【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及氨肽酶aps1-f316m、氨肽酶aps1-f316k及其应用，属于功能酶。
技术介绍
1、氨肽酶是一类能够催化切割肽链n端氨基酸的外切蛋白酶，其在食品工业、医药和生物
拥有广泛的应用前景，特别是在食品加工过程中，氨肽酶常用于降解蛋白质水解过程中产生的苦味肽，从而改善食品的口感。不同食物来源的蛋白氨基酸组成差异大，在经过内切蛋白酶处理后暴露出的疏水性氨基酸种类（包括亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸和缬氨酸等）和数量有所不同。因此，针对特定蛋白的水解过程，选择合适的氨肽酶尤为重要。
2、目前已报道的氨肽酶大多仅对亮氨酸或脯氨酸底物具有较高的水解活性，显然，这种单一的底物选择性限制了氨肽酶在不同蛋白质降解过程中的广泛应用。针对不同食物来源的蛋白质，考虑实际酶解条件下疏水性氨基酸的暴露情况，定向改造氨肽酶的底物选择性，为不同苦味肽提供对多种氨基酸都具有高水解活力的氨肽酶，将有助于最大程度降低苦味，提升品质。
3、半理性设计（semirational design）是一种基于对酶的序列、结构、催化机理等信息有一定理解的基础上，利用计算机辅助设计进行有目的性的改造方法。半理性设计结合了理性设计和非理性设计的优点，结合了实验和计算方法，通过迭代和优化过程，通过对酶的结构和功能进行深入研究，预测和优化酶的活性。
技术实现思路
1、针对上述现有技术，本专利技术提供了氨肽酶aps1-f316m、氨肽酶aps1-f316k，以及它们的应用。>
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、氨肽酶aps1-f316m，氨基酸序列如seq id no.5所示。
4、所述氨肽酶aps1-f316m在降解苦味肽中的应用，在制备降解苦味肽的制剂中的应用。进一步地，所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或精氨酸中的任意一种或两种以上，优选丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸中的任意一种或两种以上。
5、氨肽酶aps1-f316k，氨基酸序列如seq id no.3所示。
6、所述氨肽酶aps1-f316k在降解苦味肽中的应用，在制备降解苦味肽的制剂中的应用。进一步地，所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸或精氨酸中的任意一种或两种以上，优选苯丙氨酸或/和亮氨酸。
7、本专利技术在氨肽酶aps1的基础上，对活性位点进行定点突变，得到了两种突变酶：氨肽酶aps1-f316m和氨肽酶aps1-f316k。实验表明，相比于突变前，氨肽酶aps1-f316m对丙氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸等带疏水性氨基酸的底物的催化活性均有大幅度的提升，且在不同nacl浓度下展示出较高的稳定性，具有良好的耐盐性和稳定性，适用于高盐发酵食品的生产。氨肽酶aps1-f316k对苯丙氨酸、亮氨酸底物的催化活性均有大幅度的提升。
8、本专利技术通过定点突变改变了氨肽酶aps1的底物特异性和催化活性，拓宽了其在食品工业中的应用前景，能够最大程度降低苦味并提升食品品质，为氨肽酶在食品工业中的应用提供了理论和实践支持。
9、本专利技术使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种氨肽酶APs1-F316M，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
2.权利要求1所述的氨肽酶APs1-F316M在降解苦味肽中的应用，或在制备降解苦味肽的制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或精氨酸中的任意一种或两种以上。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸中的任意一种或两种以上。
5.一种氨肽酶APs1-F316K，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
6.权利要求5所述的所述氨肽酶APs1-F316K在降解苦味肽中的应用，或在制备降解苦味肽的制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸或精氨酸中的任意一种或两种以上。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为苯丙氨酸或/和亮氨酸。p>...
【技术特征摘要】
1.一种氨肽酶aps1-f316m，其特征在于：氨基酸序列如seq id no.5所示。
2.权利要求1所述的氨肽酶aps1-f316m在降解苦味肽中的应用，或在制备降解苦味肽的制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或精氨酸中的任意一种或两种以上。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述苦味肽暴露出的疏水性氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸中的任意一种或两...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛相朝，董浩，张铭月，孙建安，薛长湖，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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