【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物载药，具体涉及一种靶向树突状细胞脂质纳米粒及其构建方法和应用。
技术介绍
1、dc细胞是体内功能最强的抗原提呈细胞，能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，能够刺激并致敏t细胞启动早期免疫反应，在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。目前，mrna疫苗技术已经成为肿瘤免疫治疗的一个很有前途的平台，其具有高效、安全、快速和高性价比等优势。mrna疫苗是通过特定的递送系统将表达抗原靶标的mrna导入体内，在体内表达出蛋白并刺激机体产生特异性免疫学反应，从而使机体获得免疫保护。相比传统疫苗，mrna疫苗生产工艺简单、开发速度快、无需细胞培养、成本低；且mrna疫苗无需进入细胞核，没有整合至宿主基因组的风险，半衰期可以通过修饰进行调整。但目前并未有特异性靶向dc的mrna疫苗出现，且由于mrna自身存在稳定性差、易被组织内的核酸酶降解、难以进入细胞、翻译效率较低等问题，影响了mrna疫苗作用的发挥，导致肿瘤的临床免疫治疗进展缓慢。
2、为了解决这些问题，一个合适的递送载体对mrna疫苗的稳定性和翻译效率起到非常关键的作用。目前，脂质纳米粒(lnp)是mrna的主要递送载体，可有效包裹和保护mrna在到达靶点前维持稳定、帮助mrna有效成分进入细胞、以及在mrna到达溶酶体前将其释放进入细胞质中。目前已有多种制备lnp的技术，但普遍面临稳定性差、递送效率低等问题。因此，开发一种特异性靶向修饰的lnp，使lnp具有靶向dc细胞的功能，实现dc细胞对该lnp的特异性摄取和转染，使mrna能在dc细胞内高效表达，提高mrna在dc
3、综上所述，构建一种特异性靶向具有靶向dc细胞的lnp，使mrna能在dc细胞内高效表达，同时不引起免疫系统出现更多炎症反应，具有良好稳定性，是推动mrna疫苗向前迈进的关键。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种靶向树突状细胞脂质纳米粒及其构建方法和应用，本专利技术通过添加能特定亲和toll样受体4(tlr4)拮抗剂进行配体修饰，以提供一种新的药物递送系统，解决mrna自身存在稳定性差、易被组织内的核酸酶降解、难以进入细胞、翻译效率较低等问题，实现树突状细胞对该脂质纳米粒的特异性摄取和转染，使载药mrna能在树突状细胞内高效表达，以此载药体系为基础可进一步开发多种新型mrna药物和/或疫苗，实现肿瘤免疫等靶向治疗。
2、第一方面，本专利技术提供了一种靶向树突状细胞脂质纳米粒，按质量份数计，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含100～500份阳离子脂质、1～150份二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)、10～300份胆固醇(cho)、1～100份dmg-peg2000和1.05～126份配体，所述配体选自toll样受体4拮抗剂。
3、进一步地，所述toll样受体4拮抗剂选自tlr4-1、tlr4-2、tlr4-3、crx-526、e5564、fp7中的一种或多种；
4、优选地，所述toll样受体4拮抗剂选自tlr4-1(商品名为iaxo-102)、tlr4-2(商品名为pe-dtpa)和/或tlr4-3(商品名为tocl)。
5、进一步地，所述阳离子脂质选自dlin-mc3-dma、dlin-dma、dlin-kc2-dma、c12-200、ckk-e12中的一种或多种；
6、优选地，所述阳离子脂质为dlin-mc3-dma；
7、优选地，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含150～300质量份阳离子脂质、25～100质量份二硬脂酰基磷脂酰胆碱、50～150质量份胆固醇、5～50质量份dmg-peg2000和1～100质量份配体。
8、进一步地，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒的平均粒径为70～300nm，pdi为0.05～0.5。
9、第二方面，本专利技术开发了所述靶向树突状细胞脂质纳米粒的构建方法，包括但不限于采用微流控法、乙醇注入法或spg膜乳化法进行构建。
10、进一步地，靶向树突状细胞脂质纳米粒的构建包括以下步骤：
11、s1、有机相配制
12、称取阳离子脂质、dspc、cho、dmg-peg2000和配体溶于有机溶剂中配制成有机相；
13、s2、水相配制
14、称取磷酸盐、柠檬酸三钠和无水柠檬酸中的一种或几种溶于水中，制成ph为3.5～7.5的缓冲液、过滤，得到水相；
15、s3、靶向树突状细胞脂质纳米粒的构建
16、将水相和有机相混合，收集脂质纳米粒置于pbs缓冲液中，然后浓缩得到靶向树突状细胞脂质纳米粒。
17、进一步地，所步骤s3的混合包括采用微流控法、注入法和spg膜乳化法中的任一种方法进行混合，所述微流控法采用微流控人字形微混合器芯片处理；所述注入法为在搅拌下向水相中滴加有机相；所述spg膜乳化法为将有机相在压力作用下透过spg膜与水相混合。
18、进一步地，所述步骤s1中配体浓度为0.0105～1.26mg/ml；
