【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及用于鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii的引物对、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、多种蚜虫可为害玉米植株，其中玉米蚜rhopalosiphum maidis是危害玉米的优势种。玉米蚜不仅为害玉米，还可为害水稻及多种禾本科杂草。玉米蚜除直接取食作物叶片汁液，还可分泌蜜露影响作物光合作用。更严重的是，玉米蚜可传播玉米矮花叶病毒、大麦黄矮病毒、甘蔗花叶病毒等多种病毒，甚至还可将病毒从玉米传播至甘蔗、水稻等其他禾本科作物上。目前玉米蚜的危害逐年加重，已经成为我国许多玉米、水稻种植地区的优势叶面害虫，不仅影响作物的产量，也严重降低作物的品质。研究发现，玉米蚜对多种化学农药产生抗药性，但目前其防治措施仍以化学农药为主，因此研究并开发玉米蚜的新型绿色防控技术十分必要。
2、有研究表明共生菌可促进宿主昆虫对植物病毒的传播，如烟粉虱共生菌hamiltonella、arsenophonus和蚜虫buchnera，因此对蚜虫共生菌多样性及功能研究将会为“以菌治虫”的防治策略提供新的思路。目前玉米蚜共生菌多样性研究比较少，暂未发现关于玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii的鉴定方法，因此有必要开发鉴定玉米蚜共生菌的引物对、试剂盒及其应用技术。
技术实现思路b>
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii的引物对、试剂盒及其应用。通过多重pcr反应同时鉴定玉米蚜样品中三种优势共生菌的感染情况，具有节省时间、降低成本、节省珍贵实验样本等优点。
2、本专利技术的第一个目的是提供用于鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobactersoli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii的引物组，所述引物组包括：
3、用于鉴定acinetobacter soli的引物：
4、as-f：5'-ggctagagtgtgggagagga-3'(seq id no.1)；
5、as-r：5'-gcgccactaaagcctcaaag-3'(seq id no.2)；
6、用于鉴定sphingomonas paucimobilis的引物：
7、sp-f：5'-cacactgggactgagacacg-3'(seq id no.3)；
8、sp-r：5'-acgcccagtaattccgaaca-3'(seq id no.4)；
9、用于鉴定acidovorax wautersii的引物：
10、aw-f：5'-ggtgatgtaagacagatgtg-3'(seq id no.5)；
11、aw-r：5'-ggtgttcctccgcatatc-3'(seq id no.6)。
12、本专利技术的第二个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物组。
13、优选的，所述试剂盒还包括2×taq mix和ddh2o。
14、本专利技术的第三个目的是提供上述的引物组或试剂盒在鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii中的应用。
15、本专利技术的第四个目的是提供一种鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobactersoli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii的方法，包括以下步骤：
16、(1)提取待测玉米蚜样本的总dna；
17、(2)以提取的dna为模板，使用上述的引物组进行多重pcr扩增反应；
18、(3)将多重pcr扩增产物进行电泳分析。
19、优选的，步骤(2)中的多重pcr反应体系包括：2×taq mix 12.5μl、as-f/r各0.5μl、sp-f/r各0.5μl、aw-f/r各0.5μl、ddh2o 8.5μl，dna模版1.0μl，共25μl。
20、优选的，步骤(2)中的多重pcr反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸6s，34个循环；72℃延伸5min。
21、优选的，步骤(3)中的电泳分析具体为：当所述扩增产物含有211bp的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌acinetobacter soli；当所述扩增产物含有235bp的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌sphingomonas paucimobilis；当所述扩增产物含有134bp目的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌acidovorax wautersii。
22、本专利技术在检测玉米蚜共生菌多样性的基础上，通过对玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii进行引物设计，引物灵敏度分析及构建同时检测三种优势共生菌的多重pcr反应体系，在鉴定玉米蚜共生菌的前提下，简化玉米蚜优势共生菌鉴定流程。
23、该检测方法能提供提高检测效率，缩短检测时长，提供更准确有效的鉴别玉米蚜优势共生菌的引物对，能够在一个pcr反应体系中同时鉴定玉米蚜样品中三种优势共生菌的感染情况，具有节省时间、降低成本、节省珍贵实验样本等优势。
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1.用于鉴定玉米蚜三种优势共生菌Acinetobacter soli、Sphingomonaspaucimobilis、Acidovoraxwautersii的引物组，其特征在于，所述引物组包括：
2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2×Taq Mix和ddH2O。
4.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒在鉴定玉米蚜三种优势共生菌Acinetobacter soli、Sphingomonas paucimobilis、Acidovorax wautersii中的应用。
5.一种鉴定玉米蚜三种优势共生菌Acinetobacter soli、Sphingomonaspaucimobilis、Acidovoraxwautersii的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中的多重PCR反应体系包括：2×Taq Mix 12.5μL、AS-F/R各0.5μL、SP-F/R各0.
7.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中的多重PCR反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸6s，34个循环；72℃延伸5min。
8.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(3)中的电泳分析具体为：当所述扩增产物含有211bp的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌Acinetobacter soli；当所述扩增产物含有235bp的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌Sphingomonas paucimobilis；当所述扩增产物含有134bp目的片段表示所述玉米蚜样本含有共生菌Acidovoraxwautersii。
...【技术特征摘要】
1.用于鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonaspaucimobilis、acidovoraxwautersii的引物组，其特征在于，所述引物组包括：
2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2×taq mix和ddh2o。
4.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒在鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonas paucimobilis、acidovorax wautersii中的应用。
5.一种鉴定玉米蚜三种优势共生菌acinetobacter soli、sphingomonaspaucimobilis、acidovoraxwautersii的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：成印洁，刘键柏，武韩，李继虎，常海龙，张逸飞，
申请(专利权)人：广东省科学院南繁种业研究所，
类型：发明
国别省市：
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