【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米颗粒疫苗研究领域，具体涉及一种低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体的制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，新型冠状病毒，流感病毒，呼吸道合胞病毒，肺炎支原体……等各类病原体威胁了人类的健康。非洲猪瘟、猪流行性腹泻、口蹄疫、禽流感、猪气喘病……等各类动物疫病影响了肉品质的安全以及养殖业的发展。
2、疫苗是疫病防控的最有效的手段。传统的疫苗以减毒活疫苗和灭活苗为主。随时科学的发展，人们对病原本质的认知不断提升，各类疫苗制备技术手段也在更新换代。安全，高效的精准化疫苗越来越受到青睐。
3、铁蛋白(ferritin)是一类各个物种都存在，由24个亚基组成，可以自组织装成内腔8nm，外径12nm笼状颗粒的蛋白质。由于人体或者动物也具有自身的铁蛋白，而如若使用与自身蛋白同源性较高的蛋白作为疫苗载体进行多次免疫，则容易产生较强的自身免疫反应。
4、现有研究发现，铁蛋白作为疫苗载体时，易产生自身免疫反应，且免疫增强作用较弱，需要额外添加佐剂。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种适用于各类疫苗的低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体，既不易刺激机体产生自身免疫反应，又能具有高效的免疫增强作用。
2、本专利技术也提供该低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体的制备方法。
3、本专利技术也提供所述低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体的应用。
4、本专利技术的目的采用如下技术方案实现：
5、一种低
6、在本专利技术中，所述螺原体铁蛋白是氨基酸序列如seq id no.1所示的中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第4-174为氨基酸序列，且所述中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第7位氨基酸q突变成e。
7、在本专利技术中，所述spycatcher003可以替换为spycatcher、spycatcher002、spycatcher003或snoopcatcher；所述伸展肽序列为sqvrqnfh；所述linker选自(gss)n，(gs)n，(gssgs)n，其中n为大于等于1的任意自然数。
8、在本专利技术中，所述低敏性铁蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
9、在本专利技术中，所述锰离子与低敏性铁蛋白的摩尔比为10:1-5:1。
10、本专利技术还提供所述纳米疫苗载体的制备方法，在厌氧环境下，将氯化锰溶液和双氧水溶液滴加到所述低敏性铁蛋白溶液中，进行反应，反应结束后用柠檬酸钠螯合游离的锰离子，离心，分离上清液，得到所述纳米疫苗载体。
11、在本专利技术中，所述低敏性铁蛋白溶液的浓度为0.5-5mg/ml，还含有100-400mm的nacl，ph为8.2-8.7；优选，所述氯化锰的浓度为10-15mm,双氧水的体积百分浓度为25-35％，氯化锰和双氧水滴到所述低敏性铁蛋白溶液中的流速为1.5-2.1ml/h；优选，反应温度为60-70℃，反应时间为0.5～3小时，反应过程中ph值维持在8.2-8.7。
12、在本专利技术中，柠檬酸钠的浓度为300mm，与反应溶液的添加比例为体积比1:60
13、本专利技术还提供所述的低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体的制备方法制备所得的纳米载体在疫苗上的应用。
14、在本专利技术中，所述低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体通过spytag003与抗原相连，得到上述疫苗活性成分；所述spytag003可以替换为spytag、spytag002、spytag003、snoop tag、snooptag或dogtag。
15、相较于现有技术，本专利技术的有益效果如下：本专利技术提供了一种可用于疫苗研究的低敏性纳米颗粒展示平台，此纳米展示平台可以通过分子胶水偶联不同抗原，包括人类病原体和动物病原体的各类抗原，该纳米展示平台不仅可以作为疫苗的递送系统，还可以负载锰离子佐剂，具备自佐剂效应，增强疫苗的免疫效果。因此，该低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体在疫苗研发方面具有良好的应用前景。
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1.一种低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体，其特征在于，是负载有锰佐剂的低敏性铁蛋白；所述低敏性铁蛋白自N端至C端由SpyCatcher003、linker、伸展肽和螺原体铁蛋白组成。
2.根据权利要求1所述纳米疫苗载体，其特征在于所述螺原体铁蛋白是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第4-174为氨基酸序列，且所述中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第7位氨基酸Q突变成E。
3.根据权利要求2所述纳米疫苗载体，其特征在于所述SpyCatcher003可以替换为SpyCatcher、SpyCatcher002或SnoopCatcher；所述伸展肽序列为SQVRQNFH；所述linker选自(GSS)n，（GS）n，(GSSGS)n，其中n为大于等于1的任意自然数。
4.根据权利要求3所述纳米疫苗载体，其特征在于所述低敏性铁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求4所述纳米疫苗载体，其特征在于上述锰离子与低敏性铁蛋白的摩尔比为10:1-5:1。
6.根据权利要求1所述纳米疫苗载体的
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述低敏性铁蛋白溶液的浓度为0.5-5mg/ml，还含有100-400mM的NaCl，pH为8.2-8.7；优选，所述氯化锰的浓度为10-15mM, 双氧水的体积百分浓度为25-35%，氯化锰和双氧水滴到所述低敏性铁蛋白溶液中的流速为1.5-2.1ml/h；优选，反应温度为60-70℃，反应时间为0.5~3小时，反应过程中PH值维持在8.2-8.7。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，柠檬酸钠的浓度为300mM，与反应溶液的添加比例为体积比1:60。
9.根据权利要求1所述的低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体的制备方法制备所得的纳米载体在疫苗上的应用。
10.根据权利要求9上述原因，其特征在于，所述低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体通过SpyTag003与抗原相连，得到上述疫苗活性成分；所述SpyTag003可以替换为SpyTag、SpyTag002、SpyTag003、snoop tag、SnoopTag或DogTag。
...【技术特征摘要】
1.一种低敏性负载锰佐剂的铁蛋白纳米疫苗载体，其特征在于，是负载有锰佐剂的低敏性铁蛋白；所述低敏性铁蛋白自n端至c端由spycatcher003、linker、伸展肽和螺原体铁蛋白组成。
2.根据权利要求1所述纳米疫苗载体，其特征在于所述螺原体铁蛋白是氨基酸序列如seq id no.1所示的中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第4-174为氨基酸序列，且所述中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的第7位氨基酸q突变成e。
3.根据权利要求2所述纳米疫苗载体，其特征在于所述spycatcher003可以替换为spycatcher、spycatcher002或snoopcatcher；所述伸展肽序列为sqvrqnfh；所述linker选自(gss)n，（gs）n，(gssgs)n，其中n为大于等于1的任意自然数。
4.根据权利要求3所述纳米疫苗载体，其特征在于所述低敏性铁蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5.根据权利要求4所述纳米疫苗载体，其特征在于上述锰离子与低敏性铁蛋白的摩尔比为10:1-5:1。
6.根据权利要求1所述纳米疫苗载体的制备方法，其特征在于，还包括，在厌氧环境下，将氯化锰溶液和双氧水溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈蓉，冯志新，张珍珍，邵国青，谢星，韦艳娜，张磊，郝飞，马孙婷，刘蓓蓓，袁厅，甘源，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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