19、进一步地，所述步骤s1中脂质总浓度为2.57～10.27mg/ml，优选为5.14mg/ml；
20、进一步地，所述步骤s1中有机相中脂质和配体的总浓度为0.5～60μg/ml；
21、进一步地，所述步骤s1的有机溶剂选自无水乙醇、dmf、丙酮或dmso中的一种或多种。
22、进一步地，所述步骤s3中水相和有机相混合体积比为3～40:1。
23、进一步地，所述步骤s3的浓缩步骤采用包括但不限于透析袋、超滤管等装置进行。
24、第三方面，本专利技术提供了一种药物和/或疫苗，所述药物和/或疫苗采用靶向树突状细胞脂质纳米粒搭载mrna制备得到。
25、进一步地，药物和/或疫苗中所述靶向树突状细胞脂质纳米粒中阳离子脂质与mrna或药物活性成分的摩尔比为5～15:1。
26、进一步地，所述药物和/或疫苗用于肿瘤免疫治疗、传染病和自身免疫性疾病等，但不局限于所述疾病；
27、更进一步地，根据不同适应症，mrna可选择ova-mrna、sars-cov-2mrna、ox40mrna、gp100 mrna中的一种或多种；
28、进一步地，所述药物和/或疫苗的给药途径包括肌肉注射、皮内注射、皮下注射、静脉注射、结内注射、瘤内注射或口服。
29、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：...
【技术保护点】
1.一种靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含100～500质量份阳离子脂质、1～150质量份二硬脂酰基磷脂酰胆碱、10～300质量份胆固醇、1～100质量份DMG-PEG2000和1.05～126质量份配体，所述配体选自Toll样受体4拮抗剂。
2.根据权利要1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述Toll样受体4拮抗剂选自TLR4-1、TLR4-2、TLR4-3、CRX-526、E5564和FP7中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述阳离子脂质选自Dlin-MC3-DMA、DLin-DMA、DLin-KC2-DMA、C12-200和cKK-E12中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含150～300质量份阳离子脂质、25～100质量份二硬脂酰基磷脂酰胆碱、50～150质量份胆固醇、5～50质量份DMG-PEG2000和1～100质量份配体。
5.根据权利要求1所述
6.一种构建权利要求1～5任一项所述靶向树突状细胞脂质纳米粒的方法，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述靶向树突状细胞脂质纳米粒的构建方法，其特征在于，所步骤S3的混合包括采用微流控法、注入法和SPG膜乳化法中的任一种方法进行混合，所述微流控法采用微流控人字形微混合器芯片处理；所述注入法为在搅拌下向水相中滴加有机相；所述SPG膜乳化法为将有机相在压力作用下透过SPG膜与水相混合。
8.一种包含权利要求1～5任一项所述靶向树突状细胞脂质纳米粒的药物和/或疫苗，其特征在于，采用所述靶向树突状细胞脂质纳米粒搭载mRNA或药物活性成分。
9.根据权利要求8所述的药物和/或疫苗，其特征在于，所述药物和/或疫苗包括用于肿瘤、病毒感染、细菌感染、真菌感染和/或免疫缺陷性疾病的免疫性治疗和非免疫性治疗。
10.根据权利要求8所述的药物和/或疫苗，其特征在于，所述药物和/或疫苗的给药途径包括肌肉注射、皮内注射、皮下注射、静脉注射、结内注射、瘤内注射或口服。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含100～500质量份阳离子脂质、1～150质量份二硬脂酰基磷脂酰胆碱、10～300质量份胆固醇、1～100质量份dmg-peg2000和1.05～126质量份配体，所述配体选自toll样受体4拮抗剂。
2.根据权利要1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述toll样受体4拮抗剂选自tlr4-1、tlr4-2、tlr4-3、crx-526、e5564和fp7中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述阳离子脂质选自dlin-mc3-dma、dlin-dma、dlin-kc2-dma、c12-200和ckk-e12中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的靶向树突状细胞脂质纳米粒，其特征在于，所述靶向树突状细胞脂质纳米粒组成包含150～300质量份阳离子脂质、25～100质量份二硬脂酰基磷脂酰胆碱、50～150质量份胆固醇、5～50质量份dmg-peg2000和1～100质量份配体。
5.根据权利要求1所述的靶向树突状细胞脂质纳...
【专利技术属性】
技术研发人员：关世侠，郑育秀，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：
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