【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物工程，具体涉及一种水稻黄单胞菌工程菌及其构建方法及应用。
技术介绍
1、农业在养活世界人口和创造收入方面发挥着重要作用。随着科技的不断发展，农业技术也发生着翻天覆地的变化，但全球每年因植物病害造成的粮食产量损失仍是巨大的。在目前的植物病害控制中，主要应用化学农药。由于化学农药具有毒性，对环境不友好，耐药病原体的发生，对现有农药的日益禁止以及新农药登记的减少，因此，研发出更好的药剂来防治植物病原微生物，提高农作物产量并保障未来粮食安全显得极为迫切，也为发展绿色农业保驾护航。生物防治是一种利用环境友好型微生物来防治病原微生物的新方法，包括噬菌体防治技术、微生物组技术等，但由于不同技术仍有不少问题待解决，未能大量推广。
2、细菌vi型分泌系统(type vi secretion system，t6ss)是一种可收缩的蛋白复合物，广泛分布于革兰氏阴性菌中，可将毒素蛋白质传递给邻近的细菌或真核细胞。抗菌效应物主要是抑制其他物种生长的毒素，有助于重构生态位。
3、目前利用细菌t6ss进行生物防治评估体系不完善，对植物营养生长之外的影响未知，如果能进行更全面的评估，如开花结果，就可以确保使用过程中的生态安全。利用细菌t6ss进行生物防治的底盘菌株不多，需要开发更多的底盘菌株，提高其多样性，降低病原菌的耐受性。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施方式有必要提供水稻黄单胞菌工程菌，该工程菌能够消杀病原菌的同时更具有生物安全性。
2、技术方案包括如
3、一种水稻黄单胞菌工程菌，相对于野生型水稻黄单胞菌，所述工程菌满足如下条件中的一个或者多个：
4、(1)t3ss失活；
5、(2)tlea基因和tlia基因缺失；或/和，tleb基因和tlib基因缺失。
6、在其中一个实施例中，所述工程菌中t3ss失活，tlea基因、tlia基因、tleb基因和tlib基因缺失。
7、在其中一个实施例中，所述野生型水稻黄单胞菌包括pxo99a菌株。
8、在其中一个实施例中，所述工程菌中hrcu基因缺失。
9、在其中一个实施例中，构建方法包括如下步骤：以野生型水稻黄单胞菌为出发菌，在出发菌中通过如下一种或多种方式获得：
10、(1)使t3ss失活；
11、(2)敲除tlea基因和tlia基因；或/和，敲除tleb基因和tlib基因。
12、在其中一个实施例中，使t3ss失活的步骤包括敲除hrcu基因。
13、在其中一个实施例中，敲除的方法包括同源重组交换法。
14、在其中一个实施例中，敲除hrcu基因的步骤包括：
15、将hrcu基因的上游基因片段和下游基因片段连接至自杀载体上，获得重组自杀质粒载体；
16、将所述重组自杀质粒载体导入至出发菌中，筛选hrcu基因敲除菌株。
17、在其中一个实施例中，敲除tlea基因、tlia基因、tleb基因和tlib基因包括如下步骤：
18、将tlia基因的上游基因片段和tleb基因的下游基因片段连接至自杀载体上，获得重组自杀质粒载体；
19、将所述重组自杀质粒载体导入至出发菌或hrcu基因敲除菌株中，筛选tlea、tlia、tleb和tleb基因敲除菌株。
20、所述的工程菌在如下中的用途：
21、(1)制备防治动物病原菌和植物病原菌的产品；
22、(2)制备防治植物病害的药剂。
23、在其中一个实施例中，所述动物病原菌包括e.coli daec 2787、e.coli etec h-10407、vibrio cholerae c6706和citrobacter rodentium中的一种或多种。
24、在其中一个实施例中，所述植物病原菌包括pseudomonas syringaepv.syringae、p.syringae pv.tomato、ralstonia solanacearum gmi1000中的一种或多种。
25、一种产品，所述产品包括所述的工程菌。
26、相对于现有技术，本申请具备如下有益效果：
27、本申请以水稻黄单胞菌为出发菌株，使t3ss丧失活性，使其丧失对植物的致病性；为了使其更具有生物安全性，本申请还敲除了水稻黄单胞菌中t6ss-2效应蛋白和免疫蛋白基因tlia、tlea、tlib、tleb，使其在丧失影响植物营养生长的同时，还消除了对植物开花结果的影响。本申请构建的工程菌株能够高效消杀病原菌，还具有高的生物安全性，是一株新的生物防治底盘菌株，拓宽了生物防治菌种库，还可以将其开发用于双子叶植物和单子叶植物的病虫害防治，在绿色农业领域具有广阔的应用前景。
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1.一种水稻黄单胞菌工程菌，其特征在于，相对于野生型水稻黄单胞菌，所述工程菌满足如下条件中的一个或者多个：
2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌中T3SS失活，tleA基因、tliA基因、tleB基因和tliB基因缺失。
3.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述野生型水稻黄单胞菌包括PXO99A菌株。
4.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌中hrcU基因缺失。
5.权利要求1-4任一项所述的工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，使T3SS失活的步骤包括敲除hrcU基因。
7.根据权利要求5或6所述的构建方法，其特征在于，敲除的方法包括同源重组交换法。
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，敲除hrcU基因的步骤包括：
9.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，敲除tleA基因、tliA基因、tleB基因和tliB基因包括如下步骤：
10.权利要求1-4任一
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述动物病原菌包括E.coli DAEC2787、E.coli ETEC H-10407、Vibrio cholerae C6706和Citrobacter rodentium中的一种或多种；
12.一种产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1-4任一项所述的工程菌。
...【技术特征摘要】
1.一种水稻黄单胞菌工程菌，其特征在于，相对于野生型水稻黄单胞菌，所述工程菌满足如下条件中的一个或者多个：
2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌中t3ss失活，tlea基因、tlia基因、tleb基因和tlib基因缺失。
3.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述野生型水稻黄单胞菌包括pxo99a菌株。
4.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌中hrcu基因缺失。
5.权利要求1-4任一项所述的工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，使t3ss失活的步骤包括敲除hrcu基因。
7.根据权利要求5或6所述...
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