施例，所述高效液相色谱-高分辨质谱的色谱检测条件：色谱柱：acquity uplc hss t3，规格：2.1mm×50mm，1.8μm；流速：0.3ml·min-1；进样体积：5μl；柱温：40℃；样品温度10℃。

8、根据本专利技术的实施例，所述色谱的流动相：a：含0.1％甲酸和2mm ch3coonh4的水溶液；b：含0.1％甲酸和2mm ch3coonh4的甲醇溶液。

9、根据本专利技术的实施例，所述色谱的洗脱为梯度洗脱。

10、根据本专利技术的实施例，所述梯度洗脱条件为0-1分钟，95％a；1-9分钟，(95-0)％a；9-10分钟，0％a；10-11分钟，(0-95)％a；11-13分钟，95％a。

11、根据本专利技术的实施例，所述高效液相色谱-高分辨质谱的质谱检测条件：扫描模式：全扫描-数据依赖型扫描(full mass-ddms2)；离子化模式：hesi正负切换；离子源参数：鞘气流速50a.u.，辅助气流速12a.u，吹扫气流速2a.u.；喷雾电压：2kv；离子传输管温度：350℃；辅助气加热温度：300℃；s lens rf水平：80。

12、根据本专利技术的实施例，所述真菌毒素在所述质谱检测中以[m+h]+、[m+nh4]+、[m+k]+、[m+na]+、[m-h]-及[m+ch3coo]-作为所述靶向筛查的筛查离子。

13、根据本专利技术的实施例，检测碰撞能为15v、25v、35v、45v、55v下的碎片离子。

14、根据本专利技术的实施例，采用机器学习，高斯过程回归(gpr)算法，建立真菌毒素保留时间预测和移植模型。

15、根据本专利技术的实施例，所述数据库利用tracefinder工作站进行所述靶向筛查。

16、根据本专利技术的实施例，所述靶向筛查的参数包括峰面积阈值、质量偏差允许范围、保留时间窗口阈值、同位素分布相似度和同位素分布相似度。

17、根据本专利技术的实施例，所述峰面积阈值：100000，所述质量偏差允许范围：5ppm；所述保留时间窗口阈值：0.3min；所述同位素分布相似度：70；碎片离子个数：2个。

18、本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。

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【技术保护点】

1.一种定性检测真菌毒素的方法，其特征在于，包括

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理包括：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述提取溶液为乙腈和甲酸的水溶液，其中，乙腈、水和甲酸的体积比为80:19.9:0.1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱-高分辨质谱的色谱检测条件：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱的流动相：A：含0.1％甲酸和2mMCH3COONH4的水溶液；B：含0.1％甲酸和2mM CH3COONH4的甲醇溶液，

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱-高分辨质谱的质谱检测条件：

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述真菌毒素在所述质谱检测中以[M+H]+、[M+NH4]+、[M+K]+、[M+Na]+、[M-H]-及[M+CH3COO]-作为所述靶向筛查的筛查离子。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测碰撞能为15V、25V、35V、45V和55V下的碎片离子。