用于纯化、检测和定量残留的基于PEI的转染试剂的方法技术

技术编号：43214934 阅读：2 留言：0更新日期：2024-11-05 17:09

本发明专利技术涉及用于纯化、检测和定量残留的基于PEI的转染试剂的方法。本发明专利技术涉及用于对包含生物基质和本文所述的通式(I)的基于聚乙烯亚胺(PEI)的转染试剂的液体混合物进行酸水解的方法，其中所述生物基质包含使用所述基于PEI的转染试剂产生的重组病毒或病毒样颗粒，并且其中所述酸水解不降解所述基于PEI的转染试剂。本发明专利技术还涉及用于纯化、检测和/或定量如本文所述的通式(I)的基于PEI的转染试剂的方法。

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

技术实现思路

【技术保护点】

1.一种对包含生物基质和基于聚乙烯亚胺(PEI)的转染试剂的液体混合物进行酸水解的方法，

2.根据权利要求1所述的方法，其中W1、W2、W3和W4可以相同或不同，表示H、甲基、环丙基、异丙基、叔丁基、苯基、苄基、2-吡啶、3-吡啶或4-羟基苯乙基；或者其中(i)W1和W2或(ii)W2和W3或(iii)W3和W4一起形成稠合的苯基；被甲基(特别是两个甲基)、甲氧基、羧基苯基或Cl取代的稠合的苯基；稠合的萘；稠合的2-吡啶；或稠合的3-吡啶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中X表示H。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述通式(I)的基于PEI的转染试剂具有定义为(n/(m+n))*100的接枝比，并且其中所述接枝比为1至50％，优选5至30％，更优选为20％。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述PEI聚合物主链的平均分子量(Mw)为1kDa至50kDa，优选5kDa至30kDa或10kDa至25kDa，更优选所述PEI聚合物主链的平均分子量(Mw)为8kDa、10kDa、15kDa、22kDa、25kDa或30kDa，优选22kDa。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述通式(I)的基于PEI的转染试剂选自以下化合物：

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述生物基质选自：细胞培养基，特别是真核细胞的培养基，特别是悬浮细胞或贴壁细胞的培养基，缓冲液，在重组病毒的制造和纯化过程中使用的溶液，以及包含纯化的制造的重组病毒的最终组合物，所述纯化的制造的重组病毒在包含药学上可接受的缓冲液和赋形剂的最终制剂中。

8.一种纯化、检测和/或定量根据权利要求1-6中任一项所定义的通式(I)的基于聚乙烯亚胺(PEI)的转染试剂的方法，其中所述通式(I)的基于PEI的转染试剂包含在含有生物基质的液体混合物中，

9.根据权利要求8所述的方法，其中步骤(c)使用高效液相色谱(HPLC)或超高效液相色谱(UHPLC)分析技术、优选UHPLC进行。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中步骤(c)的所述通式(I)的基于PEI的转染试剂在检测限(LOD)为1ppm-1000ppm和/或定量限(LOQ)为1ppm-1000ppm下进行检测。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述通式(I)的基于PEI的转染试剂在重组病毒的制造过程中在生物基质中是可检测的，其中所述生物基质选自：细胞培养基，特别是真核细胞的培养基，特别是悬浮细胞或贴壁细胞的培养基，缓冲液，在重组病毒的制造和纯化过程中使用的溶液，以及包含纯化的病毒的最终组合物，所述纯化的病毒在包含药学上可接受的缓冲液和赋形剂的最终制剂中。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述重组病毒选自腺相关病毒(AAV)、慢病毒(LV)、腺病毒、溶瘤病毒和杆状病毒，优选为腺相关病毒(AAV)或慢病毒(LV)，更优选为腺相关病毒(AAV)。

13.根据权利要求6-12中任一项所述的方法，其中所述通式(I)的基于PEI的转染试剂为选自化合物01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、30、31、32、33和34的化合物，且所述重组病毒为腺相关病毒(AAV)。

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种对包含生物基质和基于聚乙烯亚胺(pei)的转染试剂的液体混合物进行酸水解的方法，

2.根据权利要求1所述的方法，其中w1、w2、w3和w4可以相同或不同，表示h、甲基、环丙基、异丙基、叔丁基、苯基、苄基、2-吡啶、3-吡啶或4-羟基苯乙基；或者其中(i)w1和w2或(ii)w2和w3或(iii)w3和w4一起形成稠合的苯基；被甲基(特别是两个甲基)、甲氧基、羧基苯基或cl取代的稠合的苯基；稠合的萘；稠合的2-吡啶；或稠合的3-吡啶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中x表示h。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述通式(i)的基于pei的转染试剂具有定义为(n/(m+n))*100的接枝比，并且其中所述接枝比为1至50％，优选5至30％，更优选为20％。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述pei聚合物主链的平均分子量(mw)为1kda至50kda，优选5kda至30kda或10kda至25kda，更优选所述pei聚合物主链的平均分子量(mw)为8kda、10kda、15kda、22kda、25kda或30kda，优选22kda。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述通式(i)的基于pei的转染试剂选自以下化合物：

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述生物基质选自：细胞培养基，特别是真核细胞的培养基，特别是悬浮细胞或贴壁细胞的培养基，缓冲液，在重组病毒的制造和纯化过程中使用的溶液，以及包含纯化的制造的重组病毒的最终组合物，所述纯化的制造的重组病毒在包含药学上可接受的缓冲液和赋...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·海拉尔，P·埃尔巴谢尔，Y·菲利普森，S·弗兰克，E·沃尔夫罗姆，
申请(专利权)人：宝利普拉斯生物转染公司，
类型：发明
国别省市：

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