【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及hror1的抗原结合蛋白、双特异性抗原结合蛋白、编码该抗原结合蛋白的核酸分子、载体、细胞、药物分子，以及它们的用途。
技术介绍
1、受体酪氨酸激酶孤儿受体-1(ror1)与同家族成员受体酪氨酸激酶孤儿受体-2(ror2)隶属于受体酪氨酸激酶(rtks)家族，都是近期受关注的肿瘤靶点。ror1和ror2结构相似，均为i型跨膜蛋白，成熟的全长蛋白包含由3个不同结构域(ig-like、frizzled和kringle结构域)的胞外区、跨膜区和胞内区组成，胞内区包含一个酪氨酸激酶结构域、两个富含丝氨酸/苏氨酸的结构域和一个富含脯氨酸的结构域。ror1和ror2都在多种肿瘤组织中高表达，但ror2在一些正常组织中也有低中程度的表达，而ror1尽管在胚胎组织中可检测，在成年人正常组织中几乎不表达，除了睾丸、子宫、肺、膀胱和结肠里有很低水平的表达(clin cancer res 2008；14(2)，doi:10.1158/1078-0432.ccr-07-1823)，因而被认为是一个很好的肿瘤靶点。
2、ror1在血液瘤和实体瘤中都有较为广泛的表达。例如，ror1在慢性淋巴细胞白血病(cll)、一些急性淋巴细胞白血病(all)、和慢性套细胞淋巴瘤(cml)等血液瘤中高表达，且ror1在多种实体瘤中如肉瘤、卵巢癌、肾细胞癌、头颈癌、乳腺癌、肺癌、恶性间皮瘤、结肠癌、神经母细胞瘤、黑色素瘤和其它肿瘤组织中高表达。ror1高表达与癌症如cll和卵巢癌病程加快及预后不良相关(sci rep.2014jul24；4:5811
3、如前所述，ror1在肿瘤中有特异性表达且有可能促进肿瘤生长，因而ror1可视为较好的癌症疗法药物靶标，已有工作开发ror1特异性抗体的靶标。因ror1在不同哺乳动物物种之间具有高同源性，其胞外区氨基酸序列人和食蟹猴完全相同，在人和小鼠之间96.8％相同，人和大鼠之间96.6％相同。因而，通过标准技术如动物免疫产生针对这个靶标的高亲和力抗体具有一定的困难。
4、靶向ror1的策略主要包括单抗、双抗、抗体偶联药物和car-t，目前尚无靶向ror1的产品得到临床确证。此外，ror1的胞外区具有三个不同的结构域，进入临床研究阶段的三个靶向ror1抗体偶联药物中vls-101和nbe002靶向ig-like结构域，lcb71靶向frizzled结构域。而特异性识别不同结构域或同一结构域的不同表位有可能带来不一样的亲和力、内吞效率或生物性功能，特别是识别不同表位的不同抗体组成的双抗也许会增加抗体的功能特性。另外，现有adc产品都有安全性和耐药性问题。
技术实现思路
1、本专利技术主要目的在于提供能够与hror1中特异性结合的抗原结合蛋白，并且具有很好的抗原结合活性。
2、本专利技术的第一方面涉及分离的抗原结合蛋白，能够结合hror1，含有a～o任一项：
3、a.具有第一重链可变区，含有氨基酸序列为tyams的hcdr1，氨基酸序列为sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列为yslmveahwyfdv的hcdr3，
4、b.具有第二重链可变区，含有氨基酸序列为syams的hcdr1，氨基酸序列为sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列为gysnyvdwyfdv的hcdr3，
5、c.具有第三重链可变区，含有氨基酸序列为dytmh的hcdr1，氨基酸序列为gidpnyggtnynekfkd的hcdr2，氨基酸序列为ddgyyedyfdy的hcdr3，
6、d.具有第四重链可变区，含有氨基酸序列为sywie的hcdr1，氨基酸序列为eilpgsgntqnnekfkg的hcdr2，氨基酸序列为egrrshffdy的hcdr3，
7、e.具有第五重链可变区，含有氨基酸序列为ryams的hcdr1，氨基酸序列为sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列为gyygnndwyfdv的hcdr3，
8、f.具有第一轻链可变区，含有氨基酸序列为kasqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列为ranrlvd的lcdr2，氨基酸序列为lqydefpyt的lcdr3，
9、g.具有第二轻链可变区，含有氨基酸序列为katqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列为rpnrlvd的lcdr2，氨基酸序列为lqydefpyt的lcdr3，
10、h.具有第三轻链可变区，含有氨基酸序列为hasqgissnig的lcdr1，氨基酸序列为hgtnled的lcdr2，氨基酸序列为vqyaqfpyt的lcdr3，
11、i.具有第四轻链可变区，含有氨基酸序列为kssqsllnssnqknyla的lcdr1，氨基酸序列为fastres的lcdr2，氨基酸序列为qqhysspwt的lcdr3，
12、j.具有第五轻链可变区，含有氨基酸序列为kasqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列为ranslvd的lcdr2，氨基酸序列为lqfdefpyt的lcdr3，
13、k.具有a项所述的第一重链可变区和具有f项所述的第一轻链可变区，
14、l.具有b项所述的第二重链可变区和具有g项所述的第二轻链可变区，
15、m.具有c项所述的第三重链可变区和具有h项所述的第三轻链可变区，
16、n.具有d项所述的第四重链可变区和具有i项所述的第四轻链可变区，
17、o.具有e项所述的第五重链可变区和具有j项所述的第五轻链可变区。
18、本专利技术第一方面的一些实施例中，具有鼠源的框架区或人源的框架区。
19、本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的框架区为igg框架区。
20、本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的人源的框架区具有相对于鼠源的框架区的一个或多个位点的回复突变。
21、本专利技术第一方面的一些实施例中，还具有恒定区。
22、本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的恒定区具有lala突变。
23、本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的a～e、k～o中的任一项的重链恒定区含有c220s、a121c、v205c、k149c、d265c、s239c、a330c、s44本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.分离的抗原结合蛋白，能够结合hROR1，其特征在于含有a～o任一项：
2.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架区或人源的框架区。
3.如权利要求2所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的框架区为IgG框架区。
4.如权利要求2所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的人源的框架区具有相对于鼠源的框架区的一个或多个位点的回复突变。
5.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于还具有恒定区。
6.如权利要求5所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的a～e、k～o中的任一项的重链恒定区含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一个或多个突变。
7.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
8.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的重链可变区具有S62Q、S62A、S62N、S62E、S62V、S62Y、S62F或S62K突变。
9.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其
10.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有D56E、D56Q、D56T或D56Y突变。
11.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有S31A、S31Q、S31L、S31V、S31E、S31Y、S31F或S31K突变。
12.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有T57A、T57Q、T57L、T57V、T57E、T57Y、T57F或T57K突变。
13.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有S27A、S27Q、S27L、S27V、S27E、S27Y、S27F、S27K突变。
14.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于具有氨基酸序列如SEQ ID No.53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、65、73、75、78、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、90、91、92、93、134或135任一所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID No.64、66、67、68、70、71、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、112、113、114、115、116、117、119、120、121、122或123任一所示的轻链。
15.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于选自抗体Ab-1～5中的任一项，其中，
16.分离的双特异性抗原结合蛋白，能够结合hROR1，其特征在于具有：
17.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架区或人源的框架区。
18.如权利要求17所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的框架区为IgG框架区。
19.如权利要求17所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的人源的框架区具有相对于鼠源的框架区的一个或多个位点的回复突变。
20.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于还具有恒定区。
21.如权利要求20所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的第一抗原结合片段的重链恒定区含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一个或多个突变。
22.如权利要求20所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的第二抗原结合片段的重链恒定区含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一个或多个突变。
23.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的双特异性抗原结合蛋白为IgG样或非IgG样。
24.如权利要求23述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的IgG样抗原结合蛋白选自DVD-Ig双特异性抗原结合蛋白、IgG-scFv双特异性抗原结合蛋白或CrossMAb双特异性抗原结合蛋白。
25.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于具有p、q、r、s中的任一项：
26.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于选自抗体Ab-6～9中的任一项，其中，
27.核酸分子，其特征在于用于编码权利要求1～15任一所述的抗原结合蛋白或用于编码权利要求16～...
【技术特征摘要】
1.分离的抗原结合蛋白，能够结合hror1，其特征在于含有a～o任一项：
2.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架区或人源的框架区。
3.如权利要求2所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的框架区为igg框架区。
4.如权利要求2所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的人源的框架区具有相对于鼠源的框架区的一个或多个位点的回复突变。
5.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于还具有恒定区。
6.如权利要求5所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的a～e、k～o中的任一项的重链恒定区含有c220s、a121c、v205c、k149c、d265c、s239c、a330c、s442c中的一个或多个突变。
7.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
8.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的重链可变区具有s62q、s62a、s62n、s62e、s62v、s62y、s62f或s62k突变。
9.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有g57a、g57s、g57n或g57l突变。
10.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有d56e、d56q、d56t或d56y突变。
11.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有s31a、s31q、s31l、s31v、s31e、s31y、s31f或s31k突变。
12.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有t57a、t57q、t57l、t57v、t57e、t57y、t57f或t57k突变。
13.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于所述的轻链可变区具有s27a、s27q、s27l、s27v、s27e、s27y、s27f、s27k突变。
14.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于具有氨基酸序列如seq id no.53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、65、73、75、78、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、90、91、92、93、134或135任一所示的重链，和氨基酸序列如seq id no.64、66、67、68、70、71、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、112、113、114、115、116、117、119、120、121、122或123任一所示的轻链。
15.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于选自抗体ab-1～5中的任一项，其中，
16.分离的双特异性抗原结合蛋白，能够结合hror1，其特征在于具有：
17.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架区或人源的框架区。
18.如权利要求17所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的框架区为igg框架区。
19.如权利要求17所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于所述的人源的框架区具有相对于鼠源的框架区的一个或多个位点的回复突变。
20.如权利要求16所述的双特异性抗原结合蛋白，其特征在于还具有恒定区。
21.如权利要求20所述的双特异...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹斌，钟琛，刘绍军，杜平，
申请(专利权)人：泰诚思上海生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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